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CRISPR/Cas9基因剪辑技术在乙型肝炎病毒感染治疗中的应用

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重庆医科大学学报 2017年第7期42卷 905-909页

作者：罗英英黄爱龙胡接力重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016

CRISPR/Cas9基因剪辑技术源于细菌及古细菌CRISPR介导的后天获得性免疫系统,通过引导RNA与靶DNA PAM序列特异性识别,引发Cas9核酸酶定点切割互补双链DNA,在基因剪辑方面具有制备简单、剪辑位点特异性高及易于同时剪辑多个基因位点等优势... 详细信息

CRISPR/Cas9基因剪辑技术源于细菌及古细菌CRISPR介导的后天获得性免疫系统,通过引导RNA与靶DNA PAM序列特异性识别,引发Cas9核酸酶定点切割互补双链DNA,在基因剪辑方面具有制备简单、剪辑位点特异性高及易于同时剪辑多个基因位点等优势,已被广泛应用于哺乳动物细胞基因剪辑。本文主要从CRISPR/Cas9技术作用原理和其抗乙型肝炎病毒感染作用及机制等方面进行综述。

关键词： CRISPR 基因剪辑乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA

体外培养细胞内乙肝病毒共价闭合环状DNA检测方法的建立

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重庆医科大学学报 2013年第12期38卷 1393-1397页

作者：黄荣陈江燕胡接力罗英英黄爱龙重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016

目的:建立一种体外培养细胞内乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)的检测方法。方法:Southern blot检测HBV复制中间体,以确认HepAD38、HepG2.2.15和P+P-细胞是否支持HBV复制;用Hirt法分别提取细胞内的去蛋白DNA(protein-free DNA,PF DNA),经加热变性处理,EcoRⅠ酶切,然后用Southern blot检测HBV cccDNA;用同样方法检测不同培养时间的HepAD38细胞内cccDNA,观察培养时间对cccDNA积累量的影响。结果:用Southern blot可在HepAD38、HepG2.2.15和P+P-细胞中检测到HBV复制中间体;Hirt法提取物经变性和酶切处理,可有效地将cccDNA与其他形式HBV DNA区分开;HepAD38、HepG2.2.15和P+P-细胞内均可检测到HBV cccDNA;HepAD38细胞在铺满后继续培养的时间较长时,其细胞内cccDNA的量较多。结论:成功建立了体外培养细胞内HBV cccDNA检测方法,该方法结合Hirt提取法和地高辛探针Southern blot方法,能可靠、准确地检测HBV cccDNA。

关键词：乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA Southern blot

小学数学解决问题中“问”“学”相长课堂构建的有效探析

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中国科技经济新闻数据库教育 2023年第11期 119-122页

作者：罗英英江西省鹰潭市第十二小学江西鹰潭335000

在教育改革的持续推动下,当下的教育从知识教学指向学生综合素养发展。为了促进这一目标更快的实现,教师要抓住问学课堂的作用,以问题为抓手,引发学生的深入思考,同时提升学生的综合能力。基于此,文章以小学数学为研究对象,首先简述了... 详细信息

在教育改革的持续推动下,当下的教育从知识教学指向学生综合素养发展。为了促进这一目标更快的实现,教师要抓住问学课堂的作用,以问题为抓手,引发学生的深入思考,同时提升学生的综合能力。基于此,文章以小学数学为研究对象,首先简述了问学课堂,而后分析了小学数学问学课堂开展的意义,其次指出了当下小学数学课堂存在的问题,最后对“问”“学”课堂的构建展开了深入的研究,期望在有效策略的指导和推动下引发学生对知识的深入思考,提升学生解决实际问题的能力。

关键词：小学数学解决问题 “问”“学”相长课堂构建

超高度近视有晶状体眼后房型人工晶状体植入术后残留近视的LASEK治疗效果

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中华实验眼科杂志 2017年第6期35卷 527-531页

作者：郑金华谷浩龙秋容肖桃罗英英贵州医科大学附属医院眼科贵阳550004

背景有晶状体眼后房型人工晶状体（PPC-ICL）植入术及有晶状体眼后房型散光人工晶状体（PPC—TICL）植入术是矫正高度近视及近视合并散光的主要方法，但术后常残留低度近视，需进一步行准分子激光上皮下角膜磨镶术（LASEK）矫治残留近... 详细信息

