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西藏牦牛源EHEC的MLST聚类和致病性分析

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中国人兽共患病学报 2023年第6期39卷 563-569页

作者：娄永志卢姊豪陈姝宇常攀辛娇娇索南顿珠索朗斯珠贡嘎西藏农牧学院动物科学学院林芝860000

目的掌握西藏牦牛源肠出血性大肠杆菌核酸多位点序列分型、聚类情况和致病性。方法对实验室已分离鉴定的14株肠出血性大肠杆菌采用分子生物学和动物实验的方法,进行多位点序列分型鉴定及聚类分析,动物实验后挑选致病性最强菌株进行生长... 详细信息

目的掌握西藏牦牛源肠出血性大肠杆菌核酸多位点序列分型、聚类情况和致病性。方法对实验室已分离鉴定的14株肠出血性大肠杆菌采用分子生物学和动物实验的方法,进行多位点序列分型鉴定及聚类分析,动物实验后挑选致病性最强菌株进行生长曲线测定和半数致死量(LD 50)计算,HE染色制作组织病理切片。结果14株牦牛源肠出血性大肠杆菌中共出现了3种ST型,分别为ST 33、ST 226、ST 446,各ST型中西藏阿里菌株占比最多为57%(8/14);各ST型中ST 33占比最多为57%(8/14),其次是ST 226占比14%(2/14)该型菌株的致病性最强,ST 446占比最少为7%(1/14)。此外,还有3株占比22%(3/14)未定型肠出血性大肠杆菌。MLST聚类分析表明管家基因在不同ST型中携带等位基因的数量不同,ST 33型中Mdh 22个最多,ST 446型中icd 26个最多,ST 226型中Fumc 27个最多。14株菌株攻毒80只小鼠表现出不同程度的致病性,其中ST 226型致病性最强。将致死小鼠解剖后发现肠上皮出血水肿,脾脏、肝脏有淤血等病理变化。14株菌株中的阿里株(TBY 7)是ST 226型其致病性最强,其生长曲线显示14 h达最大生长数,浓度为1×10^(11)cfu/mL;60只小鼠差浓度梯度攻毒试验计算出该菌的LD_(50)为2.4×10^(7)cfu/mL。阿里株(TBY 7)ST 226型感染小鼠后经HE染色制作组织病理切片后,结果显示小鼠的十二指肠、盲肠、结肠和直肠黏膜上皮坏死脱落,盲肠肠壁内可见寄生虫,空肠、回肠绒毛结构坏死萎缩、固有层充血;肝细胞轻微空泡变性,脾脏红髓轻微淤血。结论西藏牦牛源肠出血性大肠杆菌存在不同ST型,且各地区均有分布;不同ST型的致病性与携带等位基因数量相关,且主要引起肠组织病变,提示相关部门应加强对该致病菌的宣传。

关键词：牦牛源肠出血性大肠杆菌(EHEC) ST分型 MLST聚类分析致病性

牛星状病毒ORF2基因遗传进化分析及原核表达

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畜牧与兽医 2022年第10期54卷 81-88页

作者：武琦周金柱钟纯燕李基棕李科茫索朗斯珠贡嘎李彬西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014 黔西南民族职业技术学院贵州兴义562400 南京农业大学动物医学院江苏南京210014

为了解牛星状病毒(bovine astrovirus,BoAstV)ORF2基因的遗传进化并获得原核表达的衣壳蛋白,从牛腹泻粪便中提取总RNA,扩增BoAstV ORF2基因,将ORF2基因克隆至pMD19-T载体中并测序,利用生物信息学软件分析基因的遗传进化。将位于BoAstV... 详细信息

为了解牛星状病毒(bovine astrovirus,BoAstV)ORF2基因的遗传进化并获得原核表达的衣壳蛋白,从牛腹泻粪便中提取总RNA,扩增BoAstV ORF2基因,将ORF2基因克隆至pMD19-T载体中并测序,利用生物信息学软件分析基因的遗传进化。将位于BoAstV衣壳蛋白高度保守区的ORF2-1200基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组原核表达载体pET28a-ORF2-1200。将重组载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达并优化诱导条件,经过超声破碎离心并鉴定蛋白可溶性,最后利用亲和层析镍柱对重组蛋白进行纯化和Western blot鉴定。结果表明:ORF2基因全长2304 bp,编码768 aa,ORF2基因属MAstV-28基因型,与日本毒株Ishikawa24-6亲缘关系最近,与20个参考毒株的ORF2基因氨基酸同源性为53.2%~86.0%。试验成功构建了重组载体,经条件优化,在37℃,1.0 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导6 h情况下蛋白表达量最高,目的蛋白大小55 kDa左右,目的蛋白以包涵体形式存在,Western blot检测目的蛋白正确表达。本试验通过分析BoAstV ORF2基因的遗传进化情况,明确MAstV-28型BoAstV在中国的流行;对ORF2基因保守区域进行克隆和原核表达及纯化,成功获得了重组蛋白,为深入研究蛋白功能和建立BoAstV血清学检测方法奠定了基础。

