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大熊猫源犬细小病毒VP2基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

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云南农业大学学报:自然科学版 2023年第5期38卷 795-802页

作者：李强严立恒兰景超邓英孙珊珊罗娌史纪强颜其贵四川农业大学动物医学院四川成都611130 成都大熊猫繁育研究基地四川成都610081

【目的】建立一种检测大熊猫血清中犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)抗体的间接酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法。【方法】以大熊猫源CPV DNA为模板,利用PCR扩增VP2基因,再用原核表达系统对VP2基因... 详细信息

【目的】建立一种检测大熊猫血清中犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)抗体的间接酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法。【方法】以大熊猫源CPV DNA为模板,利用PCR扩增VP2基因,再用原核表达系统对VP2基因进行表达,经纯化后的蛋白作为ELISA包被抗原;制备并纯化兔抗大熊猫IgG,采用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记作为间接ELISA酶标二抗,通过棋盘法确定抗原包被质量浓度及血清稀释度等条件,并评估建立方法与商业试剂盒检测样品结果的符合率。【结果】原核表达成功获得约70 ku的VP2蛋白,将其作为间接ELISA包被抗原,抗原最佳包被质量浓度为2.0μg/mL,血清最佳稀释度为1∶400,用该方法进行检测血清样品时OD450≥0.258为阳性,反之为阴性。采用建立的ELISA方法检测大熊猫血清样本阳性率为60.0%,高于商业化检测试剂盒检测的阳性率(52.5%),两者总符合率达到87.5%。【结论】本研究首次建立了基于大熊猫源CPV VP2蛋白为抗原、自制HRP标记兔抗大熊猫IgG为酶标二抗的间接ELISA方法,该方法特异性强、灵敏性较高、重复性好,为大熊猫血清中CPV抗体的检测提供了技术支持。

关键词：大熊猫犬细小病毒 VP2蛋白原核表达间接酶联免疫吸附剂测定(ELISA)

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幼年大熊猫石膏样小孢子菌性皮癣病的防治

野生动物学报 2023年第1期44卷 158-163页

作者：陈欣黄文俊王小兰李碧刘礼廖礼慧文一帆罗泽娟吴星陈敏邓陶代莎罗娌成都大熊猫繁育研究基地四川省濒危野生动物保护生物学重点实验室成都610081

近年来成都大熊猫繁育研究基地有多只幼年大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)发生以脱毛、脱屑和水肿为主要症状的皮肤癣菌病,通过综合应用临床诊断方法确认病原为石膏样小孢子菌(Microsporum gypseum),经药敏试验与临床实践筛选出局部外... 详细信息

近年来成都大熊猫繁育研究基地有多只幼年大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)发生以脱毛、脱屑和水肿为主要症状的皮肤癣菌病,通过综合应用临床诊断方法确认病原为石膏样小孢子菌(Microsporum gypseum),经药敏试验与临床实践筛选出局部外用萘替芬酮康唑等防治措施,最终取得满意效果。本研究对幼年大熊猫石膏样小孢子菌性皮癣病的流行病学、临床特点进行介绍,并对幼年大熊猫石膏样小孢子菌性皮癣病的诊断方法、致病机理以及防治措施进行阐述,可为大熊猫皮肤癣菌病的科学防治提供参考。

关键词：大熊猫皮肤癣菌病石膏样小孢子菌诊治

大熊猫感染性泌尿生殖道血尿症病原—肺炎克雷伯氏杆菌

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四川动物 2006年第1期25卷 83-85,F0004页

作者：王成东兰景超罗娌杨智张再蓉成都大熊猫繁育研究基地成都610081 四川大学基础与法医学院微生物室

对一只长期在秋冬季节交替或炎热夏季发生血尿症大熊猫的尿液进行细菌的分离、培养,并对分离株进行了小白鼠毒性试验和药敏试验。通过对分离菌株的染色镜检和生化试验,最后确定为肺炎克雷伯氏杆菌。作者对肺炎克雷伯氏杆菌引发大熊猫的... 详细信息

对一只长期在秋冬季节交替或炎热夏季发生血尿症大熊猫的尿液进行细菌的分离、培养,并对分离株进行了小白鼠毒性试验和药敏试验。通过对分离菌株的染色镜检和生化试验,最后确定为肺炎克雷伯氏杆菌。作者对肺炎克雷伯氏杆菌引发大熊猫的疾病类型进行了探讨,指出肺炎克雷伯氏杆菌除可引发大熊猫肠炎和败血症外,还可导致大熊猫发生以排血样尿液为主要临床表现的泌尿生殖道感染。

