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2012—2021年青藏高原牦牛源沙门菌流行病学调查

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中国动物传染病学报 2024年第1期32卷 202-206页

作者：班马泽郎李天娇周赛赛吴丹卢姊豪宋仁德罗晓林赵索南马进寿参木友石红梅索朗斯珠西藏农牧学院动物科学学院林芝860000 青海玉树藏族自治州畜牧兽医工作站玉树815400 四川省草原科学研究院成都610097 青海省海北畜牧兽医科学研究所海北812200 青海省大通种牛场大通810102 西藏农牧科学院草原研究所拉萨850000 甘南州畜牧工作站甘南747000

为了明确青藏高原地区牦牛感染沙门菌(SE)情况,该研究采用ELISA双抗体夹心法,对2012—2021年采集自西藏、青海、甘肃、四川1725份牦牛血清样品进行SE抗体检测。结果显示:1725份牦牛血清中检测出SE抗体总阳性率为23.54%(406/1725),西藏... 详细信息

为了明确青藏高原地区牦牛感染沙门菌(SE)情况,该研究采用ELISA双抗体夹心法,对2012—2021年采集自西藏、青海、甘肃、四川1725份牦牛血清样品进行SE抗体检测。结果显示:1725份牦牛血清中检测出SE抗体总阳性率为23.54%(406/1725),西藏地区牦牛SE阳性率与其他地区相比较高;2012—2021年青藏高原地区牦牛血清SE抗体年阳性率分别为7.35%、46.02%、15.31%、17.68%、8.79%、19.84%、6.04%、23.64%、14.81%、74.64%;牦牛在不同海拔感染SE的阳性率分别为13.67%(2900~3400 m)、14.61%(3400~3900 m)、28.62%(3900~4400 m)、34.72%(4400 m以上);不同性别牦牛感染SE平均阳性率分别为公(25.61%)、母(21.99%);4省牦牛感染SE阳性率分别为西藏(27.67%)、青海(13.50%)、甘肃(13.33%)、四川(1.89%)。本研究结果可为了解青藏高原牦牛SE病的流行病学情况,提供参考。

关键词：青藏高原牦牛沙门菌流行病学

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巨须裂腹鱼水霉菌的分离鉴定及其对脾脏转录组的影响

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水产学报 2023年第8期47卷 135-144页

作者：孔庆辉刘海平刘锁珠索朗斯珠徐业芬赵晓玲商振达西藏农牧学院动物科学学院西藏自治区农牧科学院水产科学研究所西藏农牧学院西藏高原饲料加工工程研究中心西藏自治区

为分析感染水霉菌对巨须裂腹鱼脾脏转录组的影响，探索水霉菌感染巨须裂腹鱼的分子机制，实验随机选取生活在同一水域中的5尾健康和5尾感染水霉菌的巨须裂腹鱼，采用PDA琼脂培养基和分子生物学方法对巨须裂腹鱼水霉菌进行分离鉴定，并采... 详细信息

为分析感染水霉菌对巨须裂腹鱼脾脏转录组的影响，探索水霉菌感染巨须裂腹鱼的分子机制，实验随机选取生活在同一水域中的5尾健康和5尾感染水霉菌的巨须裂腹鱼，采用PDA琼脂培养基和分子生物学方法对巨须裂腹鱼水霉菌进行分离鉴定，并采用Illumina HiSeqTM 2000高通量测序平台，对健康和感染水霉菌的巨须裂腹鱼脾脏组织进行转录组测序，并对测序数据进行拼接、注释和差异表达基因分析。结果显示，从巨须裂腹鱼皮肤上分离鉴定得到3株水霉菌；转录组数据显示，健康组和感染水霉病组分别获得46 619 504条和43 912 876条数据，与健康组相比，感染水霉菌组共有1 889个基因发生差异表达，其中1 414个基因上调，475个基因下调，随机选取6个差异表达基因进行实时荧光定量PCR (RT-qPCR)验证，验证结果与转录组测序一致。对健康组和感染水霉菌组的差异表达基因进行GO功能富集发现，上调基因主要富集于241个功能中，下调基因主要富集于60个功能中，上述基因主要涉及分子功能类、细胞组分类和生物过程类等生理功能；KEGG通路富集分析发现，差异表达基因主要富集在免疫疾病、内分泌和代谢疾病、病毒感染性疾病、消化系统及排泄系统等。研究表明，感染水霉菌会影响巨须裂腹鱼脾脏组织多种基因的表达量，实验结果为进一步探索巨须裂腹鱼水霉菌的感染机制奠定了基础。

