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异鼠李素通过抑制LncRNA-gm33782减轻AKI肾小管炎性细胞凋亡

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中国实验动物学报 2024年第6期32卷 762-771页

作者：贾建谭睿陟钟霞粟宏伟王丽西南医科大学附属中医医院中西医结合研究中心四川泸州646000 西南医科大学附属中医医院泌尿外科四川泸州646000

目的探讨长链非编码RNA-gm33782(LncRNA-gm33782)在急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)肾小管损伤中的功能以及异鼠李素改善肾小管炎性细胞凋亡的作用机制。方法将48只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、治疗组(AKI模型构建后... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA-gm33782(LncRNA-gm33782)在急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)肾小管损伤中的功能以及异鼠李素改善肾小管炎性细胞凋亡的作用机制。方法将48只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、治疗组(AKI模型构建后灌胃给予30 mg/kg异鼠李素)、空载质粒电转染组、LncRNA-gm33782敲低组、LncRNA-gm33782过表达组、LncRNA-gm33782敲低组+模型组、LncRNA-gm33782过表达+治疗组8组,通过腹腔一次性注射20 mg/kg顺铂诱导小鼠AKI,原位电转染技术用于介导肾LncRNA-gm33782的敲低和过表达。采用Chirp实验捕获AKI肾LncRNA-gm33782结合蛋白进行质谱分析,挖掘LncRNA-gm33782直接作用靶蛋白;通过观察电转染敲低LncRNA-gm33782和异鼠李素(isorhamnetin,ISO)治疗干预后小鼠肾功能、病理结构改变、肾炎性因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)表达,评价LncRNA-gm33782在AKI中的作用;NF-κB被作为介导炎症的关键信号通路,Bax、Bcl-2蛋白表达量以及流式凋亡检测结果被用于评价异鼠李素对AKI肾小管炎性细胞凋亡的治疗作用。结果AKI小鼠肾表现出严重的肾小管损伤以及巨噬细胞浸润和炎症,异鼠李素的治疗干预和LncRNA-gm33782电转染敲低均能够减轻AKI肾损伤。LncRNA-gm33782主要表达于AKI损伤的肾小管细胞,质谱检测发现补体因子-H(complement factor-H,CFH)与其有直接结合关系。体外过表达LncRNA-gm33782后,CFH表达量随即升高,而异鼠李素对AKI细胞炎性凋亡的治疗作用受到抑制。结论异鼠李素是通过抑制LncRNA-gm33782对CFH的调控作用减轻AKI肾小管细胞炎性凋亡。

关键词：急性肾损伤 LncRNA-gm33782 肾原位电转染异鼠李素炎性凋亡

柴黄益肾颗粒对单侧输尿管梗阻小鼠肾纤维化的作用及其机制

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解放军医学杂志 2024年

作者：谢柯欢张浩军谭睿陟粟宏伟刘鹏李平王丽北京中日友好医院临床医学研究所北京顺义区中医医院肾病科西南医科大学附属中医医院泌尿外科西南医科大学附属中医医院中西结合研究中心

目的　探讨柴黄益肾颗粒对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾纤维化的作用及其作用机制。方法　将24只8周龄C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、模型组及柴黄益肾颗粒低、高剂量组(n=6)。对照组仅暴露且游离右侧肾输尿管；模型组行单侧输尿管梗阻... 详细信息

