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表达融合蛋白HSA/IL-2的CHO细胞培养工艺研究

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表达融合蛋白HSA/IL-2的CHO细胞培养工艺研究

作者：缪亚娜江南大学

学位级别：硕士

白介素-2(Interleukin-2,IL-2)是一种具有多功能免疫调节作用的细胞因子,由于在人体内半衰期短因此在临床应用时受到限制。本研究室前期工作中,将人血清白蛋白(HSA)与人IL-2(HSA/IL-2)融合并先后在毕赤酵母、CHO细胞两种表达体系中成功... 详细信息

白介素-2(Interleukin-2,IL-2)是一种具有多功能免疫调节作用的细胞因子,由于在人体内半衰期短因此在临床应用时受到限制。本研究室前期工作中,将人血清白蛋白(HSA)与人IL-2(HSA/IL-2)融合并先后在毕赤酵母、CHO细胞两种表达体系中成功表达。毕赤酵母缺乏完善的翻译后修饰功能,蛋白糖基化形式不完全,蛋白质存在降解等问题。CHO细胞表达HSA/IL-2时在一定程度上解决了酵母表达体系的问题,且蛋白具有良好的生物活性,提高了HSA/IL-2的成药性。但CHO细胞培养存在以下问题:(1)实验室前期使用的无血清培养基和流加培养基含多种蛋白成分,培养基性质不稳定,培养基不易保藏;(2)摇瓶培养规模小,不能满足HSA/IL-2的后续研究及产业化发展。本课题将以此为出发点,筛选并优化CHO细胞的培养基体系,并探究CHO细胞在搅拌式生物反应器中的培养工艺。为解决培养基问题,考察了四种商业化无血清培养基的特性,完成细胞悬浮驯化。结合CHO细胞生长密度和活率,筛选出最优基础培养基M1。通过流加培养方式,筛选出最优流加培养基F3。通过添加蛋白水解物(酵母提取物、大豆蛋白水解物、胰蛋白水解物)和小分子促进剂(丁酸钠、丙戊酸、DMSO)提高细胞密度和融合蛋白表达量。结果表明:培养基中添加4 mM的丙戊酸提高融合蛋白的表达效果最好,最高表达量为72mg/L,是对照组的1.24倍。不同浓度的水解物对细胞生长及融合蛋白表达效果不同,确定最优添加浓度为5 g/L。不同水解物对细胞生长及融合蛋白表达效果不同,酵母提取物(YE)提高细胞生长密度及融合蛋白表达量效果最明显,最高生长密度为9.95×106cells/mL,是对照组的1.43倍,HSA/IL-2最高表达量为100 mg/L,是对照组的1.72倍。YE可以提高细胞周期G1期比例和降低细胞凋亡率的作用。为实现大规模培养重组CHO细胞,本课题对搅拌式生物反应器的培养工艺进行了研究。利用反应器培养CHO细胞时,因流体动力产生的剪切力对细胞生长有着显著的影响作用,消泡剂添加浓度、通气量、搅拌速率等参数进行研究。结果显示:(1)添加一定浓度的消泡剂可以很好地解决泡沫问题,消泡剂添加浓度范围应为0.05%;(2)不同的通气量和搅拌速率对细胞生长影响差异明显,最适通气量范围为0.05.1 L/min,最适搅拌速率为200 rpm;(3)利用反应器进行CHO细胞流加培养时,细胞最高生长密度为7.4×106 cells/m L,低于摇瓶水平,最高融合蛋白表达量为120 mg/L;(4)依据摇瓶实验,通过添加5 g/L的YE优化细胞培养过程,实现了提高细胞生长密度及目的蛋白表达量,CHO最高生长密度提高至9.9×106 cells/mL,最高融合蛋白表达量提高至130mg/L。利用SDS-PAGE检测培养上清液,82 kDa左右存在融合蛋白的条带。经Western blot检测,目的蛋白具有HSA和IL-2的双重抗性。利用CTLL-2/MTT法检测培养上清液发现其具有体外生物活性。

