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PRRSV Nsp4突变毒株对β2M分子表达的影响

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南京农业大学学报 2024年

作者：康磊刘珂王建忠尹才邱亚峰魏建超李蓓蓓邵东华李宗杰粟硕马志永南京农业大学动物医学院免疫学研究所教育部动物卫生与食品安全国际联合研究实验室江苏省动物免疫学工程实验室中国农业科学院上海兽医研究所苏州市相城区农业技术综合服务中心宁夏回族自治区动物疾病预防控制中心

[目的]本次试验探究PRRSV＿Nsp4基因是否在抑制β2M分子表达方面发挥关键性作用，为进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制打下了基础。[方法]本次试验首先建立了PRRSV的反向遗传平台，并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。随后根据之... 详细信息

[目的]本次试验探究PRRSV＿Nsp4基因是否在抑制β2M分子表达方面发挥关键性作用，为进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制打下了基础。[方法]本次试验首先建立了PRRSV的反向遗传平台，并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。随后根据之前对Nsp4基因不同结构域的研究以及氨基酸位点功能预测，在其Domain II和Domain III区域分别筛选了3个和5个不同的氨基酸位点，并在病毒感染性克隆质粒上对这些位点进行不同的氨基酸替换突变，随后将构建好的感染性克隆质粒转染Marc-145细胞以拯救各个Nsp4突变PRRSV病毒。最后将拯救的PRRSV病毒以MOI=0.02感染PAM细胞，并通过RT-qPCR和Western blot验证PRRSV＿Nsp4基因是否能够在PAM细胞β2M分子表达方面发挥的作用。[结果]只有D2-5重组PRRSV毒株在不影响病毒复制能力的同时能够高效的在Marc-145和PAM细胞上促进β2M分子的表达，而野生毒株SH2020表现出了对β2M分子表达的抑制作用。[结论]Nsp4基因在PRRSV抑制细胞β2M分子表达方面发挥重要作用，并且Nsp4＿A80L突变能够显著促进β2M分子的表达。

关键词： Nsp4 β2M 反向遗传平台突变毒株

PRRSV Nsp4基因突变株对β2M表达的影响

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南京农业大学学报 2024年第3期47卷 507-514页

作者：康磊刘珂王建忠尹才邱亚峰魏建超李蓓蓓邵东华李宗杰粟硕马志永南京农业大学动物医学院免疫学研究所/教育部动物卫生与食品安全国际联合研究实验室/江苏省动物免疫学工程实验室江苏南京210095 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 苏州市相城区农业技术综合服务中心江苏苏州215131 宁夏回族自治区动物疾病预防控制中心宁夏银川750011

[目的]本试验旨在探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp4基因是否在抑制细胞β2M表达方面发挥关键性作用,以进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制。[方法]建立PRRSV的反向遗传平台并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。根据之前对Nsp... 详细信息

[目的]本试验旨在探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp4基因是否在抑制细胞β2M表达方面发挥关键性作用,以进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制。[方法]建立PRRSV的反向遗传平台并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。根据之前对Nsp4基因不同结构域的研究以及氨基酸位点功能预测,在其DomainⅡ和DomainⅢ分别筛选出3个和5个不同的氨基酸位点,并在病毒感染性克隆质粒上对这些位点进行不同的氨基酸替换突变,再将构建好的感染性克隆质粒转染Marc-145细胞以拯救各个Nsp4突变PRRSV病毒,将拯救的PRRSV病毒以MOI=0.02感染PAM细胞,并通过RT-qPCR和Western blot验证PRRSV Nsp4基因是否能够在PAM细胞β2M表达方面发挥作用。[结果]成功拯救出PRRSV D2-5(Nsp4-A80L)突变毒株,并且在Marc-145细胞上的生长动力学特性与野生毒株SH2020相似;而Nsp4基因其余位点突变则会导致PRRSV生长受到显著抑制从而无法进行试验。Western blot和RT-qPCR试验结果证实PRRSV D2-5毒株能够显著促进β2M在Marc-145和PAM细胞的表达,而野生毒株SH2020则表现出了对β2M表达的抑制作用。[结论]Nsp4基因在PRRSV抑制细胞β2M表达方面发挥重要作用,并且Nsp4-A80L突变能够显著促进β2M的表达。