目的　探讨柴黄益肾颗粒对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾纤维化的作用及其作用机制。方法　将24只8周龄C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、模型组及柴黄益肾颗粒低、高剂量组(n=6)。对照组仅暴露且游离右侧肾输尿管；模型组行单侧输尿管梗阻建立UUO动物模型；柴黄益肾颗粒低、高剂量组按模型组方法建立UUO小鼠模型并分别予以3.8、7.6 g/kg柴黄益肾颗粒灌胃小鼠，7 d后麻醉处死小鼠收集肾标本。采用HE、Masson染色观察各组肾脏病理变化及纤维化程度，天狼星红染色观察胶原沉积情况。采用Western blotting检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、糖原合成酶激酶3β(Gsk3β)、β-连环蛋白(β-catenin)相关蛋白的表达水平。采用RT-PCR检测A33、Gsk3β、β-catenin mRNA水平的变化。同时，利用转化生长因子-β(TGF-β)刺激肾小管上皮细胞(TCMK1)建立体外纤维化模型，柴黄益肾颗粒含药血清处理建立体外用药模型；并通过转染A33过表达质粒在TCMK1细胞内过表达A33，观察纤维化相关指标及A33、Gsk3β、β-catenin mRNA的表达变化。结果　RT-PCR检测结果显示，与对照组比较，模型组A33 mRNA水平明显升高，而柴黄益肾颗粒高、低剂量组则明显降低(P<0.05)。Western blotting检测结果显示，模型组α-SMA、FN、Col-Ⅰ等纤维化相关因子的表达水平明显高于对照组(P<0.05)；而与模型组比较，柴黄益肾颗粒低、高剂量组α-SMA、FN、Col-Ⅰ的表达水平则明显降低(P<0.05)。HE、Masson、免疫组化染色结果显示，与对照组比较，模型组肾脏结构损伤严重，胶原沉积明显增加，且Gsk3β、β-catenin蛋白表达水平明显升高(P<0.01)；与模型组比较，柴黄益肾颗粒低、高剂量组肾脏结构良好，肾脏损伤及纤维化程度均明显好转，Gsk3β、β-catenin蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。体外实验结果证实，与正常组比较，A33过表达可促进TCMK1细胞纤维化相关因子的上调，明显增加Wnt-β-catenin信号通路下游靶点Gsk3β和β-catenin mRNA的表达(P<0.05)，且A33过表达可逆转柴黄益肾颗粒含药血清下调的细胞纤维化改变(P<0.01)。结论　柴黄益肾颗粒可通过下调A33/Wnt/β-catenin信号通路明显改善UUO小鼠肾脏纤维化，且A33可能是肾纤维化的一个潜在治疗靶标。

关键词：柴黄益肾颗粒肾纤维化 Wnt/β-catenin信号通路

龙胆苦苷腹腔注射对单侧输尿管梗阻小鼠肾间质纤维化的改善作用及其机制

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山东医药 2024年第2期64卷 22-26页

作者：彭炳鸿曾琪谭睿陟粟宏伟刘建西南医科大学附属医院肾病内科四川泸州646000 西南医科大学附属中医医院中西医结合研究中心西南医科大学附属中医医院泌尿外科西南医科大学附属中医医院肾病内科

目的探讨龙胆苦苷(GPS)对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化的改善作用及其机制。方法将25只C57BL/6雄性小鼠随机分为假手术组、模型对照组、GPS低剂量组、GPS高剂量组、厄贝沙坦组,每组各5只。假手术组正常饲养,其余四组采用结扎... 详细信息

目的探讨龙胆苦苷(GPS)对单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化的改善作用及其机制。方法将25只C57BL/6雄性小鼠随机分为假手术组、模型对照组、GPS低剂量组、GPS高剂量组、厄贝沙坦组,每组各5只。假手术组正常饲养,其余四组采用结扎单侧输尿管的方式建立UUO模型。造模成功后,GPS低、高剂量组分别给予0.1、0.2 g/kg GPS腹腔注射,厄贝沙坦组给予0.02 g/kg厄贝沙坦腹腔注射,模型组和假手术组给予等体积生理盐水腹腔注射,连续7 d。处死小鼠,取肾脏组织,采用HE染色法观察肾组织形态学变化,Masson染色法观察肾组织纤维化情况,采用Western blotting法、RT-qPCR法检测肾组织纤连蛋白(Fn)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白及mRNA表达。另取6只小鼠,随机分为模型组和干预组各3只,建立UUO模型后,干预组给予0.2 g/kg GPS腹腔注射,模型组给予等体积生理盐水腹腔注射,连续7 d。处死小鼠,取肾脏组织进行转录组测序,分析两组差异表达基因,并进行GO和KEGG通路富集,最后采用RT-qPCR法进行验证。结果与假手术组比较,模型对照组肾小管明显扩张,肾组织大量炎性细胞浸润,肾间质大量胶原纤维沉积;与模型对照组比较,GPS低、高剂量组肾脏组织肾小管扩张、炎性细胞浸润有一定程度减轻,肾间质纤维化改善,其中GPS高剂量组改善效果更明显。与假手术组比较,模型对照组肾脏组织Fn、α-SMA蛋白及mRNA表达水平均升高;与模型对照组比较,GPS低、高剂量组肾脏组织Fn、α-SMA蛋白及mRNA表达水平均降低,且GPS高剂量组低于低剂量组(P均<0.05)。测序分析结果显示,模型组与干预组存在710个差异表达基因。GO富集分析显示,差异表达基因主要集中在细胞进程、生物调节、生物进程调控等方面;KEGG通路富集分析发现,差异表达基因涉及Ras、Rap1、PI3K/AKT、MAPK信号通路等。筛选出2个有效基因HGF、CCDC3进行验证,干预组肾组织HGF、CCDC3表达水平较模型组升高(P均<0.05),与测序结果一致。结论 GPS能够有效改善UUO小鼠肾脏纤维化,且高剂量GPS改善作用更明显;其作用机制可能与上调HGF及CCDC3表达作用于Rap1、Ras、PI3K/AKT、MAPK信号通路等生物学途径有关。

