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布鲁杆菌M16株pgm基因突变活菌苗株的构建和鉴定

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中国地方病学杂志 2011年第3期30卷 289-293页

作者：李鹏朱嘉婧罗德炎王希良空军航空医学研究所附属医院检验科北京100089 吉林大学中日联谊医院耳鼻咽喉头颈外科军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室免疫室

目的构建自杀性质粒载体,对布鲁杆菌M16株pgm基因进行精确突变,并对得到的pgm基因突变活菌苗株进行鉴定.方法在puc19质粒载体上构建正向筛选标记--蔗糖敏感基因和反向筛选标记--卡那霉素抗性基因融合序列;用卡那霉素抗性基因融合序列... 详细信息

目的构建自杀性质粒载体,对布鲁杆菌M16株pgm基因进行精确突变,并对得到的pgm基因突变活菌苗株进行鉴定.方法在puc19质粒载体上构建正向筛选标记--蔗糖敏感基因和反向筛选标记--卡那霉素抗性基因融合序列;用卡那霉素抗性基因融合序列对布鲁杆菌pgm基因进行修饰（插入突变）,完成pucS1.6K自杀性质粒载体的构建;通过电转化获得布鲁杆菌M16株pgm基因突变菌株;应用PCR方法对pgm基因突变菌株进行鉴定.结果鉴定结果显示,布鲁杆菌M16株pgm基因在卡那霉素抗性基因插入后失活,突变后的布鲁杆菌M16株pgm基因DNA片段长度约为3525 bp,与预期的相符,布鲁杆菌M16株pgm基因突变菌株构建成功.结论构建的自杀性质粒载体能成功对布鲁杆菌进行精确毒力基因突变,为获得布鲁杆菌突变株提供了一个有效的技术平台,也为新型减毒活疫苗的研制奠定了基础.

关键词：布鲁杆菌菌苗 pgm基因基因融合诱变插入

鼠疫耶尔森氏菌YscF的表达及免疫原性分析

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2009年第12期37卷 68-72页

作者：崔萍于三科罗德炎临沂师范学院生命科学学院山东临沂276000 西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 军事医学科学院病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

【目的】研究重组鼠疫耶尔森氏菌(简称鼠疫菌)YscF蛋白的免疫原性。【方法】将含重组质粒YscF的***21-YscF阳性克隆接种于LB液体培养基进行诱导表达;采用Ni2+亲和层析法对表达产物进行纯化;以蛋白体为佐剂吸附重组YscF蛋白,对Balb/c小... 详细信息

【目的】研究重组鼠疫耶尔森氏菌(简称鼠疫菌)YscF蛋白的免疫原性。【方法】将含重组质粒YscF的***21-YscF阳性克隆接种于LB液体培养基进行诱导表达;采用Ni2+亲和层析法对表达产物进行纯化;以蛋白体为佐剂吸附重组YscF蛋白,对Balb/c小鼠滴鼻免疫后,采用间接ELISA法检测血清中抗YscF的IgG和鼻、肺、小肠冲洗液中sIgA的抗体效价。【结果】重组YscF蛋白获得了高效表达,并以可溶性蛋白形式存在于上清中;滴鼻免疫小鼠后不但可以提高血清中总IgG效价,还可以诱导呼吸道分泌IgA型抗体;对腹腔注射100LD50强毒鼠疫菌攻击有一定保护效力,存活率为60%。【结论】YscF是鼠疫菌的一个有免疫原性的蛋白,能诱导较强的系统免疫和黏膜免疫;重组鼠疫菌YscF抗原可以作为改进的F1+V亚单位疫苗的辅助成分。

关键词：鼠疫耶尔森氏菌 Ⅲ型分泌系统 YscF蛋白免疫原性

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PLGA作为抗原递送系统的研究进展

中国生物工程杂志 2023年第5期43卷 69-75页

作者：郑蕊屠叶清王慧罗德炎安徽医科大学基础医学院合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

近年来新冠病毒肆虐,单针剂的疫苗研制备受关注。传统疫苗制剂需要在一段时间内多次反复接种才能产生足够的中和抗体。为了降低疫苗接种次数、提高人们的疫苗接种依从性,高分子聚合物材料逐渐走进人们视野,其中聚乳酸-羟基乙酸共聚物(po... 详细信息