背景有晶状体眼后房型人工晶状体（PPC-ICL）植入术及有晶状体眼后房型散光人工晶状体（PPC—TICL）植入术是矫正高度近视及近视合并散光的主要方法，但术后常残留低度近视，需进一步行准分子激光上皮下角膜磨镶术（LASEK）矫治残留近视，这种疗法的有效性和安全性值得关注。目的观察PPC-ICL或PPC—TICL植入术治疗超高度近视及近视散光后LASEK治疗残留近视的安全性和有效性。方法采用前瞻性病例分析研究方法，收集2010年7月至2015年3月于贵州医科大学附属医院眼科就诊的等效球镜度≥-20．00D的超高度近视且接受PPC—ICL植入术或PPC—TICL植入术后6个月仍残留近视者9例14眼，其中行***植入术者4例8眼，行PPC—TICL植入术者5例6眼，术眼最佳矫正视力（BCVA）可提高2行以上。对术眼进行角膜厚度、角膜地形图、角膜内皮细胞计数、眼压和眼底检查，排除禁忌证后行LASEK，术后随访12个月，比较LASEK手术前后裸眼视力（UCVA）、BCVA、角膜上皮下雾状混浊（haze）、拱高、晶状体、眼压变化，评价PPC—ICL或PPC—TICL植入矫正超高度近视后用LASEK矫正残留近视的有效性和安全性。结果所有术眼手术顺利，术后术眼眼前节无明显炎症反应和严重并发症。术前、PPC—ICL植入术后6个月和LASEK术后12个月术眼UCVA、BCVA总体比较差异均有统计学意义（F=31．360、1．778，均P〈0．05），LASEK术后术眼UCVA均高于术前BCVA。术前、PFC—ICL植入术后6个月和LASEK术后12个月术眼屈光度分别为（-22．27±4．29）、（-3．75±2．25）和（-0．42±0．63）D，总体比较差异有统计学意义（F=46．370，P〈0．05），LASEK术后术眼屈光度明显低于术前、PPC—ICL植入术后，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。术眼术前、PPC-ICL术后6个月及LASEK植入术后12个月眼压、角膜内皮细胞计数总体比较差异均无统计学意义（F=1．663、1．055，均P〉0．05）。LASEK术后12个月和PPC—ICL术后6个月拱高分别为（0．69±0．26）Film和（0．71±0．29）mm，差异无统计学意义（t=0．192，P〉0．05）。结论PPC—ICL或PPC-TICL植入术矫正超高度近视常残留一定程度的近视度，进一步用LASEK矫正残留近视安全、有效。

关键词：近视/手术后房/手术准分子激光上皮下角膜磨镶术疗效安全性随访研究有晶状体眼后房型人工晶状体

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三岔河镇 “五抓五强”促振兴

三岔河镇 “五抓五强”促振兴

乙型肝炎病毒不同基因型DNA聚合酶对病毒复制水平的影响

商洛日报

作者：罗英英

本报讯（通讯员罗英英）今年以来，商州区三岔河镇以“三个年”活动为抓手，采取“五抓五强”措施，积极推动秦岭山水乡村及省级乡村振兴示范镇建设再上新台阶。抓班子强引领，凝聚工作合力。三岔河镇建立镇主要领导牵头抓、分管领导... 详细信息

本报讯（通讯员罗英英）今年以来，商州区三岔河镇以“三个年”活动为抓手，采取“五抓五强”措施，积极推动秦岭山水乡村及省级乡村振兴示范镇建设再上新台阶。抓班子强引领，凝聚工作合力。三岔河镇建立镇主要领导牵头抓、分管领导具体抓、包村领导重点抓、村级班子带头......

关键词：改造提升

来源： cnki报纸评论

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cnki报纸

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重庆医科大学学报 2014年第10期39卷 1443-1447页

作者：罗英英胡接力陈江燕黄荣黄爱龙重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016

目的:研究不同基因型聚合酶(polymerase,pol)复制乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)DNA的能力是否存在差异。方法:采用不依赖酶切和连接的克隆(restriction digestion and ligation-independent cloning,RLIC)方法和HBV聚合酶反式互补技术表达并检测A、B、C、D 4种基因型聚合酶复制HBV DNA的情况。结果:(1)反式互补技术可使A、B、C、D型HBV重新获得表达,HBV DNA量分别为A=(63.03±8.03)×105 copies/μl,B=(23.23±3.53)×105 copies/μl,C=(17.63±1.25)×105 copies/μl,D=(75.73±9.43)×105 copies/μl。(2)HBV不同基因型聚合酶之间复制HBV能力存在差异,F(4,10)=91.88,P=0.000。(3)A型和D型聚合酶复制HBV能力强于B型和C型聚合酶,差异有统计学意义,P(A,B)=0.001,P(A,C)=0.001,P(B,D)=0.001,P(C,D)=0.001。结论:HBV不同基因型聚合酶之间复制HBV能力存在差异;为深入研究不同基因型在地理分布、所致疾病严重性等方面提供了有用信息并奠定了坚实的基础。

