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人血清白蛋白-干扰素α2b融合蛋白在CHO细胞中的表达

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中国生物工程杂志 2016年第7期36卷 7-14页

作者：李成媛张晶晶钱凯缪亚娜蔡燕飞杨剑峰何杨金坚江南大学药学院无锡214122 温州大学生命与环境科学学院温州325035 苏州大学唐仲英血液学研究中心苏州215123 苏州大学附属第一医院苏州215006

干扰素α2b(interferonα2b,IFNα2b)是一种用于病毒性疾病和肿瘤性疾病治疗的多功能细胞因子,因其在体内的半衰期短限制了其在临床上的应用。将IFNα2b连接到人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的C端,构建融合蛋白HSA-IFNα2b。构... 详细信息

干扰素α2b(interferonα2b,IFNα2b)是一种用于病毒性疾病和肿瘤性疾病治疗的多功能细胞因子,因其在体内的半衰期短限制了其在临床上的应用。将IFNα2b连接到人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的C端,构建融合蛋白HSA-IFNα2b。构建含融合蛋白的真核表达质粒p MH3/HSA-IFNa2b,经电转的方法转入中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞中。经G418抗性压力筛选和目的蛋白的表达量筛选,最终获得一株高表达的稳定细胞株(CHO/p MH3/HSA-IFNa2b)。表达的目的蛋白经Western blot验证显示,产物具有IFNα2b和HSA的双抗原性。经悬浮驯化稳定后,通过批次筛选得到一株稳定的高克隆表达株,产量约为65mg/L,进一步选取高表达克隆株在悬浮驯化中不同代数进行批次培养,不同代数之间蛋白质的表达量和生长情况没有明显的差异,获得一株稳定遗传表达的单克隆细胞株,3L摇瓶的流加培养结果显示,最佳发酵时间为15天,蛋白质表达量为121mg/L。经离心获得的发酵液,经两步纯化后获得蛋白质纯度高达96.8%的目的蛋白,总回收率为22.3%。参照《中国药典》2015版对IFNα2b的检测方法,结果显示,CHO表达的HSA-IFNα2b比活性为4.16×106IU/mg。首次将HSA-IFNα2b在哺乳动物细胞CHO中构建表达,表达获得高活性的HSA-IFNα2b融合蛋白。

关键词：人血清白蛋白干扰素α2b 中国仓鼠卵巢细胞

表达HSA/IL2的重组CHO细胞的无血清培养基优化研究

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食品与生物技术学报 2019年第6期38卷 95-101页

作者：缪亚娜熊文典万爱妮张晶晶蔡燕飞陈蕴金坚江南大学药学院江苏无锡214122 江南大学生物工程学院江苏无锡214122

优化适合重组CHO细胞生长及表达人血清白蛋白与白介素2(HSA/IL2)的低成本无血清悬浮培养基。以无血清悬浮培养基M1为基础,考察了3种不同质量浓度(1.0、2.5、5.0、10.0 g/L)的蛋白水解物(酵母提取物(YE)、大豆蛋白胨(Soy)及胰蛋白胨(Tyr)... 详细信息

优化适合重组CHO细胞生长及表达人血清白蛋白与白介素2(HSA/IL2)的低成本无血清悬浮培养基。以无血清悬浮培养基M1为基础,考察了3种不同质量浓度(1.0、2.5、5.0、10.0 g/L)的蛋白水解物(酵母提取物(YE)、大豆蛋白胨(Soy)及胰蛋白胨(Tyr))对CHO细胞生长、细胞周期、细胞凋亡及HSA/IL2融合蛋白表达的影响。5 g/L的YE促进细胞生长,提高HSA/IL2表达量的效果最佳。流加培养过程中,在含5.0 g/L YE的培养基中CHO细胞密度可达9.95×10~6cells/mL,HSA/IL2表达量提高至104.06 mg/L,分别是对照组的1.42倍和1.51倍。细胞对数生长期时,YE可以提高细胞周期进展而利于细胞生长;细胞表达期时,YE可以提高细胞G1期比例,延长细胞表达期时间而利于HSA/IL2表达。

关键词： CHO细胞培养基优化蛋白水解物细胞周期

表达IFNα2b-HSA融合蛋白的CHO细胞培养基优化及发酵放大

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化工进展 2016年第B11期35卷 311-314页

作者：蔡燕飞李成媛张晶晶缪亚娜刘克东熊文典陈蕴金坚江南大学药学院江苏无锡214122

毕赤酵母表达的干扰素与白蛋白融合蛋白虽然避开了干扰素单体半衰期短的缺陷,但毕赤酵母对药物的糖基化修饰与人体的糖基化修饰差异性导致了药物的毒副作用。目前药物在CHO系统的表达得到了广泛应用。本研究室首次构建了能表达干扰素α2... 详细信息