关键词：龙胆苦苷肾间质纤维化纤连蛋白 α平滑肌肌动蛋白输尿管梗阻转录组测序

利用CRISPR/Cas9技术构建Pmepa1基因敲除的TCMK1小鼠肾小管上皮细胞系

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生物技术通报 2024年第2期40卷 73-79页

作者：张宏民龙雯劳筱清陈雯妍商雪梅王洪连王丽粟宏伟沈宏萍沈宏春西南医科大学中西医结合学院泸州646000 西南医科大学附属中医医院泸州646000

【目的】利用CRISPR/Cas9技术构建Pmepa1基因敲除的TCMK1小鼠肾小管上皮细胞系,并探讨Pmepa1敲除对TGF-β刺激下TCMK1细胞纤维化的影响,为研究Pmepa1在纤维化模型中的作用提供细胞模型。【方法】根据CRISPR/Cas9设计原则设计靶向小鼠Pme... 详细信息

【目的】利用CRISPR/Cas9技术构建Pmepa1基因敲除的TCMK1小鼠肾小管上皮细胞系,并探讨Pmepa1敲除对TGF-β刺激下TCMK1细胞纤维化的影响,为研究Pmepa1在纤维化模型中的作用提供细胞模型。【方法】根据CRISPR/Cas9设计原则设计靶向小鼠Pmepa1基因组序列的sgRNA序列,构建pX333载体并转染进入TCMK1细胞,采用流式分选m Cherry阳性细胞、单克隆细胞扩增和测序鉴定Pmepa1敲除细胞,Western blot验证Pmepa1基因敲除情况。采用RT-PCR和Western blot分析Pmepa1敲除对TGF-β1诱导的R-Smad的活化和纤维化的影响。【结果】将sgRNA设计在Pmepa1第2个外显子,pX333-Pmepa1质粒转染TCMK1细胞48 h后,观察到mCherry荧光蛋白的表达,流式细胞分析转染效率约为17%,pX333-Pmepa1质粒转染阳性细胞经流式分选和单克隆扩增培养,得到19个细胞克隆,对Pmepa1基因位点上sgRNA靶点序列PCR扩增测序分析发现2个双等位基因移码突变细胞,Western blot验证Pmepa1蛋白表达缺失,表明Pmepa1基因敲除TCMK1细胞株构建成功,与未敲除细胞相比,Pmepa1敲除细胞在TGF-β1刺激下,p-Smad2和p-Smad3的表达显著升高,并且促进纤维化基因Fibronectin和Collagen I的表达。【结论】利用CRISPR/Cas9技术成功构建Pmepa1基因敲除TCMK1小鼠肾小管上皮细胞系,为Pmepa1蛋白的功能研究建立了细胞模型以及Pmepa1在纤维化中的重要作用。

关键词： CRISPR/Cas9技术 Pmepa1 TCMK1细胞系纤维化

柴黄益肾颗粒抑制巨噬细胞Mincle改善小鼠慢性肾病模型肾纤维化

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中药新药与临床药理 2023年第12期34卷 1658-1667页

作者：谭睿陟邹远霞刘鹏粟宏伟李平王丽西南医科大学附属中医医院中西医结合研究中心四川泸州646000 北京中医医院顺义医院肾病科北京101320 西南医科大学附属中医医院泌尿外科四川泸州646000 北京中日友好医院临床医学研究所免疫介导炎症疾病北京重点实验室北京100029

目的研究柴黄益肾颗粒对小鼠慢性肾病模型肾脏纤维化的影响及潜在作用机制。方法将36只C57BL/6雄性小鼠随机均分为假手术组、模型组、柴黄益肾颗粒低剂量(3.835 g·kg^(-1))组、柴黄益肾颗粒高剂量(7.67 g·kg^(-1))组、阳性对照厄贝沙... 详细信息