近年来新冠病毒肆虐,单针剂的疫苗研制备受关注。传统疫苗制剂需要在一段时间内多次反复接种才能产生足够的中和抗体。为了降低疫苗接种次数、提高人们的疫苗接种依从性,高分子聚合物材料逐渐走进人们视野,其中聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly lactic-co-glycolic acid,PLGA)是当前研究最多、应用最广泛的高分子聚合物材料。PLGA作为一种人工合成的高分子聚合物材料,易于制备、价格相对较低,且具有良好的缓释特性,以及生物安全性和组织相容性,已经被FDA批准应用于药物递送系统,但在疫苗研发上方兴未艾。总结了PLGA佐剂的基本信息,根据当前疫苗研究趋势分析整理了影响其缓释效果和免疫调节作用的相关因素,以及当前的不足和限制,为后续疫苗制备和研究提供一些思路。

关键词： PLGA 缓释免疫调节表面性质

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凝血相关分子在病毒感染方面的研究进展

病毒学报 2021年第4期37卷 1011-1017页

作者：李佳佳罗德炎王慧安徽医科大学合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071

从生物进化角度,天然免疫系统、凝血系统、获得性免疫系统依次产生,且三者存在千丝万缕的联系。以病毒为研究对象对凝血系统作为免疫系统的一个独立部分进行研究,分两部分:感染初期,通过对凝血系统的调控来加强天然免疫和获得性免疫的对... 详细信息

从生物进化角度,天然免疫系统、凝血系统、获得性免疫系统依次产生,且三者存在千丝万缕的联系。以病毒为研究对象对凝血系统作为免疫系统的一个独立部分进行研究,分两部分:感染初期,通过对凝血系统的调控来加强天然免疫和获得性免疫的对话,以此"通畅气血""增强免疫力",清除体内病毒;感染末期合并细菌感染,对凝血系统进行快速干预,既调动该系统自身的免疫力,也疏通天然免疫和获得性免疫的交流通道,有效逆转DIC状态挽救生命,为此,首先要了解各凝血相关分子在抗病毒感染中的作用。本综述分别介绍了多种病毒侵入后,所导致机体凝血功能紊乱的特点,以及在感染过程中凝血相关分子与免疫关联性特征,即病毒毒力分子如何通过调节凝血相关分子的表达,来影响免疫细胞的功能。同时,病毒毒力因子导致免疫系统的改变,又是如何间接影响凝血相关反应。将为包括新型冠状病毒在内的所有病毒的防控提供新的思路。

关键词：病毒感染凝血因子炎症免疫

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布氏杆菌病新型疫苗的研究进展

免疫学杂志 2004年第z1期20卷 43-45,49页

作者：罗德炎韩玉霞王希良军事医学科学院微生物流行病研究所北京100071

布氏杆菌病是一种流行广泛、危害很大的人畜共患病。因其独特的致病机制及感染后难以根治的特点,疫苗的应用一直是其主要的防治方法。其疫苗的应用也大体经历了死苗、减毒活疫苗、菌体组分苗等发展历程,但各种疫苗的有效性及对机体的毒... 详细信息

布氏杆菌病是一种流行广泛、危害很大的人畜共患病。因其独特的致病机制及感染后难以根治的特点,疫苗的应用一直是其主要的防治方法。其疫苗的应用也大体经历了死苗、减毒活疫苗、菌体组分苗等发展历程,但各种疫苗的有效性及对机体的毒性一直是应用的难点和隐患。随着科技的发展,基因疫苗等各种新型疫苗的发现又为布氏杆菌疫苗的研究开辟了新天地,已成为疫苗研究的热点及重点。本文就布氏杆菌病新型疫苗的研究现状与进展等方面做一综述。