毕赤酵母表达的干扰素与白蛋白融合蛋白虽然避开了干扰素单体半衰期短的缺陷,但毕赤酵母对药物的糖基化修饰与人体的糖基化修饰差异性导致了药物的毒副作用。目前药物在CHO系统的表达得到了广泛应用。本研究室首次构建了能表达干扰素α2b和人血清白蛋白融合蛋白（IFNα2b-HSA）的CHO细胞株。在此基础上,本研究通过对12种国产商业化基础无血清培养基和5种流加培养基进行优化筛选,获得最适培养方案：基础培养基选择最适于生长的5号培养基（M2∶M4=1∶1）,流加培养基选择最有适于表达的F4培养基。在此基础上,进行5L生物反应器的发酵放大,pH为6.9-7.4,DO为40%-60%,细胞密度达到7.0×106cells/mL时,温度由37℃降温至34℃,细胞活率降至80%时停止发酵,最终融合蛋白表达量达到137mg/L。初步实现了IFNα2b-HSA融合蛋白在CHO细胞中的高密度发酵。

关键词：干扰素α2b 白蛋白 CHO细胞

稳定表达GLP-1类似物的CHO细胞株的构建及培养工艺研究

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中国生物工程杂志 2017年第5期37卷 52-58页

作者：张晶晶刘克东钱凯缪亚娜蔡燕飞李成媛陈蕴金坚江南大学药学院无锡214122 温州大学温州325000 上海药明生物技术有限公司上海200131

胰高血糖素样肽-1(Glucagon like peptide-1,GLP-1)是一种治疗II型糖尿病的潜在药物,针对其在体内半衰期短和在酵母中表达的批次间不稳定等问题,课题组前期对其进行改造,成功利用p MH3载体在中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细... 详细信息

胰高血糖素样肽-1(Glucagon like peptide-1,GLP-1)是一种治疗II型糖尿病的潜在药物,针对其在体内半衰期短和在酵母中表达的批次间不稳定等问题,课题组前期对其进行改造,成功利用p MH3载体在中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞中表达人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)融合蛋白NGGH[6×His-tag+Ek+2×GLP-1(A2G)+HSA]。现利用新型载体pcDNA3.1,构建含融合蛋白的真核表达质粒pcDNA3.1/NGGH,经电击转染转入CHO细胞中。G418抗性压力筛选后利用一种新型的细胞成像系统高效快速地筛选出高表达单克隆株。表达的目的蛋白经WB(Western blot)验证显示,产物具有GLP-1和HSA的双抗原性。经悬浮驯化稳定后,通过批次筛选得到一株稳定的高表达细胞株,产量为58mg/L。利用5L AP20激流式生物反应器扩大培养重组细胞,对p H和溶氧控制条件进行了优化。结果显示,在p H6.8~7.4,溶氧(dissolved oxygen,DO)两相控制的条件下,蛋白质最终表达量可达148mg/L。

关键词：胰高血糖素样肽-1 中国仓鼠卵巢细胞单克隆筛选大规模培养工艺

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爱上学校：构筑我的教育理想国

中小学管理 2025年第1期 5-8页

作者：滕亚杰北京市东城区府学胡同小学

“怀着崇敬接纳孩子，带着爱教育他们，护送他们迈上自由之旅。”每每念起奥地利哲学家鲁道夫·斯坦纳的这首小诗，我的眼眶总是不禁湿润起来。从事教育工作30余载，从一名普通教师成长为正高级教师、特级教师和特级校长，我的所有思绪...

“怀着崇敬接纳孩子，带着爱教育他们，护送他们迈上自由之旅。”每每念起奥地利哲学家鲁道夫·斯坦纳的这首小诗，我的眼眶总是不禁湿润起来。从事教育工作30余载，从一名普通教师成长为正高级教师、特级教师和特级校长，我的所有思绪和情感、我的心、我的爱始终深深扎根于学校这片沃土。这些年来，我先后走过6所学校，其中担任校长19年。我当校长，最想做的事情就是办好一所学校，守护好、激励好、发展好学校里每一位师生，办一所在北京市乃至全国都叫得响的学校。多年来，我带领我的团队一步一个脚印，用心血、汗水、智慧，努力构筑着我们心中的教育理想国。

关键词：

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西医学术语汉译史研究的三个面相

中国科技术语 2025年第1期27卷 51-56页

作者：缪蓬上海理工大学外语学院上海200093

目前学界对近代“西医东渐”的研究可谓汗牛充栋,其中的一个焦点问题是西医学术语究竟通过何种形式在汉语医学场域完成了翻译定名和概念阐释等过程。文章旨在揭示西医学术语汉译史研究的复杂性与跨学科性,通过将既存研究所显示的词典史... 详细信息