关键词：牛星状病毒 ORF2 遗传进化分析原核表达

青海牦牛源沙门氏菌的分离鉴定、耐药表型及毒力基因分析

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黑龙江畜牧兽医 2023年第21期 78-83,133页

作者：张开琴李天娇李登宇班马泽郎杨美琪王刚宋仁德索朗斯珠西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860006 国家肉牛牦牛产业技术体系玉树综合实验站青海玉树815099

为了调查青海省玉树藏族自治州部分地区散养牦牛腹泻粪便中沙门氏菌的流行情况、耐药表型及毒力基因分布情况,试验采用病原菌分离、生化鉴定、形态学观察、PCR扩增、K-B法及玻片凝集等方法对腹泻粪便样品进行沙门氏菌的筛选,进而对分离... 详细信息

为了调查青海省玉树藏族自治州部分地区散养牦牛腹泻粪便中沙门氏菌的流行情况、耐药表型及毒力基因分布情况,试验采用病原菌分离、生化鉴定、形态学观察、PCR扩增、K-B法及玻片凝集等方法对腹泻粪便样品进行沙门氏菌的筛选,进而对分离株进行14种毒力基因的筛选、四大类抗生素的药物敏感性检测和血清型检测。结果表明:从184份牦牛腹泻粪便样品中共分离出32株沙门氏菌,分离率为17.39%;分离株共包括3种血清型,以鼠伤寒沙门氏菌为优势血清型,分离率为71.875%;沙门氏菌分离株对新霉素、链霉素、氨苄西林、红霉素及青霉素的耐药率为71.88%~100%;分离株对sseL、orfL、rhuM、avrA、sodC1、lpfC 6种毒力基因的携带率为100%,对sopB、sopE、pipD、ttrB 4种毒力基因的携带率为93.75%,对orgA、mgtc毒力基因的携带率为90.62%,所有菌株均未能检出pefA和spvC毒力基因。说明导致青海省玉树藏族自治州部分地区牦牛腹泻的沙门氏菌血清型大部分为携带多种毒力基因的鼠伤寒沙门氏菌分离株,且表现出不同程度的耐药情况。

关键词：牦牛沙门氏菌血清型耐药性毒力基因

西藏牦牛源肠出血性大肠杆菌毒力基因检测与进化分析

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中国农业大学学报 2019年第2期24卷 107-114页

作者：赵燕娟王刚索朗斯珠西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000

为调查西藏地区牦牛源肠出血性大肠杆菌的流行情况,利用PCR检测和生物进化分析方法,对西藏林芝、拉萨不同地、市149株牦牛源大肠杆菌的肠出血性大肠杆菌相关毒力基因进行了研究。结果表明:牦牛源肠出血性大肠杆菌6对毒力基因中,只检出e... 详细信息

为调查西藏地区牦牛源肠出血性大肠杆菌的流行情况,利用PCR检测和生物进化分析方法,对西藏林芝、拉萨不同地、市149株牦牛源大肠杆菌的肠出血性大肠杆菌相关毒力基因进行了研究。结果表明:牦牛源肠出血性大肠杆菌6对毒力基因中,只检出ehxA基因,检出率为9.40%;对检测到的14株牦牛源肠出血性大肠杆菌进行克隆测序,经系统发育分析发现牦牛源肠出血性大肠杆菌菌株内同源性达到99.9%左右,与GenBank中所录其他菌株的同源性达到99%。因此,西藏牦牛源肠出血性大肠杆菌基因确实存在,其毒力基因主要为ehxA基因;西藏林芝、阿里、日喀则、昌都均有分布,拉萨、山南和那曲地区未检出,应引起重视。西藏地区要根据各地实际情况需要加强监测肠出血性大肠杆菌引起的腹泻,建立流行毒株预警机制并合理用药。

关键词：牦牛肠出血性大肠杆菌毒力基因进化分析

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中藏药对西藏牦牛源沙门氏菌抑菌效果研究

黑龙江畜牧兽医 2023年第17期 72-77页

作者：李登宇李天娇班马泽郎张开琴孙心如王保宁索朗斯珠西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860006 四川大学华西基础医学与法学院成都610041