关键词：布氏杆菌布氏杆菌病布氏杆菌新型疫苗

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SARS-CoV基因重组质粒的构建与表达

中华微生物学和免疫学杂志 2004年第5期24卷 397-399页

作者：王英王希良曾政田光周华赵光宇石辛甫罗德炎军事医学科学院微生物流行病研究所免疫室北京100071

目的　针对SARS冠状病毒 (SARS CoV)M、N、S和E蛋白 ,构建 4种重组真核表达质粒pVAX1 M、pVAX1 N、pVAX1 S和pVAX1 E ,为研制SARSDNA疫苗奠定基础。方法　根据GenBank中SARS病毒基因序列分别设计M、N、S和E引物 ,用RT PCR方法从感染SAR... 详细信息

目的　针对SARS冠状病毒 (SARS CoV)M、N、S和E蛋白 ,构建 4种重组真核表达质粒pVAX1 M、pVAX1 N、pVAX1 S和pVAX1 E ,为研制SARSDNA疫苗奠定基础。方法　根据GenBank中SARS病毒基因序列分别设计M、N、S和E引物 ,用RT PCR方法从感染SARS病毒的Vero E6细胞中扩增得到M、N、S和E片段 ,构建重组质粒pVAX1 M、pVAX1 N、pVAX1 S和pVAX1 E。并以重组质粒转染COS 7细胞 ,用免疫细胞化学和Westernblot方法鉴定重组质粒体外的表达。结果　经酶切鉴定及DNA序列测定证实重组质粒构建正确 ,细胞转染实验表明 ,构建的 4种重组质粒均能在COS 7细胞内表达。结论　成功构建 4种SARS CoV 4种蛋白抗原真核表达质粒 ,并能在真核细胞内获得表达。

关键词： SARS-CoV基因基因重组质粒 SARS冠状病毒 SARS-CoV 菌种

外泌体参与新冠病毒感染的机制及其应用的研究进展

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病毒学报 2024年第1期40卷 160-168页

作者：鲁丹方一泰罗德炎王慧军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全全国重点实验室北京100072 安徽医科大学基础医学院合肥230032

COVID-19是一种广泛流行的烈性传染病,具有很高的病死率,给全球公共卫生系统造成了严重危机。外泌体是一种由活细胞分泌的纳米级囊泡,携带亲本细胞的脂质、蛋白质及遗传物质至受体细胞,参与机体的信号传递、信息交流。在SARS-CoV-2感染... 详细信息

COVID-19是一种广泛流行的烈性传染病,具有很高的病死率,给全球公共卫生系统造成了严重危机。外泌体是一种由活细胞分泌的纳米级囊泡,携带亲本细胞的脂质、蛋白质及遗传物质至受体细胞,参与机体的信号传递、信息交流。在SARS-CoV-2感染的病理过程中,外泌体通过内吞途径或在相关分子的作用下参与感染,进而调节机体的生理或病理状态。外泌体具有高稳定性、低免疫原性、高生物相容性以及能够顺利通过组织屏障等优点。作为“分子载体”,外泌体可以递送SARS-CoV-2病毒相关信息分子,用于COVID-19的疾病诊断;作为“递送载体”,外泌体能够携带脂质、核酸、蛋白及药物至体内。因此,外泌体常用于COVID-19治疗药物与疫苗的制备。现就外泌体如何参与SARS-CoV-2感染以及外泌体与COVID-19的诊断、治疗及预防作一综述。

关键词： SARS-CoV-2 外泌体诊断治疗预防

A/California/07／2009亚型猪流感冷适应减毒疫苗株的拯救及免疫效果评价

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生物化学与生物物理进展 2010年第12期37卷 1289-1295页

作者：段跃强罗德炎邢丽杨鹏辉赵忠鹏贾卫红李培锋王希良军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 内蒙古农业大学兽医系呼和浩特010018

应用反向遗传学技术,选择冷适应、温度敏感、减毒的A/Ann Arbor/6/60 ca(H2N2)型流感病毒的6个内部基因为骨架,与A/California/07/2009株流感病毒2个抗原基因HA、NA分别克隆到polⅠ-polⅡ转录表达载体pAD3000中,构建8个转录表达载体重... 详细信息

