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展开式科研案例训练在专升本学生护理研究课程教学中的应用

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卫生职业教育 2023年第21期41卷 86-88页

作者：傅圆圆罗冬娇杭州师范大学钱江学院护理分院浙江杭州310000

目的将展开式科研案例训练应用于专升本学生护理研究课程教学,以提高学生科研能力。方法将2021级专升本学生随机分为两组,实验组进行展开式科研案例训练,对照组采用常规授课模式。通过护理人员科研能力自评量表得分及科研项目立项数评... 详细信息

目的将展开式科研案例训练应用于专升本学生护理研究课程教学,以提高学生科研能力。方法将2021级专升本学生随机分为两组,实验组进行展开式科研案例训练,对照组采用常规授课模式。通过护理人员科研能力自评量表得分及科研项目立项数评价两组教学效果。结果两组科研能力自评量表各维度得分均有所提升,除问题发现维度外,其他维度得分比较差异有统计学意义。实验组已有两项研究计划书获批校级科研项目立项。结论展开式科研案例训练对于提高专升本学生科研能力切实有效。

关键词：展开式科研案例专升本学生科研能力护理研究

问号钩端螺旋体属特异性蛋白抗原lipL32/1-lipL41/1融合基因原核表达系统的构建及野生株lipL32、lipL41基因表达和病人血清特异抗体的检测

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问号钩端螺旋体属特异性蛋白抗原lipL32/1-lipL41/1融合基因原核...

作者：罗冬娇浙江大学

学位级别：硕士

问号钩端螺旋体(Leptospira interrogans)(简称钩体)感染引起的钩端螺旋体病(Leptospirosis)是全世界范围内广泛流行的自然疫源性人兽共患病,尤其多见于水稻种植地区,因而我国是钩体病的主要疫区之一。问号钩体自然宿主众多,并可在宿主... 详细信息

问号钩端螺旋体(Leptospira interrogans)(简称钩体)感染引起的钩端螺旋体病(Leptospirosis)是全世界范围内广泛流行的自然疫源性人兽共患病,尤其多见于水稻种植地区,因而我国是钩体病的主要疫区之一。问号钩体自然宿主众多,并可在宿主肾脏长期生存、繁殖并随尿液排出,污染土壤和水源,人类通过接触疫土和疫水而感染,故钩体病是各国洪涝灾害时重点防疫和监控的传染病之一。接种疫苗是预防和控制钩体病流行最有效的措施。但钩体血清群众多,各群间交叉保护作用较弱或无,不同地区优势钩体血清群、型可有明显差异,故目前国内外均采用当地流行的主要钩体血清群、型来制备多价全菌死疫苗。多价钩体全菌死疫苗副作用较大,且对其未包含的其它钩体血清群感染保护作用极其有限。由我国学者研制的国际上首个钩体组分疫苗——多价外膜疫苗,虽有免疫效果好、副作用小等优点,但仍无对不同钩体血清群的交叉免疫保护力。因此,寻找钩体属特异性保护抗原,进而研制出对不同血清群有广泛免疫交叉保护作用的通用型钩体基因工程疫苗,对预防和控制钩体病具有重要意义。 Shang等(1996)和Haake等(2000)先后分别从问号钩体基因组DNA中克隆了全长819 bp、编码272个氨基酸脂蛋白的lipL32基因和全长1068 bp、编码355个氨基酸脂蛋白的lipL41基因,并认为lipL32和lipL41基因存在于所有问号钩体菌株中。我们以往的研究结果证实,我国15群15株致病性问号钩体

关键词：问号钩端螺旋体 liPL32基因 lipL41基因基因型融合基因/构建基因表达重组蛋白/rLinL32/1-LipL41/1 免疫性

基于响应面分析方法的钩端螺旋体三联属特异性蛋白抗原原核表达条件的优化

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微生物学报 2008年第7期48卷 893-899页

作者：王江罗冬娇孙爱华严杰浙江大学附属第一医院传染病诊治国家重点实验室杭州师范大学钱江学院杭州310012 浙江医学高等专科学校杭州310053

脂蛋白LipL32和LipL21及穿膜蛋白OMPL1是问号钩端螺旋体(简称钩体)属特异性表面抗原,可作为通用型钩体基因工程疫苗抗原。【目的】在我们的研究中,为了获得使得重组人工融合基因lipL32/1-lipL21-ompL1/2获得较高的表达水平,我们优化了... 详细信息