关键词：融合蛋白HSA/IL-2 悬浮培养基筛选 CHO细胞培养搅拌式生物反应器生物活性

基于滑模变结构的无刷直流电机新型直接转矩控制研究

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基于滑模变结构的无刷直流电机新型直接转矩控制研究

作者：缪维娜江苏科技大学

学位级别：硕士

为了提高永磁无刷直流电机的控制性能,本论文从无刷直流电机控制策略的优化方面进行了深入研究,研究的的重点包括:(1)无刷电机的主要工作原理和数学模型;(2)围绕永磁无刷直流电机的直接转矩控制方式展开研究分析;(3)对无刷电机直接转矩... 详细信息

为了提高永磁无刷直流电机的控制性能,本论文从无刷直流电机控制策略的优化方面进行了深入研究,研究的的重点包括:(1)无刷电机的主要工作原理和数学模型;(2)围绕永磁无刷直流电机的直接转矩控制方式展开研究分析;(3)对无刷电机直接转矩控制(BLDCM DTC)中的定子磁链给定方式研究分析;(4)采用滑模变结构(SMC)代替PI控制实现新的转矩给定方案。具体内容如下:1、简要说明了BLDCM的基本特点和发展趋势,并阐述了BLDCM DTC策略的特点及其发展,对电机主要的先进控制算法进行详细的介绍和对比分析。2、对永磁无刷电机的基本原理进行了分析,在此基础上给出了基于理想化电机数学模型。就无刷电机最突出的广受关注的脉动问题和目前几种比较流行的控制系统进行了分析,为后文无刷电机的控制系统设计提供论据。3、介绍了直接转矩控制(DTC)的基本思想及其在BLDCM中的应用。对无刷电机直接转矩控制系统的基本原理和几大主要模块进行分析研究,在此基础上进行建模仿真结果分析。仿真结果证明了BLDCM DTC系统的优良动静态性能,但在转矩脉动以及鲁棒性等动静态性能上仍有提升的空间。4、提出了一种新型定子磁链幅值给定方法,并与传统的磁链给定方式进行对比分析和仿真建模分析。对比研究发现,基于新型定子磁链幅值给定的BLDCM DTC对转矩脉动的抑制以及动态响应性能上均具有较为明显的优势。此外,新型磁链给定方式下的电枢磁链轨迹能够动态地反应转矩的变动情况,有利于对系统仿真结果的分析。5、将滑模变结构代替传统PI控制应用于BLDCM-DTC中的转矩给定模块。分析了基于传统线性滑模面和指数趋近率下的滑模控制方式,在此基础上设计出基于非线性的积分滑模面和混合型趋近率的滑模控制方式,并进行了趋近时间和抖振分析。对建模和仿真进行分析研究,结果表明:本章提出的基于滑模变结构的转矩给定方案在控制的整个动静态性能上均优于传统的PI控制。

关键词：无刷直流电机直接转矩控制磁链给定方式滑模变结构

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基于支架理论的初中英语写作教学实证研究

基于支架理论的初中英语写作教学实证研究

作者：陈缪娜杭州师范大学

学位级别：硕士

随着社会的逐步发展和国际交流的日益频繁,英语在人们的生活中占据越来越重要的地位。对于广大初中生来说,学好英语也是至关重要的。而作为交际能力和综合技能的重要体现,写作在英语教学中占据重要地位。然而学生的写作成绩却不容乐观,... 详细信息

随着社会的逐步发展和国际交流的日益频繁,英语在人们的生活中占据越来越重要的地位。对于广大初中生来说,学好英语也是至关重要的。而作为交际能力和综合技能的重要体现,写作在英语教学中占据重要地位。然而学生的写作成绩却不容乐观,写作教学也没有受到应有的重视。事实上,传统的写作教学方法中存在的大量弊端抹煞了学生的写作兴趣,抑制了学生的写作才能。此外,一些教师甚至把作文题目直接抛给学生,而不进行适当的教学和指导。作为一种有效的英语教学法,支架教学法可通过形式多样的活动帮助学习者建立起对学习任务更深入的认知。针对此现状,本文将采用支架式教学法,通过搭建支架、情景教学、独立探索、合作学习和效果评价五个步骤对初中生进行英语写作教学。本文试图探讨支架式教学法对学生写作能力、写作兴趣以及小组合作意识的提高是否有其影响。通过为期五个月的教学实验以及对实验数据的分析,笔者发现支架式教学法有助于学生提高写作成绩,激发写作兴趣和写作热情,同时以小组合作的形式进行写作教学,有利于提高学生的合作意识。当然,由于时间、学生个体差异等多个因素的限制,本次研究存在着一些不足,仍需加以改进。笔者也希望本次实证研究能为支架式教学以及写作教学的发展和完善提供一些参考。