目的研究柴黄益肾颗粒对小鼠慢性肾病模型肾脏纤维化的影响及潜在作用机制。方法将36只C57BL/6雄性小鼠随机均分为假手术组、模型组、柴黄益肾颗粒低剂量(3.835 g·kg^(-1))组、柴黄益肾颗粒高剂量(7.67 g·kg^(-1))组、阳性对照厄贝沙坦组和柴黄益肾颗粒高剂量+Mincle激动剂海藻糖-6,6-二苯甲酸酯(trehalose-6,6-dibehenate,TDB)组(术后1 h,一次性腹腔注射TDB 10 mg·kg^(-1))。采用单侧输尿管结扎法(UUO)建立小鼠肾脏纤维化模型。术后1 h,各药物组给小鼠灌胃相应药物,假手术组和模型组灌胃生理盐水,每日1次,连续7 d。通过苏木精-伊红染色和天狼星红染色观察各组小鼠肾脏病理变化和纤维化改变,采用Real-time PCR和ELISA法检测各组肾脏中炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达和分泌,免疫组化和Western Blot法检测纤维化指标α-SMA和Fn的蛋白水平,免疫荧光和Western Blot法检测Mincle及其下游信号Syk/NF-κB的蛋白水平,流式细胞术分析Mincle阳性的巨噬细胞比例。结果与模型组比,柴黄益肾颗粒低、高剂量组均能有效改善UUO诱导的肾脏损伤和纤维化,抑制肾脏α-SMA和Fn的蛋白水平(P<0.01)。同时,柴黄益肾颗粒高剂量组可有效降低UUO模型肾脏炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达和分泌(P<0.01),抑制NF-κB的磷酸化(P<0.01)。机制研究表明,柴黄益肾颗粒高剂量组可明显下调UUO小鼠肾脏中巨噬细胞Mincle的蛋白水平以及下游信号Syk的活性(P<0.01)。采用Mincle激动剂TDB激活Mincle后,柴黄益肾颗粒高剂量组改善的肾脏损伤、炎症因子分泌和纤维化效果明显减弱(P<0.05,P<0.01)。结论柴黄益肾颗粒可改善UUO诱导的小鼠肾损伤、炎症和纤维化,其作用机制可能与下调巨噬细胞Mincle/Syk/NF-κB信号有关。

关键词：柴黄益肾颗粒巨噬细胞 Mincle 单侧输尿管结扎法(UUO) 慢性肾病肾脏纤维化小鼠

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仅测角机动目标跟踪原始对偶高斯粒子滤波

电子与信息学报 2024年第4期46卷 1408-1417页

作者：张宏伟中山大学航空航天学院深圳518107

为消减仅测角机动目标跟踪系统中由时空不一致引起的投影基点偏移和高斯截断两类误差,该文采用映射表示和?1-?2,1稀疏正则表征时空因果一致约束,引入模糊综合贴近度建立次优建议分布,构建因果不变结构传递粒子集合以近似目标后验高斯积... 详细信息

为消减仅测角机动目标跟踪系统中由时空不一致引起的投影基点偏移和高斯截断两类误差,该文采用映射表示和?1-?2,1稀疏正则表征时空因果一致约束,引入模糊综合贴近度建立次优建议分布,构建因果不变结构传递粒子集合以近似目标后验高斯积分,推导原始对偶高斯粒子滤波(PDGPF)算法。实验结果表明,相比交会测量最小二乘法,PDGPF算法定位旋翼无人机(UAV)的精度提升了18.4%~69.6%。相比于软约束辅助粒子滤波(SCAPF)算法,PDGPF算法在时空映射一致约束下能够自适应地修正粒子的权值,从而更为准确、稳定地跟踪机动点目标,整体计算负担减小了12.9%。

关键词：机动目标跟踪仅测角时空不一致原始对偶因果不变

血清胱抑素C评估肾移植患者肾小球滤过率的价值

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血清胱抑素C评估肾移植患者肾小球滤过率的价值

作者：粟宏伟四川大学

学位级别：硕士

目的:探讨在肾移植患者中检测血清胱抑素C（Serum Cystatin C,SCysC）浓度评估肾小球滤过率（GFR）的可行性和临床应用价值。方法:共纳入39例初次肾移植患者,男22例,女17例。分别于术晨、术后1周、4周检测SCysC、血清肌酐（Scr）、尿... 详细信息