脂蛋白LipL32和LipL21及穿膜蛋白OMPL1是问号钩端螺旋体(简称钩体)属特异性表面抗原,可作为通用型钩体基因工程疫苗抗原。【目的】在我们的研究中,为了获得使得重组人工融合基因lipL32/1-lipL21-ompL1/2获得较高的表达水平,我们优化了重组宿主大肠杆菌的表达条件。【方法】我们采用了基于中心复合设计(CCD)的响应面分析方法(RSM)。影响重组大肠杆菌生长的主要因素包pH、诱导剂IPTG浓度、诱导前培养实践、诱导时间以及诱导温度。响应面分析方法可以从这些因素中找到适合目的蛋白表达的最优表达条件。【结果】我们的结果显示在pH7.9、0.20mmol/LIPTG、诱导前培养时间2.5h、诱导时间5.83h、诱导后温度31℃条件下,可获得目的重组蛋白37.78mg/L的最大表达量。【结论】实验结果表明采用基于中心复合设计的响应面分析方法能够较大地提高目的产物的产量。利用统计方法不但可以减少试验的次数,而且还能够从影响蛋白的因素中找出最重要的影响因素,因此该方法不仅对重组蛋白表达条件的优化有用,而且是一种很好的筛选方法。

关键词：问号钩端螺旋体原核表达响应面分析表达条件的优化

问号钩端螺旋体lipL21基因改建及其表达产物免疫原性变化和定位

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浙江大学学报（医学版） 2007年第5期36卷 458-464页

作者：罗冬娇胡野 Dennin R H 严杰浙江大学医学院病原生物学教研室浙江金华职业技术学院医学院浙江金华321007 德国基尔大学吕贝克医学中心医学微生物学和卫生学研究所德国d23538

目的：改建问号钩端螺旋体（简称钩体）lipL21基因核苷酸序列以提高表达产量并了解基因改建前后表达产物免疫原性变化，确定外膜脂蛋白LipL21在钩体表面的定位。方法：参照大肠杆菌偏爱密码子设计，合成lipL21基因核苷酸序列并构建其原... 详细信息

目的：改建问号钩端螺旋体（简称钩体）lipL21基因核苷酸序列以提高表达产量并了解基因改建前后表达产物免疫原性变化，确定外膜脂蛋白LipL21在钩体表面的定位。方法：参照大肠杆菌偏爱密码子设计，合成lipL21基因核苷酸序列并构建其原核表达系统。采用SDS—PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测改建前后lipL21基因表达量变化。采用钩体TR／PatocI抗血清为一抗的Westernblot鉴定改建前后两种目的重组蛋白rLipL2ls的免疫反应性，显微镜凝集试验（MAT）比较改建前后rLipL21s抗血清对不同钩体血清群的交叉免疫凝集效价变化。应用免疫电镜技术对LipL21进行定位。结果：改建前后lipL21基因表达量分别为细菌总蛋白的8．5％和46．5％。两种rLipL21均能与TR／PatocI抗血清发生免疫结合反应，免疫家兔后均能产生特异性抗体。两种rLipL21兔抗血清对我国15群15型钩体参考标准株MAT效价相近，均为1：80～1：320。LipL21位于钩体外膜表面。结论：LipL21是钩体表面抗原。改建后的lipL21基因可明显提高原核表达产量，其产物可保持良好的抗原性和免疫反应性，其抗体具有广泛的交叉免疫凝集活性。

关键词：钩端螺旋体问号/免疫学钩端螺旋体问号/遗传学克隆分子细菌外膜蛋白质类/免疫学细菌外膜蛋白质类/生物合成重组蛋白质类/免疫学重组蛋白质类/生物合成脂蛋白类/免疫学脂蛋白类/生物合成