关键词： PRRSV Nsp4 β2M 反向遗传平台突变毒株

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纳米银:合成、抗感染与免疫

南京农业大学学报 2022年第5期45卷 829-838页

作者：郭大伟龚佳豪粟硕顾宁南京农业大学动物医学院江苏南京210095 南京大学医学院江苏南京210008

纳米银以其抗感染、调节免疫、抗炎等广泛的生物学活性而成为最具应用潜力的纳米材料之一。本文从合成方法、抗病原微生物感染、免疫调节活性方面重点综述了纳米银近年来的研究进展,分析了纳米银在兽医领域中的应用和潜在毒性,最后提出... 详细信息

纳米银以其抗感染、调节免疫、抗炎等广泛的生物学活性而成为最具应用潜力的纳米材料之一。本文从合成方法、抗病原微生物感染、免疫调节活性方面重点综述了纳米银近年来的研究进展,分析了纳米银在兽医领域中的应用和潜在毒性,最后提出了纳米银目前面临的挑战及未来的发展方向。

关键词：纳米银合成抗感染免疫调节兽医应用

猪血凝性脑脊髓炎病毒N蛋白单克隆抗体制备及表位鉴定

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畜牧与兽医 2023年第3期55卷 119-124页

作者：赵明明翟晓凤粟硕南京农业大学免疫研究所江苏南京210095

为制备猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus, PHEV)N蛋白的单克隆抗体,本研究构建了pET-32a-N重组质粒,原核表达并纯化重组N蛋白,免疫BALB/c小鼠,细胞融合后利用间接ELISA进行筛选,获得了3株稳定分... 详细信息

为制备猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus, PHEV)N蛋白的单克隆抗体,本研究构建了pET-32a-N重组质粒,原核表达并纯化重组N蛋白,免疫BALB/c小鼠,细胞融合后利用间接ELISA进行筛选,获得了3株稳定分泌的阳性杂交瘤细胞株,分别命名为2C3、4F3、5C6。Western blot与间接免疫荧光试验表明,3株单抗均能与293T细胞中表达的N蛋白产生特异性反应。经测定,3株单抗的效价均为1×10^(6),重链类型均为IgG1,轻链类型均为κ。利用一系列表达的部分重叠的N截短蛋白片段,经Western blot鉴定单抗所识别的抗原表位,结果显示,^(267)KPRQK^(271)为单抗2C3、4F3、5C6所识别的表位。本研究为PHEV临床检测方法的建立和表位疫苗的研发奠定了基础。

关键词：猪血凝性脑脊髓炎病毒 N蛋白单克隆抗体表位

盖塔病毒非结构蛋白NSP1多克隆抗体的制备及鉴定

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畜牧与兽医 2023年第3期55卷 79-83页

作者：张洁李超凡翟晓风粟硕南京农业大学免疫研究所江苏南京210095

试验旨在获得能够特异性识别盖塔病毒(Getah virus, GETV)非结构蛋白NSP1的抗体,用于鉴定NSP1蛋白及其分布。采用RT-PCR技术扩增GETV的非结构蛋白NSP1基因,构建了NSP1蛋白的原核表达质粒pET-NSP1,转化至大肠杆菌BL21(DE3)诱导大量表达... 详细信息

试验旨在获得能够特异性识别盖塔病毒(Getah virus, GETV)非结构蛋白NSP1的抗体,用于鉴定NSP1蛋白及其分布。采用RT-PCR技术扩增GETV的非结构蛋白NSP1基因,构建了NSP1蛋白的原核表达质粒pET-NSP1,转化至大肠杆菌BL21(DE3)诱导大量表达。纯化原核表达的目的蛋白,免疫BALB/c小鼠,制备了NSP1蛋白的多克隆抗体,间接ELISA效价达1∶10^(5)以上。Western blot和免疫荧光试验(IFA)结果显示,NSP1蛋白多克隆抗体与GETV有良好的反应性。NSP1蛋白多克隆抗体的制备,为进一步研究该蛋白在盖塔病毒复制周期中的功能奠定了基础。

关键词：多克隆抗体 NSP1基因非结构蛋白盖塔病毒

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R-26合金电渣重熔Ti含量控制研究

钢铁研究学报 2011年第S2期23卷 282-285页

作者：粟硕攀钢集团江油长城特殊钢有限公司高温合金研究室四川江油621704

针对R-26合金在电渣重熔时Ti烧损严重和重熔各时期Ti烧损不均匀的问题,进行相关电渣试验,分析Ti烧损原理,提出相应解决措施。母材电极棒Ti含量控制在3.00%~3.10%范围内,有利于电渣重熔Ti含量控制在2.5%~3.0%;采用Ca F2、Al2O3、Mg O和Ti... 详细信息