关键词：大熊猫肺炎克雷伯氏杆菌血尿

重组Bt伴胞晶体蛋白Cry5B对大熊猫西氏贝蛔虫的离体杀灭活性观察

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兽类学报 2022年第3期42卷 304-311页

作者：黄文俊罗娌陈欣刘礼廖礼慧王小兰李碧李明喜陈敏易得娇李翰张皓卓贵富刘云健李莹馨陈奕君周璇谢跃成都大熊猫繁育研究基地兽医院成都610081 四川农业大学动物医学院温江611130

大熊猫是中国特有的珍稀物种,西氏贝蛔虫是危害大熊猫最为严重的一种肠道寄生性线虫。针对目前长期药物驱虫导致的大熊猫西氏贝蛔虫耐药及生态污染问题,苏力菌(Bacillus thuringiensis,Bt)晶体蛋白Cry5B因其特异的线虫杀灭活性,是一种... 详细信息

大熊猫是中国特有的珍稀物种,西氏贝蛔虫是危害大熊猫最为严重的一种肠道寄生性线虫。针对目前长期药物驱虫导致的大熊猫西氏贝蛔虫耐药及生态污染问题,苏力菌(Bacillus thuringiensis,Bt)晶体蛋白Cry5B因其特异的线虫杀灭活性,是一种理想的新型抗蛔虫病药物候选。本研究拟通过原核表达方式产生Bt YBT-1518重组Cry5B蛋白,并评价其对大熊猫西氏贝蛔虫的离体杀灭活性。结果表明,BtYBT-1518 Cry5B由1246个氨基酸组成,分子量(MW)为139.889 kDa,包含Endotoxin_N、δ-Endotoxin_C、Endotoxin_C、Endotoxin_C2、Cry1Ac_D5结构域,与BtPS86Q3晶体蛋白关系最近。重组Cry5B蛋白在IPTG浓度为1.4 mmol/L时表达量最大,表达于菌体上清液。离体杀灭活性实验表明,重组Cry5B蛋白的大熊猫西氏贝蛔虫抑杀效果具有显著的剂量依赖性,对肠道L4期幼虫第3天的ED_(50)值为14.5μg/mL,第7天的ED_(50)值为0.16μg/mL;但对成虫更敏感,仅作用2 d便可显著下降虫体活性,直至死亡,证实重组Cry5B蛋白对大熊猫蛔虫具有较强的毒杀作用。这些结果为后续论证Bt YBT-1518重组Cry5B蛋白可以作为一种新型、环保的抗大熊猫西氏贝蛔虫病药物提供了数据参考。

关键词：大熊猫苏力菌西氏贝蛔虫 Cry5B 杀虫活性

犬恶丝虫天冬氨酸转氨酶基因的原核表达及分析

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中国人兽共患病学报 2016年第8期32卷 700-705页

作者：刘梅兰景超王宇林海张志和王成东罗娌刘理古小彬汪涛杨光友四川农业大学动物医学院成都611130 成都大熊猫繁育研究基地成都610081

目的了解犬恶丝虫天冬氨酸转氨酶(AspAT)基因特征及其在虫体的定位,对犬恶丝虫AspAT(DiAspAT)基因进行了原核表达和免疫荧光定位分析。方法从犬恶丝虫成虫转录组数据库中筛选到DiAspAT基因序列,通过RT-PCR方法克隆DiAspAT基因,利用相关... 详细信息

目的了解犬恶丝虫天冬氨酸转氨酶(AspAT)基因特征及其在虫体的定位,对犬恶丝虫AspAT(DiAspAT)基因进行了原核表达和免疫荧光定位分析。方法从犬恶丝虫成虫转录组数据库中筛选到DiAspAT基因序列,通过RT-PCR方法克隆DiAspAT基因,利用相关软件进行生物信息学分析;构建原核表达载体pET32a(+)-AspAT并进行诱导表达;表达产物经Ni-NTA层析柱纯化后进行Western blotting分析;通过免疫组化技术观察DiAspAT蛋白在犬恶丝虫虫体内的定位分布。结果 DiAspAT基因的ORF框长度为1 221bp,编码406个氨基酸,理论相对分子量45.731 8kDa,等电点为8.05,表达的重组蛋白约为64kDa;Western blotting显示AspAT重组蛋白能被犬恶丝虫阳性血清识别;间接免疫荧光染色结果显示,DiAspAT在犬恶丝虫的侧索、皮下组织、肌细胞、假体腔壁、子宫及肠上皮、发育的胚胎中分布。结论成功克隆和表达了DiAspAT基因,并完成DiAspAT在雌性犬恶丝虫成虫上的定位,为进一步了解犬恶丝虫的生理代谢及犬恶丝虫病的诊断和防控奠定基础。

