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全雌二倍体与三倍体鲫鱼的形成及它们的生物学特性研究

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全雌二倍体与三倍体鲫鱼的形成及它们的生物学特性研究

作者：罗凯坤湖南师范大学

学位级别：硕士

在人们饲养的大多数经济鱼类中,雌性的生长速度一般要快于雄性,个体较大,此外,在某些经济鱼类中,雄性在生长到适宜出售的规格前就已经达到性成熟,这些都会导致产品规格的不一致及总体产量的下降;此外全雌鱼在生理上是一个背景一致的群体... 详细信息

在人们饲养的大多数经济鱼类中,雌性的生长速度一般要快于雄性,个体较大,此外,在某些经济鱼类中,雄性在生长到适宜出售的规格前就已经达到性成熟,这些都会导致产品规格的不一致及总体产量的下降;此外全雌鱼在生理上是一个背景一致的群体,为研究鱼类生殖生理提供了良好的实验材料,因此,全雌鱼的制备具有重要的理论和实践意义。在通过人工雌核发育技术得到雌核发育白鲫的基础上,利用添加了17-a-甲基睾丸酮(MT)的饲料(100ug／g)喂养雌核发育白鲫(2n=100)幼苗60天,得到了性反转二倍体雌核发育白鲫。4月龄时,该性反转白鲫性腺石蜡切片显示两种性腺类型,精巢型和精卵巢型,其中,精巢型的性腺的精细小管中存在大量成熟的精子。在繁殖季节,在被检测的鱼中,93.3%的性反转白鲫可以挤出白色精液,并且精子的电子显微镜扫描图表明性反转白鲫可以产生具备正常头部和尾部结构的精子。将该性反转白鲫产生的精子分别与雌核发育雌性白鲫(2n=100)和雌性异源四倍体鲫鲤(2n=200)产生的卵子受精,分别得到了可育的全雌二倍体白鲫和不育的全雌三倍体鱼后代。全雌二倍体白鲫的形成为建立白鲫近交纯系奠定了基础,全雌三倍体是世界上首次通过雌核发育、性反转和种间交配的方法获得的全雌三倍体鱼。这些结果为证明雌性白鲫的性别决定类型为XX,及雌性异源四倍体的性别决定类型为xxxx提供了重要的细胞学证据。此外,本文还在外形特征,生长速度等方面对全雌二倍体和三倍体鱼进行了研究,发现全雌二倍体和三倍体鲫鱼都具有较快的生长速度,表明它们在生产应用上具有可观的前景。雌核发育和性反转相结合的技术在鱼类遗传育种上有重要意义。

关键词：雌核发育性反转全雌二倍体全雌三倍体性别决定鱼类育种

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白鲫×红鲫杂交后代的遗传变异

中国科学：生命科学 2015年第6期45卷 371-380页

作者：王静肖军曾鸣徐康陶敏张纯段巍刘文彬罗凯坤刘筠刘少军湖南师范大学生命科学学院教育部蛋白质化学及鱼类发育生物学重点实验室长沙410081

以雌性日本白鲫和雄性红鲫为亲本进行杂交,获得了杂交子代合方鲫.对该杂交子代及其亲本的形态特征、繁殖特性和遗传特性进行了较系统的研究.合方鲫的体色为青灰色,外形特征介于父母本之间,表现出杂交特征.合方鲫性腺发育正常,雌雄两性可... 详细信息