关键词：巨须裂腹鱼水霉菌转录组测序脾脏组织差异表达基因

猪圆环病毒2型和3型双重PCR方法的建立及在藏猪猪圆环病毒检测中的应用

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江苏农业科学 2022年第3期50卷 172-177页

作者：朱家平肖琦钱雯娴赵霞玲张冯禧尹力鸿温立斌索朗斯珠何孔旺西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 江苏省农业科学院兽医研究所/农业部兽用生物制品工程技术重点实验室江苏南京210014

为同时并快速检测和鉴别猪圆环病毒2型(PCV-2)与猪圆环病毒3型(PCV-3),并调查西藏林芝地区猪圆环病毒的感染情况,根据笔者所在实验室PCV-2和PCV-3单重PCR方法,建立检测PCV-2和PCV-2双重PCR的方法,构建标准质粒并经优化反应条件和反应体... 详细信息

为同时并快速检测和鉴别猪圆环病毒2型(PCV-2)与猪圆环病毒3型(PCV-3),并调查西藏林芝地区猪圆环病毒的感染情况,根据笔者所在实验室PCV-2和PCV-3单重PCR方法,建立检测PCV-2和PCV-2双重PCR的方法,构建标准质粒并经优化反应条件和反应体系后进行特异性和灵敏性的测定,并对西藏林芝周边地区藏猪粪便进行检测。结果显示,建立的PCV-2和PCV-3双重PCR检测方法对PCV1、CSFV、PRRSV、PRV、PPV、PEDV等常见猪源病原的检测结果均为阴性;并且建立的PCV-2和PCV-3双重PCR的灵敏度与PCV-2和PCV-3单一PCR的灵敏度一致,均能达到10^(1)拷贝数/μL;利用建立好的双重PCR方法对西藏藏猪临床样品进行检测,PCV-2、PCV-3的阳性率分别为38.3%(18/47)、12.8%(6/47),混合感染率为10.6%(5/47),与单一PCR的符合度为100%。由此可见,本研究建立的PCR方法方便、特异、准确,并有很高的敏感度,适于临床样品的检测,为PCV-2与PCV-3的诊断和防控提供理论依据。

关键词：猪圆环病毒2型猪圆环病毒3型双重PCR方法藏猪临床应用

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Drebrin蛋白对PEDV在Vero细胞中增殖影响的研究

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中国预防兽医学报 2022年第11期44卷 1135-1140页

作者：吕家煌朱明君尹力鸿李天娇索朗斯珠李彬西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860100 江苏省农业科学院兽医研究所江苏南京210014

已有研究发现发育调节脑蛋白(Drebrin)参与细胞间信息通讯、神经传递、肿瘤转移、精子发生等生命活动,但其对病毒的作用研究却很少。为研究Drebrin对猪流行性腹泻病毒(PEDV)增殖的影响,本研究根据GenBank登录的非洲绿猴Drebrin基因序列(... 详细信息