关键词：犬恶丝虫 AspAT基因克隆原核表达免疫荧光定位

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大熊猫吸入麻醉操作技术与监护方法

动物医学进展 2006年第6期27卷 111-115页

作者：王成东兰景超杨智罗娌张志和喻述蓉刘里成都大熊猫繁育研究基地四川成都610081

氯胺酮注射是大熊猫兽医临床诊疗技术中常用的一种全身麻醉方法,但存在的弊端较多。吸入麻醉是一种对动物更为安全,并可实施高、深、精、艰操作技术的新型全身麻醉技术,极大地满足了大熊猫兽医临床诊疗技术的需要。文章对吸入麻醉的操... 详细信息

氯胺酮注射是大熊猫兽医临床诊疗技术中常用的一种全身麻醉方法,但存在的弊端较多。吸入麻醉是一种对动物更为安全,并可实施高、深、精、艰操作技术的新型全身麻醉技术,极大地满足了大熊猫兽医临床诊疗技术的需要。文章对吸入麻醉的操作技术、麻醉气体的吸入方式、面罩麻醉与气管插管麻醉、急救药品的剂量与适应症、监护方法与管理措施等都被进行了详细介绍。应用吸入麻醉技术已先后成功完成了对大熊猫人工采精、胃镜观察与活检、宫腔镜检查、腹腔镜检查、牙齿治疗、睾丸摘除等操作共40多次,无1例发生意外。

关键词：大熊猫氯胺酮吸入麻醉监护

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一例大熊猫腹腔镜及上消化道手术的麻醉管理

野生动物学报 2021年第4期42卷 1131-1137页

作者：郑应婕周大春王成东罗娌胡新波江志应志豪陈玎玎杭州动物园杭州310008 浙江大学医学院附属邵逸夫医院杭州310016 成都大熊猫繁育研究基地成都610081

从麻醉前准备、麻醉方案、麻醉监护、输液管理等方面介绍了1例大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)腹腔镜及上消化道手术的麻醉管理,总结了麻醉效果及注意事项,可为大熊猫的胃肠道手术麻醉管理提供参考。

关键词：大熊猫麻醉管理胃肠道手术麻醉监护

迁入都江堰野放中心的大熊猫野化放归个体皮质醇水平变化初步研究

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四川动物 2014年第1期33卷 8-12页

作者：毕温磊侯蓉费立松张志和陈鹏罗娌李明喜向左甫古晓东齐敦武中南林业科技大学生命科学与技术学院长沙410004 成都犬熊猫繁育研究基地成都610081 四川省野生动物资源调查保护管理站成都610000

动物生存环境的变化引起内分泌变化,而其程度则是动物适应环境的一种能力体现。以迁入成都大熊猫繁育研究基地都江堰野放繁育研究中心6只亚成年大熊猫个体为研究对象,利用酶联免疫吸附法检测其粪便中皮质醇激素,验证饲养环境改变是否引... 详细信息

动物生存环境的变化引起内分泌变化,而其程度则是动物适应环境的一种能力体现。以迁入成都大熊猫繁育研究基地都江堰野放繁育研究中心6只亚成年大熊猫个体为研究对象,利用酶联免疫吸附法检测其粪便中皮质醇激素,验证饲养环境改变是否引起其激素水平变化。研究发现:一方面,研究个体在迁入后的皮质醇水平较迁入前均呈明显下降趋势;另一方面,不同年龄和性别间,年龄越小则变化越明显,说明环境变化可能是引起其皮质醇变化的原因之一,即年龄越小这种环境引起的应激性越明显。因此,本研究亦可以为今后圈养大熊猫野化放归过程面临的环境适应性提供第一手的资料,进而为合理规划下一阶段大熊猫野化放归提供技术支持。

关键词：大熊猫皮质醇酶联免疫放归

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大熊猫慢性营养不良综合征治疗

中国兽医杂志 2016年第12期52卷 112-115页

作者：王成东 Carlos Sanchez 兰景超罗娌杨智李明喜黄祥明吴孔菊成都大熊猫繁育研究基地四川成都610081 华盛顿国家动物园美国华盛顿20008

根据动物源性蛋白质过敏理论,选用甲硝唑作为抗过敏药物并辅以肠道营养液替代富含动物源性蛋白质的传统精饲料,先后对8只患慢性营养不良综合征大熊猫进行了诊断性治疗。治疗结果显示,(1)甲硝唑与肠道营养液配合,对大熊猫慢性营养不良综... 详细信息

根据动物源性蛋白质过敏理论,选用甲硝唑作为抗过敏药物并辅以肠道营养液替代富含动物源性蛋白质的传统精饲料,先后对8只患慢性营养不良综合征大熊猫进行了诊断性治疗。治疗结果显示,(1)甲硝唑与肠道营养液配合,对大熊猫慢性营养不良综合征治疗的有效率为100%,且无一例动物治疗后出现病情反复;(2)诊断性治疗结果证明,大熊猫慢性营养不良综合征的发病原因为传统人工日粮中动物源性蛋白质导致。

关键词：大熊猫营养不良动物源性蛋白质治疗