关键词：基因型聚合酶乙型肝炎病毒DNA

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中国地理标志保护面临的问题与对策

河北经贸大学学报（综合版） 2009年第2期9卷 17-19页

作者：于刃刚罗英英河北经贸大学校长办公室河北石家庄050061 河北经贸大学商学院河北石家庄050061

随着世界贸易规模和范围的不断扩展,地理标志的经济价值日益显现,与此同时许多国家也相应加强了对地理标志产品的保护。中国对地理标志的保护还处于起步阶段,在地理标志平行保护模式;地理标志与地名商标发生冲突及宣传力度和监管力度等... 详细信息

随着世界贸易规模和范围的不断扩展,地理标志的经济价值日益显现,与此同时许多国家也相应加强了对地理标志产品的保护。中国对地理标志的保护还处于起步阶段,在地理标志平行保护模式;地理标志与地名商标发生冲突及宣传力度和监管力度等方面存在不到位现象。对此,应制定专门法律和实施细则,做好宣传工作,提高国民的保护意识和加大市场监管力度等地理标志保护措施。

关键词：地理标志问题对策

通过自诱导方法对乙型肝炎病毒聚合酶TP区进行可溶性表达及鉴定

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中国生物制品学杂志 2017年第1期30卷 25-28,33页

作者：陈可代娟甘春扬刘亚罗英英胡接力蔡雪飞重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016

目的构建包含乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)聚合酶TP区段的重组原核表达质粒,转化表达型大肠埃希菌,以自诱导培养方法获得可溶性表达,并对其进行鉴定。方法分析HBV(A型)聚合酶N-末端1-192 AA区域的DNA序列,通过网络工具(http://*... 详细信息

目的构建包含乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)聚合酶TP区段的重组原核表达质粒,转化表达型大肠埃希菌,以自诱导培养方法获得可溶性表达,并对其进行鉴定。方法分析HBV(A型)聚合酶N-末端1-192 AA区域的DNA序列,通过网络工具(http://***/)在线优化,并在5′和3′端分别添加NdeⅠ和XhoⅠ限制性内切酶位点后,送英潍捷基(上海)贸易有限公司进行人工合成;将人工合成的TP-DNA双酶切后,插入pET32a(+)原核表达载体,构建重组原核表达质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS进行自诱导表达。结果重组原核表达质粒pET32a(+)/POL-TP-Opt经双酶切及测序证明构建正确;在表达菌的破菌上清中有特异性表达的蛋白,相对分子质量约20 000,经SDS-PAGE和Western blot鉴定,为可溶性的重组TP蛋白。结论通过自诱导培养方法,直接成功获得可溶性的重组TP蛋白,改变了长期以来依靠包涵体复性对TP蛋白相关功能进行研究的状况。

关键词：自诱导乙型肝炎病毒聚合酶 TP区原核细胞基因表达

一种适用于片段替换/插入突变扫描的克隆方法

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中国生物工程杂志 2016年第8期36卷 55-63页

作者：甘春杨刘亚罗英英张文露黄爱龙蔡雪飞胡接力重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室重庆400016

功能序列的改造是基因工程的一项基础技术。序列改造往往涉及较大片段的插入或替换,为了获得更优化的改造序列,这种片段插入或替换经常需要以扫描方式进行。传统的酶切连接方式在这种情况下可能难以实现或者费时费力。建立了一种golden ... 详细信息

功能序列的改造是基因工程的一项基础技术。序列改造往往涉及较大片段的插入或替换,为了获得更优化的改造序列,这种片段插入或替换经常需要以扫描方式进行。传统的酶切连接方式在这种情况下可能难以实现或者费时费力。建立了一种golden gate方法结合混合克隆和快速鉴定的策略(简称Gmix),利用该策略,成功地将外源基因(Gaussia荧光素酶基因)以4种模式,扫描式插入或替换HBV复制质粒的指定区域。该方法成功率高,操作简便快速且成本较低,适合于其他DNA序列的类似改造工作。

关键词：克隆基因工程 Golden gate 片段扫描方法