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溶血相关基因缺失降低鳗弧菌感染花鲈的致病性

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水产学报 2024年第5期48卷 75-84页

作者：姜维周家宇王雨果胡存洁方秀罗土炎刘洋鲍宝龙上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室水产科学国家级实验教学示范中心福建闽威实业股份有限公司福建省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所

为阐明毒力因子溶血素对鳗弧菌感染花鲈过程中发挥的作用，实验以花鲈为研究对象，通过对花鲈幼鱼分别注射5.0×10～5 CFU鳗弧菌野生株和缺失株△vah1-vah4-rtxA，评估了溶血相关基因缺失对花鲈的感染能力、花鲈各组织的病理变化情况以... 详细信息

为阐明毒力因子溶血素对鳗弧菌感染花鲈过程中发挥的作用，实验以花鲈为研究对象，通过对花鲈幼鱼分别注射5.0×10～5 CFU鳗弧菌野生株和缺失株△vah1-vah4-rtxA，评估了溶血相关基因缺失对花鲈的感染能力、花鲈各组织的病理变化情况以及免疫响应的影响。结果显示，花鲈感染野生株后的LD50为2.103×10～5 CFU/mL，感染缺失株△vah1-vah4-rtxA后LD50为1.837×10～6 CFU/mL，溶血相关基因缺失使鳗弧菌毒性降到原来的11.44%；鳗弧菌主要定植在花鲈的肠道和鳃中，溶血相关基因缺失降低鳗弧菌在花鲈体内的定植能力，同时降低对鳃和肠道的损伤程度；转录组分析表明vah1、vah4和rtxA缺失后，头肾组织的差异表达基因显著富集到造血细胞谱系、抗原处理和呈递、细胞黏附分子、肠道免疫网络的IgA生产等免疫通路，并用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）对表达水平进行了验证。研究表明，溶血相关基因缺失降低了鳗弧菌感染花鲈的致病能力。研究结果有助于进一步了解鳗弧菌的致病机制，并为开发花鲈抗弧菌免疫增强剂或减毒疫苗提供依据。

关键词：花鲈鳗弧菌溶血素细菌感染免疫应答

溶藻弧菌RseB基因缺失对凡纳滨对虾致病性的影响

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上海海洋大学学报 2023年第4期32卷 681-689页

作者：孟璐车金远黄旭雄罗土炎鲍宝龙上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室上海201306 上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心上海201306 福建省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所福建福州350003

溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是海水养殖过程中一种常见的致病菌。当温度为25~35℃时,容易暴发流行性的弧菌病。利用OverlapPCR和同源基因重组技术,成功构建溶藻弧菌RseB基因敲除缺失株。结果显示:与野生溶藻弧菌相比,在生长速度上,R... 详细信息

溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是海水养殖过程中一种常见的致病菌。当温度为25~35℃时,容易暴发流行性的弧菌病。利用OverlapPCR和同源基因重组技术,成功构建溶藻弧菌RseB基因敲除缺失株。结果显示:与野生溶藻弧菌相比,在生长速度上,RseB基因显示出与生长具有相关性,RseB基因缺失提高了溶藻弧菌的生长速度;RseB基因缺失造成溶藻弧菌溶血性下降37.5%。凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)致病性试验结果显示,RseB基因缺失菌株感染后凡纳滨对虾开始死亡时间推迟4 h, LT_(50)推迟20 h。攻毒后的第24小时,RseB基因缺失菌株在对虾中的定殖能力下降53.4%。受溶藻弧菌感染的凡纳滨对虾肝胰腺严重受到侵染,肝小管的排列顺序紊乱,并且间隙变大、边界线也逐渐模糊,肝胰腺小管的管腔消失;肝细胞的排列开始不规则,有些肝细胞形状很明显地肿大,甚至整个细胞开始变性,被伊红染深,细胞核开始消失。相同时间点的病理切片显示,RseB基因敲除菌株感染的凡纳滨对虾肝胰腺受损情况相对较轻。

关键词：溶藻弧菌 RseB 基因敲除致病性凡纳滨对虾

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鳗弧菌vah1缺失菌株构建及致病性评估

上海海洋大学学报 2023年第3期32卷 481-490页

作者：胡存洁车金远黄旭雄罗土炎鲍宝龙上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室上海201306 上海海洋大学水产科学国家级实验教学示范中心上海201306 福建省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所福建福州350003

通过基因重组技术,敲除鳗弧菌毒力基因vah1,成功构建vah1缺失鳗弧菌菌株Δvah1。Δvah1菌株溶血活性下降89.4%,生物膜形成能力下降16%。Δvah1菌株感染凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的半数致死量为(9.77±0.50)×10^(5)cfu/mL,相比... 详细信息