应用反向遗传学技术,选择冷适应、温度敏感、减毒的A/Ann Arbor/6/60 ca(H2N2)型流感病毒的6个内部基因为骨架,与A/California/07/2009株流感病毒2个抗原基因HA、NA分别克隆到polⅠ-polⅡ转录表达载体pAD3000中,构建8个转录表达载体重组质粒,共转染Vero细胞,获得重配A/California/07/2009ca株流感病毒.重配病毒的TCID50为7.5,病毒传4代后其血凝素(HA)滴度稳定在1∶256,半数感染剂量EID50为8,鸡胚传20代,经RT-PCR鉴定未发现重组病毒基因突变,电镜观察重配病毒符合流感病毒的主要特征;蔗糖纯化的病毒经肌肉注射(灭活)及滴鼻(减毒活病毒)两种途径免疫BALB/c小鼠,结果显示:滴鼻免疫和肌肉注射都可以产生较高效价的血凝抑制(HI)抗体,肌肉注射组产生的HI抗体略高(P=0.044),但肌肉注射组检测不到高效价IgA抗体;滴鼻免疫组鼻冲洗液中可以检测到高效价的IgA抗体,同型病毒感染后,IL-1β、TNFα、IFN-α等前炎因子分泌较早,且高于肌肉注射组(P<0.05),可见,喷鼻减毒疫苗比灭活全病毒疫苗能更好地激发黏膜免疫反应.通过对小鼠各个器官病毒载量的检测发现,4天后鼻腔、气管、脑、肺、脾脏没有病毒存在,证明减毒活疫苗株在小鼠上是安全的.以上数据可以初步断定,重组病毒有作疫苗候选株的可能,而且喷鼻疫苗具有降低免疫剂量、同时激活体内体液免疫和细胞免疫的功能.

关键词：反向遗传学技术 A/California/07/2009亚型猪流感 8质粒拯救系统

运载双层抗原蛋白的CS-PLGA制剂制备及其表征鉴定

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安徽医科大学学报 2024年第7期59卷 1213-1218页

作者：郑蕊杨晓岚王慧罗德炎安徽医科大学基础医学院合肥230032 军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全全国重点实验室北京100071

目的制备运载双层抗原的CS-PLGA微球制剂,并对其进行相关表征鉴定。方法通过复乳法结合溶剂挥发法制备得到多孔微球后,在4℃水浴条件下装载抗原,利用抗原浓度梯度介导的物理扩散促进抗原进入微球内部,并通过静电作用结合在微球外表面,... 详细信息

目的制备运载双层抗原的CS-PLGA微球制剂,并对其进行相关表征鉴定。方法通过复乳法结合溶剂挥发法制备得到多孔微球后,在4℃水浴条件下装载抗原,利用抗原浓度梯度介导的物理扩散促进抗原进入微球内部,并通过静电作用结合在微球外表面,形成内外双层抗原运载。根据聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)材料玻璃转化温度这一特性,促进多孔微球表面孔道在48℃条件下发生愈合,使其形成闭合的微球制剂,再将得到的微球制剂与壳聚糖溶液混悬镀层,进行阳离子修饰,逆转微球表面负性电位。通过扫描电子显微镜、动态光散射粒度仪等检测微球形态、粒径分布和电位变化,采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定抗原是否装载至微球制剂中,采用荧光标记的BSA和荧光标记的PLGA材料进行激光共聚焦显微镜观察抗原装载后的分布情况,通过BCA法检测微球制剂的包封率和载药率。结果扫描电镜和光学显微镜结果显示多孔微球成孔良好,粒径大小为(73.94±0.81)nm,多分散性指数为0.038±0.004。Zeta电位由负转正说明壳聚糖已被成功镀层至微球表面。经过SDS-PAGE、激光共聚焦显微镜等证实BSA已被成功运载。经micro BCA试剂盒检测后多孔微球包封率为(3.01±0.04)%,载药率为(1.50±0.02)%。结论成功制备得到运载双层抗原的CS-PLGA制剂,为后续缓控释制剂研究提供新思路。

关键词：聚乳酸-羟基乙酸共聚物壳聚糖多孔微球抗原装载自愈合

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