已有研究发现发育调节脑蛋白(Drebrin)参与细胞间信息通讯、神经传递、肿瘤转移、精子发生等生命活动,但其对病毒的作用研究却很少。为研究Drebrin对猪流行性腹泻病毒(PEDV)增殖的影响,本研究根据GenBank登录的非洲绿猴Drebrin基因序列(XM_008015438.2)设计引物,经PCR从Vero细胞中扩增得到Drebrin基因,经测序后构建系统进化树分析其遗传进化关系。结果显示,Vero细胞Drebrin基因编码区(CDS)长2088 bp,编码695个氨基酸,且该基因相对保守,与其他物种Drebrin基因的同源性均较高。利用扩增的Drebrin基因构建真核表达载体pcDNA3.1-Drebrin-Flag,并以不同浓度转染Vero细胞后感染PEDV,利用RT-qPCR检测Vero细胞中PEDV mRNA的转录水平,采用western blot与间接免疫荧光试验(IFA)检测细胞中PEDV N蛋白的表达量,采用TCID50检测病毒滴度。结果显示,Vero细胞中过表达的Drebrin可显著抑制细胞内PEDV mRNA水平(P<0.01)和N蛋白表达量,降低细胞外病毒滴度,具有抑制PEDV增殖的作用,且抑制效率与转染质粒的浓度呈正相关。进一步利用激光共聚焦技术检测Drebrin与PEDV S蛋白的亚细胞定位,结果显示,Drebrin与S蛋白在细胞质中存在共定位现象,提示两种蛋白可能存在互作。本研究首次证明Drebrin对PEDV在Vero细胞中的增殖有抑制作用,为Drebrin的功能研究提供实验基础,也为抗PEDV机制相关研究提供参考。

关键词： Drebrin 猪流行性腹泻病毒 Vero细胞真核表达

牦牛lncRNA ENSBGRT00000000387.1慢病毒载体构建及其对卵泡GCs凋亡的影响

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畜牧兽医学报 2023年第3期54卷 1058-1070页

作者：孟朝轶王运路徐业芬牛家强索朗斯珠郭敏席广银西藏农牧学院动物科学学院林芝860000 中国农业大学动物科学技术学院北京100193

旨在构建牦牛lncRNA ENSBGRT00000000387.1过表达慢病毒载体,并将其感染牦牛卵泡颗粒细胞(granulosa cells,GCs),了解它对细胞凋亡的影响。本研究提取牦牛卵泡RNA,以RT-PCR技术扩增lncRNA ENSBGRT00000000387.1全长序列,而后构建其重组... 详细信息

旨在构建牦牛lncRNA ENSBGRT00000000387.1过表达慢病毒载体,并将其感染牦牛卵泡颗粒细胞(granulosa cells,GCs),了解它对细胞凋亡的影响。本研究提取牦牛卵泡RNA,以RT-PCR技术扩增lncRNA ENSBGRT00000000387.1全长序列,而后构建其重组质粒,并以慢病毒包装系统(pVSVG:pMDL:pRev)包装后利用qPCR法测定在293T细胞上的感染滴度,再感染分离培养的牦牛GCs,以qPCR检测GCs中lncRNA ENSBGRT00000000387.1的表达水平,并以流式细胞仪检测GCs的凋亡率,以Western blot和qPCR分别检测促凋亡基因CASPASE3、BAX和抑凋亡基因BCL-2的mRNA和蛋白表达水平。结果显示,由牦牛卵泡中成功扩增出lncRNA ENSBGRT00000000387.1的全长2566 bp序列,将其与LV-EF1a-EGFP-2A载体同源区的片段同源重组,经酶切鉴定及测序验证表明成功构建了重组质粒,将之经慢病毒包装系统包装和浓缩后,在293T细胞的感染效率达(75.77±0.850)%,qPCR测定结果显示该慢病毒滴度为7.32×10^(8)TU·mL^(-1),表明目的lncRNA过表达慢病毒载体成功构建;以该慢病毒感染牦牛卵泡GCs的感染效率达(52.93±1.168)%,qPCR结果显示感染GCs中目的lncRNA表达水平显著升高(P<0.01);流式细胞仪检测发现慢病毒感染组细胞凋亡率显著下降(P<0.01),促凋亡基因CASPASE3和BAX在mRNA和蛋白水平的表达量显著降低(P<0.01),而抑凋亡基因BCL-2表达量显著升高(P<0.01)。本试验成功构建了lncRNA ENSBGRT00000000387.1慢病毒载体,成功感染牦牛卵泡GCs后发现其具有抑制细胞凋亡的作用,说明其可能在牦牛卵泡功能中发挥作用。