通过基因重组技术,敲除鳗弧菌毒力基因vah1,成功构建vah1缺失鳗弧菌菌株Δvah1。Δvah1菌株溶血活性下降89.4%,生物膜形成能力下降16%。Δvah1菌株感染凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的半数致死量为(9.77±0.50)×10^(5)cfu/mL,相比鳗弧菌野生菌株的半数致死量(3.16±0.80)×10^(5)cfu/mL提高了2.09倍;相比鳗弧菌野生菌株,Δvah1菌株在凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肝胰腺的定殖能力明显下降,对肝胰腺细胞造成溶解和空泡化的破坏程度也相对较小,肝胰腺免疫相关基因CAT、SOD、PO、LZM和ACP的表达水平降低。这些研究结果表明,vah1缺失影响鳗弧菌对凡纳滨对虾的致病能力,Δvah1菌株为后续鳗弧菌减毒疫苗或抗鳗弧菌免疫增强剂的制备奠定了基础。

关键词：鳗弧菌 vah1基因致病性凡纳滨对虾减毒菌株

3种养殖模式澳洲淡水龙虾肌肉的氨基酸比较分析与评价

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食品安全质量检测学报 2022年第13期13卷 4212-4218页

作者：罗钦林兴榕潘葳罗土炎福建省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所/福建省农产品质量安全重点实验室福州350003 连城县农业农村局龙岩366200

目的研究3种养殖模式下澳洲淡水龙虾肌肉中的氨基酸组成差异。方法通过氨基酸自动分析仪测定土池、水泥池和稻田模式下养殖的澳洲淡水龙虾成虾肌肉中氨基酸含量,并进行氨基酸品质比较分析。结果 3种养殖模式澳洲淡水龙虾成虾肌肉均含... 详细信息

目的研究3种养殖模式下澳洲淡水龙虾肌肉中的氨基酸组成差异。方法通过氨基酸自动分析仪测定土池、水泥池和稻田模式下养殖的澳洲淡水龙虾成虾肌肉中氨基酸含量,并进行氨基酸品质比较分析。结果 3种养殖模式澳洲淡水龙虾成虾肌肉均含有17种氨基酸,含量最高的均为谷氨酸,次之为天门冬氨酸,最低为胱氨酸,但17种氨基酸中有11种氨基酸相互呈显著性差异(P稻田养殖模式(72.14)>水泥池养殖模式(71.93)。结论澳洲淡水龙虾属于优质食物蛋白质,其氨基酸品质以土池养殖模式为最佳,稻田次之,本研究结果为澳洲淡水龙虾养殖及饲料开发等提供理论参考。

关键词：澳洲淡水龙虾氨基酸土池水泥池稻田

四种重金属离子和氯化钠对史氏鲟稚鱼的急性毒性试验

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四种重金属离子和氯化钠对史氏鲟稚鱼的急性毒性试验

作者：罗土炎福建农林大学

学位级别：硕士

试验用史氏鲟稚鱼为28日龄，平均体长5.79±0.63mm;平均体重0.76±0.28g，每组20尾;使用硫酸铜(CuSO·5HO)、硫酸锌(ZnSO·7HO)、氯化镉(CdCl)、硝酸铅[Pb(NO3)2]和Nacl化学纯配置母液，使用前配成急性毒性试验要求的浓度梯度;采用静水... 详细信息

试验用史氏鲟稚鱼为28日龄，平均体长5.79±0.63mm;平均体重0.76±0.28g，每组20尾;使用硫酸铜(CuSO·5HO)、硫酸锌(ZnSO·7HO)、氯化镉(CdCl)、硝酸铅[Pb(NO3)2]和Nacl化学纯配置母液，使用前配成急性毒性试验要求的浓度梯度;采用静水法测定Cu、Cd、Zn、Pb和Nacl对史氏鲟稚鱼史氏鲟鱼的24h、48h、72h和96h的LC50、LC100和安全浓度，观察了鱼体中毒症状。主要结果如下： 1、4种重金属离子毒性对史氏鲟稚鱼从大到小分别为Cu> Cd> Zn>Pb;史氏鲟稚鱼对Cu最为敏感。 2、Cu对史氏鲟稚鱼24h、48h、72h和96h的半数致死质量浓度(LC-150)分别为：0.1420mg·L、0.0686mg·L、0.0459mg·L和0.0377mg·L;Cu安全质量浓度(SC)为0.0038mg·L。 3、Zn对史氏鲟稚鱼的24h、48h、72h和96h半数致死质量浓度(LC50)分别为：2.2037mg·L、1.4312mg·L、1.0734mg·L和0.9133mg·L，Zn安全质量浓度(SC)为0.0913mg·L。 4、Cd对史氏鲟稚鱼24h、48h、72h和96h的半数致死质量浓度(LC50)分别为：0.6383mg·L、0.4743mg·L、0.3105mg·L和0.2815mg·LCd安全质量浓度(SC)为0.0282mg·L。 5、Pb对史氏鲟稚鱼24h、48h、72h和96h的半数致死质量浓度(LC-150)分别为：7.3319mg·L、4.0791mg·L、3.4745mg·L和2.8544mg·L;Pb安全质量浓度(SC)为0.2854mg·L。 6、氯化钠(NaCl)对史氏鲟稚鱼24h、48h、72h和96h的半数致死质量浓度(LC50)分别为：6.5129mg·L、5.0842mg·L、3.7784mg·L和3.6289mg·L;安全质量浓度(SC)分别为0.3629mg·L。