布地奈德对大鼠哮喘中性粒细胞激活蛋白-2表达的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第8期30卷 710-711页

作者：陈豪叶斌罗冬娇童夏生叶辉王恩智台州市中西医结合医院浙江中医药大学第一临床医学附属医院317523 台州市中心医院儿科杭州师范大学钱江学院医学系台州市第一人民医院儿科

哮喘为气道慢性炎症性疾病，涉及多种炎症细胞和细胞组分，糖皮质激素治疗是目前最常用、最有效的方法。趋化因子是一种诱导炎症细胞向炎症部位聚集的细胞因子，在哮喘气道炎症机制的发生和发展中起着非常重要的作用。

关键词：中性粒细胞激活蛋白-2 哮喘布地奈德慢性炎症性疾病大鼠炎症细胞激素治疗

问号钩体lipL32/1-lipL41/2融合基因的构建及其表达产物免疫性的鉴定(英文)

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中国人兽共患病学报 2007年第5期23卷 427-432页

作者：周金成罗冬娇严杰杭州师范学院基础医学院杭州310018 浙江大学医学院病原生物学教研室

目的构建问号钩端螺旋体(简称钩体)lipL32/1-lipL41/2融合基因及其原核表达系统并鉴定其表达产物的免疫性。方法采用连接引物PCR构建lipL32/1-lipL41/2融合基因,常规方法构建其原核表达系统。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测... 详细信息

目的构建问号钩端螺旋体(简称钩体)lipL32/1-lipL41/2融合基因及其原核表达系统并鉴定其表达产物的免疫性。方法采用连接引物PCR构建lipL32/1-lipL41/2融合基因,常规方法构建其原核表达系统。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测目的重组蛋白rLipL32/1-LipL41/2表达情况。采用Western blot鉴定rLipL32/1-LipL41/2的免疫反应性。采用ELISA检测228例钩体病人血清中lipL32/1、lipL41/2基因和lipL32/1-lipL41/2融合基因表达产物的抗体。结果 lipL32/1-lipL41/2融合基因核苷酸和氨基酸序列与报道的相关序列相似性分别为99 .9 %和99 .8 %。rLi-pL32/1-LipL41/2表达量约为细菌总蛋白的10 %。rLipL32/1和rLipL41/2兔抗血清均能识别并与rLipL32/1-LipL41/2结合。97 .4 %、78 .5 %和99 .1 %病人血清rLipL32/1、rLipL41/2和rLipL32/1-LipL41/2抗体阳性。结论本研究成功地构建了问号钩体lipL32/1-lipL41/2融合基因及其原核表达系统,rLipL32/1-LipL41/2不仅同时具有两个单一重组抗原的免疫反应性,且能提高钩体病人血清中抗体检测阳性率,可作为研制钩体属特异性基因工程疫苗或检测试剂盒的候选抗原。

关键词：问号钩端螺旋体 lipL32基因 lipL41基因融合基因构建/表达免疫性

我国4个钩端螺旋体血清群lipL21基因序列分析及其表达产物的鉴定

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中国人兽共患病杂志 2005年第9期21卷 744-747页

作者：刘云英罗冬娇严杰浙江大学医学院病原生物学教研室杭州310031 杭州师范学院基础医学部

目的本文采用高保真PCR从我国主要流行的问号钩体黄疸出血群赖型56601株、波摩那群波摩那型56608株、流感伤寒群临型56609株及腐生性双曲钩体参考标准株三宝垄群patoc型PatocⅠ株基因组DNA中扩增了全长lipL21基因片段。序列分析结果表明... 详细信息