目前学界对近代“西医东渐”的研究可谓汗牛充栋,其中的一个焦点问题是西医学术语究竟通过何种形式在汉语医学场域完成了翻译定名和概念阐释等过程。文章旨在揭示西医学术语汉译史研究的复杂性与跨学科性,通过将既存研究所显示的词典史、词汇史和概念史等研究路径相融合,探索用于追溯并再现西医学术语汉译过程的新方法。文章指出,西医学术语汉译史涉及术语翻译、概念阐释和知识建构等过程,因而其研究具有词汇、概念及知识的三重面相,三者同构共生、互补互融。在研究中对三者加以有机整合,有助于勾勒西医学术语汉译史原貌。

关键词：西医学术语汉译史词汇概念知识

基于热处理工艺的拖拉机发动机铝合金组织性能研究

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农机化研究 2025年第1期47卷 243-247页

作者：汤金金李好娜济源职业技术学院河南济源454650 郑州大学济源研究院河南济源454650

采用不同时长的热处理工艺,对拖拉机发动机铝合金组织性能进行了对比分析。结果表明:热处理后,铝合金性能得到了较大程度的提高,若优先考虑材料性能,则应该采用180℃×4 h的单级热处理时效;若优先考虑工艺效率和成本,则可以采用150℃×1... 详细信息

采用不同时长的热处理工艺,对拖拉机发动机铝合金组织性能进行了对比分析。结果表明:热处理后,铝合金性能得到了较大程度的提高,若优先考虑材料性能,则应该采用180℃×4 h的单级热处理时效;若优先考虑工艺效率和成本,则可以采用150℃×1 h+170℃×1 h的双级热处理时效。

关键词：热处理工艺拖拉机发动机铝合金组织性能

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家族性高胆固醇血症国内外诊疗异同

中国全科医学 2025年第6期28卷 655-665页

作者：马弘阳岳岸娜孙康云南京医科大学附属苏州市立医院心血管内科江苏省苏州市215000

家族性高胆固醇血症(FH)是一种常见的遗传代谢性疾病,主要特征是低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)异常升高,可表现为角膜弓、黄色瘤等症状。长期高水平的LDL-C会增加动脉粥样硬化性心血管疾病(ASCVD)的风险。FH患者早发ASCVD的风险较高,纯合型... 详细信息

家族性高胆固醇血症(FH)是一种常见的遗传代谢性疾病,主要特征是低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)异常升高,可表现为角膜弓、黄色瘤等症状。长期高水平的LDL-C会增加动脉粥样硬化性心血管疾病(ASCVD)的风险。FH患者早发ASCVD的风险较高,纯合型的FH病情更为严重。全球FH的流行率逐渐受到重视,但诊断和治疗仍存在不足。借着《2023年中国血脂管理指南》的发布,本文主要比较了国内外关于FH筛查、诊断的不同,用于强调筛查血脂情况的重要性,并建议早期识别FH患者。同时,基因检测也被推荐,不仅限于少数基因,还应包含其他相关基因或全基因组检测。此外,本文也比较了不同指南对于FH患者LDL-C控制管理水平的差异,以及对于不同LDL-C划分的ASCVD危险因素新要素;比较了不同指南在饮食、生活方式、药物控制等方面的差别,指出国内外一致认为他汀类药物是主要的降脂药物,联合应用尤为重要,但对于最大剂量后LDL-C控制未达标的患者国际血脂护理指南有一定更新。同时,对于纯合型FH(HoFH)患者,高强度他汀类药物联合其他药物治疗是首选,早期的治疗更为关键,适当提早脂蛋白单采术与前蛋白转换酶枯草溶菌素9(PCSK9)抑制剂的应用有助于降低ASCVD的发病率和死亡率。

关键词：高胆固醇血症分子基础诊断诊疗方案指南差异

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金属板材外墙的应用实例与研究

居舍 2025年第02期 41-44+78页

作者：吕雅娜中国电子工程设计院股份有限公司

金属板材外墙在建筑领域的应用较为常见，其具备优良的使用特性和环保特性。在实践应用环节，设计师需要对材料进行合理选用，保证材料的使用性能与建筑功能相匹配，并且与环境相适应。同时，设计师需要进行结构优化设计，结合美学思想... 详细信息

金属板材外墙在建筑领域的应用较为常见，其具备优良的使用特性和环保特性。在实践应用环节，设计师需要对材料进行合理选用，保证材料的使用性能与建筑功能相匹配，并且与环境相适应。同时，设计师需要进行结构优化设计，结合美学思想，做到灵活设计把关。在实践应用环节，相关单位也应当做好施工质量控制，结合BIM系统，做好全时段的质量把关。最后，需强化对金属板材外墙的维护保养，结合可持续的发展理念，对材料的选用、施工、养护过程进行优化，降低能源消耗。

关键词：金属板材外墙应用