为了探究藏药合剂、中药及藏药对西藏牦牛源沙门氏菌的抑菌效果,试验以1株西藏牦牛源沙门氏菌H42为研究对象,选择5种藏药合剂、11种中药、14种藏药,采用超声波处理、煎煮浓缩等方法制备药物水煎剂;利用纸片法制备各种药物的药敏纸片,初... 详细信息

为了探究藏药合剂、中药及藏药对西藏牦牛源沙门氏菌的抑菌效果,试验以1株西藏牦牛源沙门氏菌H42为研究对象,选择5种藏药合剂、11种中药、14种藏药,采用超声波处理、煎煮浓缩等方法制备药物水煎剂;利用纸片法制备各种药物的药敏纸片,初步检测药物敏感性;采用微量肉汤稀释法测定中藏药的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC);并利用肉汤稀释棋盘法检测中藏药联合后对菌株的抑菌效果;同时选取部分效果较好的中藏药进行动物保护性试验和肝脏、盲肠载菌量测定试验。结果表明:H42菌株对诃子表现为极敏,对仁青芒觉、坐珠达西、肉桂、藏木香表现为高敏,对荜茇、石榴、岩白菜、草红花、干姜、地榆、黄连、白术表现为中敏,对其他中药、藏药表现为不敏感,对丁胺卡那、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感。仁青芒觉、诃子的MIC和MBC均为31.25 mg/mL,坐珠达西、藏木香的MIC和MBC均为62.50 mg/mL,地榆、黄连的MIC和MBC均为31.25 mg/mL。仁青芒觉与诃子联合用药效果最好,其联合抑菌指数(FICI)为0.5。灌胃中藏药组的小鼠死亡率明显降低,保护率均达50%及以上。灌胃中藏药后小鼠盲肠和肝脏的载菌量均显著或极显著降低(P珠达西、地榆、黄连、诃子表现较好。

关键词：藏药合剂中药藏药沙门氏菌西藏牦牛抑菌活性治疗试验

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西藏自治区牦牛生产现状和趋势分析

中国畜禽种业 2023年第6期19卷 72-79页

作者：廖阳慈李蕊蕊索朗斯珠落桑次旦参木友青稞和牦牛种质资源与遗传改良国家重点实验室西藏拉萨850009 西藏自治区农牧科学院草业科学研究所西藏拉萨850009 临沂科技职业学院山东临沂276000 西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 西藏藏雄特色农产品科技发展有限公司西藏日喀则857000

为摸清西藏自治区牦牛产业格局和发展趋势,该文通过对西藏自治区牦牛生产现状的调查,分析了历年存栏量、出栏量、牛肉消费需求量及养殖经济效益等数据的变化,给出了西藏自治区肉牛产业发展的趋势预测与建议,为西藏自治区肉牛产业的发展... 详细信息

为摸清西藏自治区牦牛产业格局和发展趋势,该文通过对西藏自治区牦牛生产现状的调查,分析了历年存栏量、出栏量、牛肉消费需求量及养殖经济效益等数据的变化,给出了西藏自治区肉牛产业发展的趋势预测与建议,为西藏自治区肉牛产业的发展提供参考依据。

关键词：牦牛生产现状疾病预防趋势分析

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1株藏猪源鼠伤寒沙门菌的分离与鉴定

中国兽医杂志 2013年第6期49卷 44-45页

作者：贡嘎查果拉珍索朗斯珠西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000

猪沙门菌在自然界中十分普遍，是由猪霍乱沙门菌、猪伤寒沙门菌、鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌等引起仔猪的一种传染病。本病一年四季均可发生，但以多雨潮湿季节发病较多，多与其他病毒，如猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、圆环病毒混... 详细信息

猪沙门菌在自然界中十分普遍，是由猪霍乱沙门菌、猪伤寒沙门菌、鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌等引起仔猪的一种传染病。本病一年四季均可发生，但以多雨潮湿季节发病较多，多与其他病毒，如猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、圆环病毒混合感染，混合感染时导致发病率与死亡率增高。

关键词：鼠伤寒沙门菌藏猪猪繁殖与呼吸综合征病毒鉴定分离猪瘟病毒混合感染一年四季

青海玉树牦牛源产气荚膜梭菌的分离鉴定及耐药性研究

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中国兽医学报 2022年第3期42卷 522-528,546页

作者：吴丹罗润波黄家旗刘安静夏子涵吕家煌李彬宋仁德索朗斯珠西藏农牧学院动物科学院西藏林芝860000 江苏农业科学研究院兽医研究所江苏南京210014 国家肉牛牦牛产业技术体系玉树综合试验站青海玉树815000