针对R-26合金在电渣重熔时Ti烧损严重和重熔各时期Ti烧损不均匀的问题,进行相关电渣试验,分析Ti烧损原理,提出相应解决措施。母材电极棒Ti含量控制在3.00%~3.10%范围内,有利于电渣重熔Ti含量控制在2.5%~3.0%;采用Ca F2、Al2O3、Mg O和Ti O2组成的四元渣系进行电渣重熔优于传统的二元渣系,Ti的烧损量降低,头尾偏差小;在四元渣系基础上,根据母材电极棒的Ti含量,采取在渣中补加适量Ti O2粉,电极棒均匀加入适量Al粉的办法可更好的控制Ti的烧损,头尾偏差可控制在0.15%范围内。

关键词： R-26合金电渣重熔 Ti烧损控制

鸡传染性支气管炎诊断方法研究进展及应用概况

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中国预防兽医学报 2013年第1期35卷 77-80页

作者：粟硕张桂红华南农业大学兽医学院广东广州510642

鸡传染性支气管炎（Avian infectious bronchitis，IB）是由冠状病毒科冠状病毒属中的IB病毒（IBV）引起的鸡的一种急性高度接触性呼吸道传染病。该病首先由Schalk等于1931年在美国发现，我国于1972年由邝荣禄等首次在广东报道；目前该... 详细信息

鸡传染性支气管炎（Avian infectious bronchitis，IB）是由冠状病毒科冠状病毒属中的IB病毒（IBV）引起的鸡的一种急性高度接触性呼吸道传染病。该病首先由Schalk等于1931年在美国发现，我国于1972年由邝荣禄等首次在广东报道；目前该病呈世界性流行，是危害养禽业的重大传染病之一。

关键词：鸡传染性支气管炎诊断方法应用呼吸道传染病冠状病毒属冠状病毒科重大传染病接触性

猪δ冠状病毒核衣壳蛋白互作的蛋白鉴定及分析

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病毒学报 2021年第4期37卷 900-909页

作者：张钧彦贺微粟硕南京农业大学免疫研究所南京210000

初步筛选与鉴定PDCoV N蛋白的宿主互作蛋白。利用免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,CO-IP)和LCMS/MS质谱技术筛选出PDCoV N蛋白的宿主互作蛋白,并进行生物信息学分析,再利用免疫共沉淀进行鉴定。通过免疫共沉淀产物的SDS-PAGE分析发现... 详细信息

初步筛选与鉴定PDCoV N蛋白的宿主互作蛋白。利用免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,CO-IP)和LCMS/MS质谱技术筛选出PDCoV N蛋白的宿主互作蛋白,并进行生物信息学分析,再利用免疫共沉淀进行鉴定。通过免疫共沉淀产物的SDS-PAGE分析发现在40 kD和100 kD左右有明显的差异蛋白条带,通过质谱筛选到了68个与PDCoV N蛋白互作的宿主蛋白,并做了GO、COG和KEGG注释,挑选出2个候选互作蛋白,经过免疫共沉淀验证,PDCoV N蛋白与TUBB2B存在互作关系。该研究为进一步探索PDCoV N蛋白在病毒感染细胞时的作用提供了新方向。

关键词：猪δ冠状病毒核衣壳蛋白免疫共沉淀质谱互作蛋白

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日情报体制改革：为军国主义开道

环球军事 2014年第21期 60-62页

作者：粟硕

2014年10月14日，日本内阁会议正式通过了《特定秘密保护法》的运用标准和相关政令，并确认该法将于今年12月10日正式实施。如此一来，日本政府在其情报体制改革的道路上又取得了新的“成果”，其国民对政府和自卫队相关信息的知情权也... 详细信息

2014年10月14日，日本内阁会议正式通过了《特定秘密保护法》的运用标准和相关政令，并确认该法将于今年12月10日正式实施。如此一来，日本政府在其情报体制改革的道路上又取得了新的“成果”，其国民对政府和自卫队相关信息的知情权也将受到严重侵害。二战结束后，日本政府和军队相关部门为了满足情报需求，相继成立了一系列情报机构，其情报体制也伴随着国际局势和国内形势的发展不断进行着调整和改革。

关键词：情报体制改革军国主义日本政府情报机构国内形势日本内阁情报需求国际局势