关键词： lncRNA 慢病毒载体颗粒细胞凋亡牦牛

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1株牦牛源A型产气荚膜梭菌的生长特性及致病性研究

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黑龙江畜牧兽医 2023年第11期 79-84,138,139页

作者：黄家旗吴丹罗润波李宇鹏李彬石红梅参木友索朗斯珠西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 江苏农业科学研究院兽医研究所南京210014 甘南州畜牧工作站甘肃甘南747000 西藏自治区农牧科学院草业科学研究所拉萨850000

为了了解青海牦牛源产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,Cp)的生长特性及致病性,并计算其对感染小鼠的半数致死量(LD_(50)),以及观察感染小鼠各器官组织的损伤情况,试验复苏牦牛源产气荚膜梭菌ZD-01(CpA ZD-01)并配制种子液,采用振... 详细信息

为了了解青海牦牛源产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,Cp)的生长特性及致病性,并计算其对感染小鼠的半数致死量(LD_(50)),以及观察感染小鼠各器官组织的损伤情况,试验复苏牦牛源产气荚膜梭菌ZD-01(CpA ZD-01)并配制种子液,采用振荡比浊法绘制CpA ZD-01菌株的生长曲线,并研究对数期菌液的OD_(600)值与稀释倍数和细菌数量的关系;测定其外毒素粗提取液OD_(280)值和OD_(260)值,计算出不同培养时间毒素蛋白含量;给小鼠腹腔注射菌液,根据小鼠死亡情况确定LD_(0)和LD_(100),并计算LD_(50),解剖小鼠观察牦牛源CpA ZD-01菌株对各组织器官的影响。结果表明:按照5%接种量接种菌株后,>2~10 h为对数期;菌液OD_(600)值(y)与稀释倍数(x)的关系式为y=-0.607lnx+1.551,R^(2)=0.990,P<0.05;菌液OD_(600)值(y)与细菌数量(z)的关系式为y=4.679z-4.448,R^(2)=0.995,P<0.05;在培养12 h后菌株所产生的毒素蛋白含量达到3.480 mg/mL,且第12小时为最佳产毒时间;菌株对感染小鼠的LD_(50)为5.955×10^(8)cfu/mL。急性死亡小鼠各器官无明显病理变化;慢性死亡小鼠脾脏白髓可见细胞增生,红髓淤血;大脑组织间质血管充血;肝细胞空泡变性;肾小管变性并伴有透明管型;肠道组织出现自溶现象。说明牦牛源CpA ZD-01菌株致病性较强。

关键词：牦牛产气荚膜梭菌生长特性致病性病理切片

牦牛源C型产气荚膜梭菌动物致病性及其β毒素基因生物信息分析

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中国兽医学报 2022年第6期42卷 1184-1193页

作者：吴丹黄家旗罗润波郭欣冉吕家煌宋仁德索朗斯珠西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 江苏农业科学研究院兽医研究所江苏南京210014 青海玉树藏族自治州畜牧兽医工作站青海玉树815000

复苏培养本实验室保存的牦牛源C型产气荚膜梭菌Qinghai-06(GenBank登录号:MW980095),利用振荡比浊法、动物试验和病理切片方法对菌株生长曲线及动物致病性进行研究,随后通过对β毒素基因扩增、克隆、双向高通量测序、生物软件分析等分... 详细信息