无菌采集青海玉树地区牦牛源腹泻粪样,利用常规方法和分子生物学技术对样品中的产气荚膜梭菌进行分离鉴定,通过动物试验、药敏试验、耐药基因检测等方法对分离到的菌株进行了分析。结果显示,从148份样品中成功分离鉴定出牦牛源产气荚膜... 详细信息

无菌采集青海玉树地区牦牛源腹泻粪样,利用常规方法和分子生物学技术对样品中的产气荚膜梭菌进行分离鉴定,通过动物试验、药敏试验、耐药基因检测等方法对分离到的菌株进行了分析。结果显示,从148份样品中成功分离鉴定出牦牛源产气荚膜梭菌14株,其中10株为A型,4株为C型。利用16S rRNA基因序列对部分分离菌系统遗传进化树分析,结果发现,YS-1(MW980090)与印度豹源(MN326666.1)产气荚膜梭菌具有较近的亲缘性,YS-4(MW980093)和YS-13(MW980102)为单独的一枝,YS-6(MW980095)与北京人源(KP944154.1)产气荚膜梭菌具有相似性。A型菌YS-1(MW980090)和C型菌株YS-6(MW980095)动物试验结果显示,C型产气荚膜梭菌外毒素具有强致死性,A、C型菌具有强致死性。药敏试验结果表明,分离菌对复方新诺明、多黏菌素、青霉素、多西环素、四环素耐药,对克林霉素、氯霉素、万古霉素、氧氟沙星敏感。本研究为预防和治疗因产气荚膜梭菌导致牦牛腹泻等疾病提供用药指导。

关键词：牦牛产气荚膜梭菌进化树耐药性动物试验

藏猪源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及生物学特性研究

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黑龙江畜牧兽医 2022年第9期 72-79,141页

作者：左伟武琦张千常攀卢姊豪娄永志边巴央拉罗润波索朗斯珠贡嘎西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860006 西藏自治区动物疫病预防控制中心拉萨850013

为了了解西藏地区藏猪源肺炎克雷伯菌荚膜血清型、耐药性、毒力基因及遗传进化现状,试验对从西藏地区林芝市、拉萨市采集的60份腹泻藏猪新鲜粪便进行细菌分离,对分离菌进行生化试验、16S rDNA基因和特异性基因检测并构建系统进化树,采用... 详细信息

为了了解西藏地区藏猪源肺炎克雷伯菌荚膜血清型、耐药性、毒力基因及遗传进化现状,试验对从西藏地区林芝市、拉萨市采集的60份腹泻藏猪新鲜粪便进行细菌分离,对分离菌进行生化试验、16S rDNA基因和特异性基因检测并构建系统进化树,采用PCR方法对分离菌进行荚膜血清型、耐药基因和毒力基因检测,用17种常用抗菌药物进行药敏试验,并用分离菌对小鼠进行致病性试验。结果表明:从西藏地区林芝市样品中成功分离鉴定出3株藏猪源肺炎克雷伯菌,分离率为5%(3/60),分别命名为P1、P2、P3菌株。3株分离菌能够发酵多种糖类,且不产生硫化氢。PCR扩增得到大小约为1400 bp和430 bp的目的条带。3株分离菌均与郑州红袋鼠源CP051490和广州鹦鹉源CP064129聚成一簇,其中P1菌株和P2菌株聚为一个小簇;P3菌株与广州鹦鹉源CP064129聚成一个小簇,亲缘关系最接近。3株分离菌均未鉴定出荚膜血清型。3株分离菌对青霉素、氨苄西林的耐药率最高,达100%;对派拉西林和红霉素的耐药率为66.7%;对头孢氨苄和头孢呋辛的耐药率为33.3%。3株分离菌只携带2种耐药基因,分别为sul2、blaROB-1基因,其中P3菌株为sul2+blaROB-1,P1菌株为sul2,P2菌株为blaROB-1。3株分离菌均检测出相同的毒力基因,分别为uge、wabG、ureA和mrkD基因,检出率为28.6%。注射P1和P3菌液后,小鼠陆续出现体温升高、食欲下降、精神萎靡等症状,24 h内全部死亡;注射P2菌液后小鼠出现体温升高、食欲下降等症状,12小时左右基本恢复健康未出现死亡现象。说明西藏地区林芝市藏猪群中肺炎克雷伯菌有一定的流行趋势。

关键词：肺炎克雷伯菌分离鉴定毒力基因耐药基因藏猪