以雌性日本白鲫和雄性红鲫为亲本进行杂交,获得了杂交子代合方鲫.对该杂交子代及其亲本的形态特征、繁殖特性和遗传特性进行了较系统的研究.合方鲫的体色为青灰色,外形特征介于父母本之间,表现出杂交特征.合方鲫性腺发育正常,雌雄两性可育,并且具有较高的受精率(90.2%)和孵化率(80.5%),为新品系的繁衍和群体扩大奠定了基础.合方鲫的染色体数为2n=100,DNA含量与亲本一致,是一种二倍体鱼.合方鲫的45S r DNA的ITS区包括ITS-1,5.8S和ITS-2三部分,总长度为884 bp,与亲本序列相似度较高并表现出偏向于父本遗传的特征.同时,杂交子代序列兼有双亲特异碱基位点,表现出重组现象.合方鲫5S r DNA的NTS区具有3种长度类型,序列全长为654 bp,与母本相似度为94.2%,与父本似度为95.1%,杂交子代序列具有明显的重组和突变特征,这些基因重组和突变是品种改良和新品系形成的遗传基础.本研究证明了合方鲫在遗传组成和外形方面都与其亲本有本质区别,是一种有杂种特性的后代,该杂交品种的形成在鱼类遗传育种方面具有重要意义.

关键词：日本白鲫红鲫杂交遗传变异

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稚鳖腹面颜色的差异与鳖种鉴别关系探讨

湖南师范大学自然科学学报 2002年第3期25卷 77-80页

作者：周工健李建中尹绍武罗凯坤冯浩邓云湖南师范大学生命科学学院遗传与发育学系中国长沙410081

通过对我国现有不同鳖种的稚鳖的研究发现 :不同种的稚鳖腹部表皮颜色 (色斑 )均有明显差异 ,同种稚鳖的颜色基本一致 .并在一定时期内不因环境变化而改变颜色 .同时发现人工养殖中华鳖种源混杂而导致人工繁殖的稚鳖腹面颜色 (色斑 )分... 详细信息

通过对我国现有不同鳖种的稚鳖的研究发现 :不同种的稚鳖腹部表皮颜色 (色斑 )均有明显差异 ,同种稚鳖的颜色基本一致 .并在一定时期内不因环境变化而改变颜色 .同时发现人工养殖中华鳖种源混杂而导致人工繁殖的稚鳖腹面颜色 (色斑 )分化 ,对称状黑斑出现的比例与混杂程度有关 .腹面有无对称状黑色斑点的两种类型稚鳖经生化测定和对比养殖均存在差异 .说明稚鳖腹面颜色特征可作鳖种鉴别的外观依据 ,还可作为鳖种资源提纯复壮的指标 .

关键词：稚鳖腹面颜色鳖种鉴别颜色差异色斑中华鳖对称状黑色斑点人工养殖

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大鲵输卵管的基本组织结构及其发育变化

湖南师范大学自然科学学报 2003年第1期26卷 64-68页

作者：杨楚彬罗凯坤周海燕周工健刘筠罗琛湖南师范大学生命科学学院遗传与发育生物学系中国长沙410081

研究了大鲵在性未成熟期、性成熟后的产卵期以及退化期的输卵管的基本组织结构和在不同发育阶段的结构和形态变化 .结果表明 :1)不同时期的输卵管壁均由黏膜、肌层和浆膜 3层构成 ;其主要区别在于黏膜的固有层是否形成分泌腺 ;2 )产卵... 详细信息

研究了大鲵在性未成熟期、性成熟后的产卵期以及退化期的输卵管的基本组织结构和在不同发育阶段的结构和形态变化 .结果表明 :1)不同时期的输卵管壁均由黏膜、肌层和浆膜 3层构成 ;其主要区别在于黏膜的固有层是否形成分泌腺 ;2 )产卵期输卵管明显分成伞部、中段和直段 ,其末端以尖端突入泄殖腔 ;3)在尖端突的横切面上首次发现有单管腺 .