目的本文采用高保真PCR从我国主要流行的问号钩体黄疸出血群赖型56601株、波摩那群波摩那型56608株、流感伤寒群临型56609株及腐生性双曲钩体参考标准株三宝垄群patoc型PatocⅠ株基因组DNA中扩增了全长lipL21基因片段。序列分析结果表明,所克隆的4株钩体lipL21基因与已报道的相应序列(GenBankNo.:AY187271)比较,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别高达99.64～99.82%和99.46～100%。所构建的问号钩体黄疸出血群赖型56601株lipL21基因原核表达系统在IPTG诱导下,能有效地表达目的重组蛋白rLipL21,其产量约为细菌总蛋白的10%。Westernblot结果证实,兔抗钩体TR/patocⅠ属特异性抗原血清能识别rLipL21并与之结合。上述实验结果提示,lipL21基因序列非常保守,其表达产物有良好免疫原性,可作为研制通用型钩体基因工程疫苗的候选抗原。

关键词：问号钩端螺旋体 LipL21基因克隆/表达免疫原性/鉴定

钩端螺旋体主要属特异性蛋白抗原分布及其免疫性研究

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中华流行病学杂志 2006年第12期27卷 1073-1077页

作者：孙百莉罗冬娇孙军德严杰沈阳农业大学土地与环境学院 110161 杭州师范学院基础医学部浙江大学医学院

目的确定致病性问号钩端螺旋体(钩体)属特异性外膜蛋白的抗原性和交叉免疫反应性,为研制通用性钩体基因工程疫苗及检测试剂盒提供依据。方法采用Ni-NTA亲和层析法,提取了4种钩体外膜蛋白主要基因型重组表达产物rLipL21、rLipL32／1和rLi... 详细信息

目的确定致病性问号钩端螺旋体(钩体)属特异性外膜蛋白的抗原性和交叉免疫反应性,为研制通用性钩体基因工程疫苗及检测试剂盒提供依据。方法采用Ni-NTA亲和层析法,提取了4种钩体外膜蛋白主要基因型重组表达产物rLipL21、rLipL32／1和rLipL32／2、rLipL41／1和rLipL41／2、rOmpL1／1和rOmpL1／2,并用SDS-PAGE检测表达及提纯效果。上述重组蛋白常规皮下免疫家兔获得抗血清,显微镜凝集试验(MAT)检测各抗血清交叉凝集效价。采用盐变法提取了我国15群问号钩体参考标准株及非致病的双曲钩体PatocⅠ株的外膜蛋白。以兔抗血清为一抗,采用Western blot检测上述4种外膜蛋白自然表达情况及其免疫反应性。结果rLipL21、rLipL32／1和rLipL32／2、rLipL41／1和r LipL41／2、rOmpL1／1和rOmpL1／2表达量分别约占细菌总蛋白的10％、40％和35％、15％和10％、30％和15％,各重组蛋白SDS-PAGE提纯后均仅见单一的蛋白条带。重组蛋白兔抗血清在同一基因不同基因型表达产物之间有广泛的交叉免疫反应性,与不同钩体血清群的MAT效价为1:2-1:128。各血清群钩体外膜中均可检出上述4种外膜蛋白,但LipL21仅存在于问号钩体中。结论LipL21、LipL32、LipL41、OmpL,1均为钩体属特异性表面抗原,可作为通用性钩体疫苗及检测试剂盒的候选抗原。

关键词：问号钩端螺旋体外膜蛋白属特异性抗原交叉凝集免疫性鉴定

本科护理专业HIV教学中“课程思政”的设计与实践

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中华护理教育 2021年第1期18卷 55-59页

作者：罗冬娇邵鸯凤周金成杭州师范大学钱江学院护理分院杭州市310018

在专业课程立德育人的教育理念下,以人类免疫缺陷病毒为例,挖掘、凝练与其相关的德育元素,设计“课程思政”的具体方案,通过讲授、讨论、观看视频、小组汇报、开展第二课堂等方式,构建起全方位育人模式。实施“知识传授”与“价值引领... 详细信息

在专业课程立德育人的教育理念下,以人类免疫缺陷病毒为例,挖掘、凝练与其相关的德育元素,设计“课程思政”的具体方案,通过讲授、讨论、观看视频、小组汇报、开展第二课堂等方式,构建起全方位育人模式。实施“知识传授”与“价值引领”同行并重,培养有理想、有情怀和有担当的护理人才。

关键词：教育,护理课程人类免疫缺陷病毒课程思政