关键词：史氏鲟重金属急性毒性 LC50 安全浓度

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鲟鱼鱼丸的加工工艺研究

食品研究与开发 2022年第1期43卷 88-93页

作者：黄薇廖茜陈贝刘兰英罗土炎宋永康福建省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所福建省农产品质量安全重点实验室福建福州350003 福建师范大学生命科学学院福建福州350108 福建省食品药品质量检验研究院福建福州350005 福建省水产研究所福建厦门361013

为开发出高品质的鲟鱼丸,该研究以凝胶强度、咀嚼性和感官评分为考察指标,从4种海水鱼(马鲛鱼、鮸鱼、海鳗鱼、海鲈鱼)中筛选出鮸鱼,作为与鲟鱼混合制备鱼丸的原料。进一步分析鲟鱼/鮸鱼质量比、淀粉添加量以及食盐添加量对鲟鱼/鮸鱼鱼... 详细信息

为开发出高品质的鲟鱼丸,该研究以凝胶强度、咀嚼性和感官评分为考察指标,从4种海水鱼(马鲛鱼、鮸鱼、海鳗鱼、海鲈鱼)中筛选出鮸鱼,作为与鲟鱼混合制备鱼丸的原料。进一步分析鲟鱼/鮸鱼质量比、淀粉添加量以及食盐添加量对鲟鱼/鮸鱼鱼丸品质的影响。研究结果显示,鲟鱼/鮸鱼质量比和食盐添加量对鱼丸感官评分的影响达到显著水平(P0.05)。根据单因素试验和正交试验结果最终确定制备鲟鱼/鮸鱼鱼丸的最佳配方为鲟鱼/鮸鱼质量比2∶1、淀粉添加量20%、食盐添加量3%,在此条件下制备的鱼丸咸淡适中、肉香味浓、表面光滑、结构紧致、咀嚼细腻,感官评分平均分可达到87.2。

关键词：鲟鱼鮸鱼鱼丸凝胶强度质构特性感官分析

大黄鱼养殖海域水体中细菌群落结构和抗生素抗性基因分布特征

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中国预防兽医学报 2023年第4期45卷 366-373页

作者：刘洋饶秋华李水根王为刚张志灯黄薇罗土炎福建省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所福建省农产品质量安全重点实验室福建福州350003 福建省水产技术推广总站福建福州350003 连江县水产技术推广站福建福州350500 福州海关技术中心福建福州350003

为探究大黄鱼福建养殖海域水体中微生物群落和抗生素抗性基因(ARG)的分布特征,本研究利用MiSeq和HiSeq高通量测序技术,基于细菌16S rRNA基因V3~V4可变区,对福建6个大黄鱼密集养殖区水体中的细菌群落结构和ARG赋存特征进行研究。Ribosoma... 详细信息

为探究大黄鱼福建养殖海域水体中微生物群落和抗生素抗性基因(ARG)的分布特征,本研究利用MiSeq和HiSeq高通量测序技术,基于细菌16S rRNA基因V3~V4可变区,对福建6个大黄鱼密集养殖区水体中的细菌群落结构和ARG赋存特征进行研究。Ribosomal Database Project(RDP)注释结果显示6个样品中丰度最高的门为Proteobacteria,占样品序列总数的59.62%~75.34%,不同位置大黄鱼养殖海域水体中的优势菌属存在显著差异(P<0.05)。通过与Comprehensive Antibiotic Resistance Database(CARD)数据库比对发现,水体中共检测出872个ARG,包括20种ARG基因类型;不同养殖区域的优势ARG类型基本一致,主要为四环素类、大环内酯类和氟喹诺酮类抗性基因;抗性机制主要为外排泵。相关性分析结果进一步显示,丰度前20的菌属与丰度前20的ARG均有显著相关性(P<0.05),表明微生物群落是影响大黄鱼养殖海域水体中ARG分布的重要因素。本研究为大黄鱼健康养殖及水体ARG控制及消除提供参考依据。