关键词：大鲵输卵管组织结构发育变化尖端突产卵期退化期两栖类

雌核发育橙黄色锦鲤的遗传、性腺发育及外形特征

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水产学报 2013年第3期37卷 390-396页

作者：刘启智肖军罗凯坤张勇王跃群中山大学生命科学学院湖南师范大学生命科学学院

用经紫外线灭活的团头鲂精子激活橙黄色锦鲤的卵子,在4℃的水温下冷休克处理卵子30 min使其染色体加倍,获得了孵化率为30.6%、存活率为24.2%的雌核发育锦鲤,表明该雌核发育锦鲤研制方法具有较高的效率。利用外周血细胞培养方法制备了雌... 详细信息

用经紫外线灭活的团头鲂精子激活橙黄色锦鲤的卵子,在4℃的水温下冷休克处理卵子30 min使其染色体加倍,获得了孵化率为30.6%、存活率为24.2%的雌核发育锦鲤,表明该雌核发育锦鲤研制方法具有较高的效率。利用外周血细胞培养方法制备了雌核发育锦鲤染色体并利用核型分析方法对其核型进行了分析,发现雌核发育锦鲤染色体数目为100,核型公式为22 m+34 sm+22 st+22 t;表明雌核发育锦鲤为二倍体,其核型与锦鲤母本一致。利用石蜡切片方法,随机选取10尾1龄雌核发育锦鲤性腺进行检测,发现其性腺全部为卵巢;并且在繁殖季节随机检测100尾2龄雌核发育锦鲤,没有1尾能挤出精液,表明雌核发育锦鲤全部为雌性,为证明雌性锦鲤的性别决定类型为XX提供了重要证据。此外,还对雌核发育锦鲤与母本的的SOX基因遗传关系、外形、体色等进行了比较,结果表明雌核发育锦鲤与母本有相同的SOX基因扩增片段,为证明其为雌核发育锦鲤而非杂交后代提供了重要证据;同时,雌核发育锦鲤保留了母本体态优美的特点,且具有色泽更鲜艳等优点,表明该雌核发育方法产生了遗传改良效果。雌核发育锦鲤的获得为该观赏鱼的提纯复壮、遗传改良以及性别决定和性别控制研究奠定了基础。

关键词：锦鲤雌核发育遗传育种染色体

二倍体鲫鲤F_2产生不同倍性卵子的证据(英文)

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Acta Genetica Sinica 2006年第4期33卷 304-311页

作者：刘少军孙远东罗凯坤刘筠湖南师范大学生命科学学院教育部蛋白质化学与鱼类发育生物学重点实验室长沙410081

在检测到鲫鲤F2产生3种不同大小(直径分别为0.13cm,0.17cm和0.2cm)类型的卵子基础上,进行了F2(♀)×红鲫(♂)及F2(♀)×四倍体鲫鲤(♂)的交配实验。通过染色体计数和流式细胞仪分析,在F2(♀)×红鲫(♂)后代中获得了四倍体、三倍体、二... 详细信息

在检测到鲫鲤F2产生3种不同大小(直径分别为0.13cm,0.17cm和0.2cm)类型的卵子基础上,进行了F2(♀)×红鲫(♂)及F2(♀)×四倍体鲫鲤(♂)的交配实验。通过染色体计数和流式细胞仪分析,在F2(♀)×红鲫(♂)后代中获得了四倍体、三倍体、二倍体鱼;在F2(♀)×四倍体鲫鲤(♂)后代中获得了四倍体和三倍体鱼。这两个交配组合后代中出现的不同倍性的鱼类为证明鲫鲤F2能产生三倍体、二倍体和单倍体卵子提供了进一步证据。F(2♀)×红鲫(♂)中雄性四倍体鱼的存在说明在四倍体后代中存在基因型为XXXY的个体。对上述两个交配组合后代的四倍体鱼和三倍体鱼的性腺结构观察表明:四倍体鱼是可育的,而三倍体鱼是不育的。作者认为鲫鲤F2能够产生二倍体和三倍体卵子与核内复制机制和生殖细胞的融合有关。