复苏培养本实验室保存的牦牛源C型产气荚膜梭菌Qinghai-06(GenBank登录号:MW980095),利用振荡比浊法、动物试验和病理切片方法对菌株生长曲线及动物致病性进行研究,随后通过对β毒素基因扩增、克隆、双向高通量测序、生物软件分析等分子生物学与生物信息学方法对其编码蛋白的一级结构、二级结构、三级结构、蛋白特殊区域及B细胞线性抗原表位进行分析。结果显示,牦牛源C型产气荚膜梭菌Qinghai-06菌株按照5%体积分数接种后,2~6h为对数期;菌液D_(600 nm)值与稀释倍数的关系式为y=-0.857ln(x)+2.236;菌液D_(600 nm)值与菌落CFU的关系式为:y=0.881x-0.017;菌株对感染小鼠的LD_(50)为0.408×10^(8)CFU/m L。H.E染色镜检观察到可引起肠、脑、肾脏、肝脏、脾脏组织病理变化。β毒素基因序列长927bp,共编码309个氨基酸,分子式为C_(1535)H_(2396)N_(406)O_(502)S_(9),相对分子质量为34.9ku,p I=5.52,不稳定指数为35.91,亲水性总平均值为-0.567,含有全部20种氨基酸,为单体,含1个Zn^(2+)配体。结果表明:牦牛源C型产气荚膜梭菌Qinghai-06属强致病菌株,其β毒素蛋白为含丰富无规则卷曲结构和潜在磷酸化位点的、稳定的亲水性蛋白,有效B细胞线性抗原表位主要集中于140~290区段。

关键词：牦牛产气荚膜梭菌病理切片 β毒素生物信息分析

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浅谈西藏农业教育存在的问题及其发展的对策

教育探索 2002年第1期 107-108页

作者：斯确多吉索朗斯珠西藏农牧学院

通过对西藏自治区农业教育现状的分析,明确了目前自治区在农业教育结构、教育条件和教学方法、教学内容等方面均存在着一些问题,教育效果不理想。如果采取调整教育结构、优化教育环境、实施因材施教、因地制宜的教育方针和灵活多变的教... 详细信息

通过对西藏自治区农业教育现状的分析,明确了目前自治区在农业教育结构、教育条件和教学方法、教学内容等方面均存在着一些问题,教育效果不理想。如果采取调整教育结构、优化教育环境、实施因材施教、因地制宜的教育方针和灵活多变的教学手段,则可使自治区的农业教育持续、稳步、快速发展。

关键词：西藏农业教育可持续发展对策教学质量教学方法教学手段因材施教

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布鲁氏菌鞭毛和毒力因子及疫苗研究进展

动物医学进展 2023年第8期44卷 82-90页

作者：常攀边巴央拉索朗斯珠罗润波娄永志辛娇娇贡嘎西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 西藏自治区动物疫病预防控制中心西藏拉萨850000

布鲁氏菌病是一种重要的人兽共患病,在全球范围内造成了巨大的经济损失和公共卫生问题。近年来,我国布鲁氏菌病仍没有得到很好的控制,目前尚无国际上认可的人用布鲁氏菌疫苗,动物布鲁氏菌疫苗在近几十年布鲁氏菌病防控中起着重要作用,... 详细信息

布鲁氏菌病是一种重要的人兽共患病,在全球范围内造成了巨大的经济损失和公共卫生问题。近年来,我国布鲁氏菌病仍没有得到很好的控制,目前尚无国际上认可的人用布鲁氏菌疫苗,动物布鲁氏菌疫苗在近几十年布鲁氏菌病防控中起着重要作用,但仍存在一些不足。论文综述了布鲁氏菌鞭毛的组成结构和鞭毛蛋白的作用与功能、毒力因子和疫苗研发等方面的研究进展,为后续布鲁氏菌致病性的分子机制研究和疫苗研发提供参考。

关键词：布鲁氏菌鞭毛结构和作用鞭毛蛋白毒力因子免疫逃避疫苗研发