关键词：支架教学法写作教学写作能力写作兴趣合作意识

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孤独的时候，不如吃茶去

2017年

作者： (美)珍娜·缪塞卡

来源：南通市图书馆图书评论

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面向战场态势评估的联合树相关推理

微电子学与计算机 2013年第9期30卷 26-29页

作者：张海生缪婵娜清华大学计算机科学与技术系北京100084 清华大学软件学院北京100084

本文首先从战场态势与事件间的因果关系出发,构建了用于态势评估的贝叶斯网络推理模型;分析了联合树算法在态势评估中所存在的问题,结合基于D分离的相关推理在模型结构挖掘方面的特性,提出了一种联合树相关推理方法;最后,通过实验验证... 详细信息

本文首先从战场态势与事件间的因果关系出发,构建了用于态势评估的贝叶斯网络推理模型;分析了联合树算法在态势评估中所存在的问题,结合基于D分离的相关推理在模型结构挖掘方面的特性,提出了一种联合树相关推理方法;最后,通过实验验证了该方法的有效性和准确性,为态势评估下的精确推理提供了一种有效的解决方案.

关键词：态势评估贝叶斯网络联合树相关推理

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创新构建网络思想政治教育的路径思考

现代营销（下） 2011年第1期 98-99页

作者：缪娜湖南女子学院 410004

21世纪是网络时代,互联网的迅猛发展和网络技术不断升级使网络已经渗透到社会的各个领域。对人类社会的生产和生活产生了革命性的影响,使人们的工作、学习和生活方式都发生了巨大的变化。这也就要求我们思想政治教育如果要与时俱进,必... 详细信息

21世纪是网络时代,互联网的迅猛发展和网络技术不断升级使网络已经渗透到社会的各个领域。对人类社会的生产和生活产生了革命性的影响,使人们的工作、学习和生活方式都发生了巨大的变化。这也就要求我们思想政治教育如果要与时俱进,必须和网络相结合。同时,我们应该意识到网络思想政治教育是一项复杂的系统工程,本文通过分析网络思想政治教育的意义以及构建网络思想政治教育路径的原则,探索现代网络思想政治教育路径构建的新方法,从而占领网络思想新阵地。

关键词：网络思想政治教育意义原则路径

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在中医护理中应用评判性思维的体会

贵阳中医学院学报 2011年第1期33卷 51-52页

作者：缪娜贵阳中医学院 07时珍护理二班贵州贵阳550002

中医护理学是以中医理论为指导,以护理程序为框架,运用整体观念,对疾病进行辩证施护,并运用传统的护理技术与方法,对患者及人群施以照顾和服务,保护人类健康为目的一门应用学科[1]。评判性思维,要求护士通过主动思考,对所学的理论知识... 详细信息

中医护理学是以中医理论为指导,以护理程序为框架,运用整体观念,对疾病进行辩证施护,并运用传统的护理技术与方法,对患者及人群施以照顾和服务,保护人类健康为目的一门应用学科[1]。评判性思维,要求护士通过主动思考,对所学的理论知识、临床经验、思维能力为基础做出判断的思维方法。在医护工作中,将评判性思维运用到中医护理中,这就要求护士在及时了解患者病情的同时,通过主动思考并结合掌握的患者资料,运用娴熟的中医护理技术,与医生协作,在第一时间制订合理有效的治疗方案,使医护质量和救护成功率得到提高。

关键词：护士评判性思维中医护理体会