关键词：卵子四倍体三倍体杂交进化

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合方鲫的养殖技术

当代水产 2021年第10期46卷 65-66页

作者：罗凯坤湖南师范大学生命科学学院

近年来,随着市场需求日益增长,鲫鱼在池塘养殖中所占比重越来越大。但众多杂交品系的鲫鱼在人工养殖过程中,因缺乏选育而造成品种种质资源严重退化现象突出,后代生产性能日益变差。为解决这一难题,以湖南师范大学淡水鱼类发育生物学国... 详细信息

近年来,随着市场需求日益增长,鲫鱼在池塘养殖中所占比重越来越大。但众多杂交品系的鲫鱼在人工养殖过程中,因缺乏选育而造成品种种质资源严重退化现象突出,后代生产性能日益变差。为解决这一难题,以湖南师范大学淡水鱼类发育生物学国家重点实验室科研团队刘少军院士为主的科研团队经过将近十年的潜心研究,应用群体选育和有性杂交相结合的生物技术,培育出了一种新型的优质鲫鱼,即“合方鲫”。

关键词：人工养殖池塘养殖国家重点实验室科研团队品种种质退化现象杂交品系群体选育

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本地鲶鱼的人工繁殖技术

内陆水产 2008年第3期33卷 22-23页

作者：罗凯坤湖南师范大学生命科学学院 410081

鲶鱼（Anarhichas lupus）属鲶形目，鲶科，广泛分布于湖南的江河、湖泊、池塘中，是极为重要的经济鱼类。鲶鱼全身裸露，无鳞，皮肤富含粘液，体表光滑，头部前端平扁，后部侧扁，头宽大于头高，吻宽，口裂大呈弧形，背鳍短小，胸鳍较... 详细信息

鲶鱼（Anarhichas lupus）属鲶形目，鲶科，广泛分布于湖南的江河、湖泊、池塘中，是极为重要的经济鱼类。鲶鱼全身裸露，无鳞，皮肤富含粘液，体表光滑，头部前端平扁，后部侧扁，头宽大于头高，吻宽，口裂大呈弧形，背鳍短小，胸鳍较小呈扇形。鲶鱼喜群居，浅水生活，多数藏匿在大石头处或石洞中。

关键词：人工繁殖技术鲶鱼肉食性鱼类经济鱼类小型鱼类养殖规模供不应求经济效益

异源四倍体鲫鲤F_9～F_(11)染色体和性腺观察

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Acta Genetica Sinica 2003年第5期30卷 414-418页

作者：孙远东刘少军张纯李建中黄卫人张剑罗凯坤周工健刘筠湖南师范大学生命科学学院蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室长沙410081

采用肾细胞染色体制片技术 ,检测了异源四倍体鲫鲤F9～F1 1 代的染色体数目及组型 ,结果表明 :其染色体数目为 4n =2 0 0 ,核型公式为 44m +6 8sm +44st+44t,证明F9～F1 1 继续保持四倍体性。观察异源四倍体鲫鲤F9～F1 1 成熟性腺 ,在... 详细信息

采用肾细胞染色体制片技术 ,检测了异源四倍体鲫鲤F9～F1 1 代的染色体数目及组型 ,结果表明 :其染色体数目为 4n =2 0 0 ,核型公式为 44m +6 8sm +44st+44t,证明F9～F1 1 继续保持四倍体性。观察异源四倍体鲫鲤F9～F1 1 成熟性腺 ,在这 3代四倍体鱼中仍然保持正常卵巢和精巢 ,分别形成正常二倍体卵子和二倍体精子。在自然环境下 ,观察了异源四倍体鲫鲤自行产卵受精并产生存活后代过程 ,证明该四倍体鱼群体在自然环境下能够自行繁殖传代。异源四倍体鲫鲤稳定的染色体数目和正常的性腺结构以及自然条件下的生殖传代行为 ,说明该异源四倍体鲫鲤已成为一个染色体数目为 4n =2 0 0、遗传性状稳定的新型四倍体鱼群体 ,具备形成新种所需的关键因素。

关键词：异源四倍体鱼染色体性腺自然产卵种群