关键词：抗生素抗性基因微生物群落高通量测序技术大黄鱼养殖海域养殖水体

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大黄鱼内脏白点病的病原分离鉴定及致病性

福建农林大学学报（自然科学版） 2022年第6期51卷 800-808页

作者：饶秋华刘洋黎露张志灯邱睿何肖云黄薇罗钦罗土炎福建省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所/福建省农产品质量安全重点实验室福建福州350003 福建农林大学动物科学学院(蜂学学院)/海洋研究院/福建省海洋生物技术重点实验室福建福州350002 福州海关技术中心福建福州350003 大连海洋大学水产和生命学院辽宁大连116023

为探究引起福建省福州市连江县某养殖场内大黄鱼内脏白点病的致病原,本研究从患白点病大黄鱼肝脏中分离纯化出一株优势菌DGZ5.形态学观察、生理生化特性鉴定、16S rRNA基因序列分析、18种毒力基因检测、人工回归感染试验以及对36种抗菌... 详细信息

为探究引起福建省福州市连江县某养殖场内大黄鱼内脏白点病的致病原,本研究从患白点病大黄鱼肝脏中分离纯化出一株优势菌DGZ5.形态学观察、生理生化特性鉴定、16S rRNA基因序列分析、18种毒力基因检测、人工回归感染试验以及对36种抗菌药物敏感性检测的结果显示,DGZ5菌株为杀香鱼假单胞菌.DGZ5菌株携带ompA、sigX、flgM、secY和编号为EPB94769.1的5种毒力基因,对体长为10~15 cm的大黄鱼的半致死浓度(LD_(50))为8.07×10^(6)cfu·mL^(-1).其对头孢他啶、庆大霉素、丁胺卡那和新霉素等12种抗生素药物敏感.组织病理切片结果显示:患病大黄鱼的肝脏和肾脏发生了明显的组织病理变化.本研究结果为由该菌引起的大黄鱼内脏白点病的有效防治提供了科学依据.

关键词：大黄鱼内脏白点病假单胞菌致病性

鳗鲡养殖废弃物抗性基因赋存特征及其与抗生素和微生物群落的相关性

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应用与环境生物学报 2020年第5期26卷 1275-1281页

作者：黄薇刘兰英刘洋罗土炎宋永康福建省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所/福建省农产品质量安全重点实验室福州350003

为揭示鳗鲡养殖废弃物中抗生素抗性基因(antibiotic resistance genes,ARGs)的赋存特征以及探讨抗生素残留和微生物群落对ARGs的影响,采集鳗鲡养殖场排污口底泥和养殖废水样品,应用实时荧光定量PCR(quantitive real-time PCR,qPCR)对ARG... 详细信息

为揭示鳗鲡养殖废弃物中抗生素抗性基因(antibiotic resistance genes,ARGs)的赋存特征以及探讨抗生素残留和微生物群落对ARGs的影响,采集鳗鲡养殖场排污口底泥和养殖废水样品,应用实时荧光定量PCR(quantitive real-time PCR,qPCR)对ARGs赋存特征进行分析,利用高效液相色谱-串联质谱(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)对样品中的抗生素残留进行定量检测,同时采用Illumina NovaSeq高通量测序技术分析底泥和废水中的微生物群落结构特征,进一步对ARGs与抗生素、ARGs与微生物群落结构的相关性进行研究.结果显示,鳗鲡养殖废弃物中的优势ARGs为sul2、tetA和tetG,其相对丰度> 1.0×10-2copies/16S rRNA,处于较高水平;在鳗鲡养殖废弃物中共检测到4种喹诺酮类抗生素和1种四环素类抗生素,未检测到磺胺类抗生素残留,且残留抗生素与ARGs之间的相关性不显著(P≥0.05);底泥与废水中的菌群结构存在一定的差异,Proteobacteria为鳗鲡养殖废弃物中丰度最高的门类,其中菌属Cetobacterium、Plesiomonas、Polynucleobacter与特定ARGs之间存在显著性正相关(P <0.05).因此,鳗鲡养殖废弃物中ARGs的污染情况较为严重,微生物群落的变化对环境抗生素抗性有显著影响;研究结果可为后续控制ARGs的传播提供基础理论数据.(图5表4参38)

关键词：鳗鲡养殖废弃物抗生素抗性基因抗生素微生物群落结构