目的:探讨在肾移植患者中检测血清胱抑素C（Serum Cystatin C,SCysC）浓度评估肾小球滤过率（GFR）的可行性和临床应用价值。方法:共纳入39例初次肾移植患者,男22例,女17例。分别于术晨、术后1周、4周检测SCysC、血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、尿酸（UA）等指标。SCysC检测采用颗粒增强透射免疫比浊法（PETIA）;采用Cockroft-Gault公式计算肌酐清除率（Ccr）。将术后患者按Ccr水平分为4组:A组（17例次）:Ccr>80ml/min/1.73m;B组（38例次）:50ml/min/1.73m

关键词：胱抑素C 肾移植肾小球滤过率血清肌酐肌酐清除率

产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌致尿路感染危险因素的Meta分析

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当代医学 2023年第22期29卷 1-7页

作者：姜好粟宏伟罗小全西南医科大学附属中医医院泌尿外科四川泸州646000

目的评价产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌所致尿路感染(UTI)的危险因素。方法检索中国期刊全文数据库(中国知网)、中国学术期刊数据库(万方)、中文科技期数据库(维普)、中国生物医学文献数据库及PubMed、Embase、WebofScience 2000... 详细信息

目的评价产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌所致尿路感染(UTI)的危险因素。方法检索中国期刊全文数据库(中国知网)、中国学术期刊数据库(万方)、中文科技期数据库(维普)、中国生物医学文献数据库及PubMed、Embase、WebofScience 2000年1月至2021年6月年发表的关于产ESBLs大肠埃希菌UTI的病例对照研究和队列研究。通过对文献筛选、质量评价、数据提取后采用Revman 5.3软件进行Meta分析。结果最终共纳入文献13篇,包含产ESBLs大肠埃希菌UTI患者1228例,非产ESBLs大肠埃希菌UTI患者4966例,从文献中提取与产ESBLs大肠埃希菌UTI相关的危险因素共21个。在21个危险因素中年龄≥65岁、住院史、入住ICU史、尿路感染史、反复尿路感染≥3次/年、手术史、泌尿外科手术史、留置尿管、肿瘤、激素使用史、免疫抑制剂使用史、抗生素使用史、使用头孢、使用三代头孢、使用氟喹诺酮、使用碳青霉烯的Meta分析结果差异有统计学意义(P<0.05),而患者性别、糖尿病、化疗史、使用青霉素类、二代头孢与产ESBLs大肠埃希菌UTI未见明显关联。对纳入文献数目≥10篇的危险因素运用RevMan的漏斗图评估发表偏倚,其中抗生素使用史漏斗图不对称存在发表偏倚。结论年龄≥65岁、住院史、入住ICU史、尿路感染史、反复尿路感染≥3次/年、手术史、泌尿外科手术史、留置尿管、肿瘤,激素使用史、免疫抑制剂使用史、抗生素使用史、使用头孢、使用三代头孢、使用氟喹诺酮、使用碳青霉烯是产ESBLs大肠埃希菌所致UTI的危险因素,医务人员应针对以上危险因素予以重点关注,采取必要措施以减少产ESBLs大肠埃希菌UTI的发生。

关键词：尿路感染产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌危险因素 Meta分析

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非石油原料合成己二腈研究进展

科学通报 2024年第3期69卷 370-380页

作者：陈颖周宏伟俞磊嘉兴学院生物与化学工程学院嘉兴314001 扬州大学化学化工学院扬州225002

己二腈是一种重要的有机化工中间体.己二腈加氢后可制备己二胺,主要用于生产尼龙-66,故而市场应用前景巨大.传统的己二腈合成方法需要使用大量的石油原料,具有很多的发展制约.因此,近年来,以非石油原料合成制备己二腈的研究备受关注.本... 详细信息

己二腈是一种重要的有机化工中间体.己二腈加氢后可制备己二胺,主要用于生产尼龙-66,故而市场应用前景巨大.传统的己二腈合成方法需要使用大量的石油原料,具有很多的发展制约.因此,近年来,以非石油原料合成制备己二腈的研究备受关注.本文对目前已发表的关于非石油原料合成己二腈的研究成果进行了总结,包括基于生物质、煤基和其他可再生资源的合成方法以及使用酶催化、电催化、化学催化等不同的合成策略.本文还结合现有的路线汇总了当前有望被开发的反应路径,并探讨了未来可能的研究方向和应用前景.需要强调的是,开发具有自主知识产权的己二腈合成工艺对于我国尼龙-66产业的发展至关重要,如何有效地开发新型己二腈合成技术将是未来面临的重大挑战.本文对非石油原料合成己二腈的研究进行了展望,为相关产业的路线设计和开发提供参考.

关键词：己二腈尼龙-66 生物质煤可再生资源