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7例激光心肌血管重建术的护理配合

中华护理杂志 1998年第1期33卷 9-11页

作者：郑惠俊宋玲米立娟首都医科大学附属北京安贞医院手术室

自１９９７年７月３～５日，为７例晚期重症冠心病患者施行了激光心肌血管重建术获得成功。重点报告手术室护士对病人的心理护理、术前准备、术中配合，并根据本组病例的特点，阐述了给予病人情感支持及医护密切配合的重要性，介绍了激... 详细信息

自１９９７年７月３～５日，为７例晚期重症冠心病患者施行了激光心肌血管重建术获得成功。重点报告手术室护士对病人的心理护理、术前准备、术中配合，并根据本组病例的特点，阐述了给予病人情感支持及医护密切配合的重要性，介绍了激光心肌血管重建术的发展前景，提出护理人员的工作目标。

关键词：冠心病护理心肌血管重建激光疗法

椎管内麻醉下行心脏不停跳冠状动脉旁路移植术的护理配合

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中华护理杂志 2010年第11期45卷 1024-1025页

作者：王静许宁米立娟首都医科大学附属北京安贞医院手术室北京市100029

总结了7例椎管内麻醉下行心脏不停跳冠状动脉旁路移植术的护理配合要点。术中积极配合,维持胸廓连续性,防止损伤膈神经分支等,避免一切可能增加患者呼吸阻力的行为,减少心肌应激性,增加心肌供血。7例手术均顺利完成,效果满意。

关键词：冠状动脉旁路移植术,非体外循环麻醉,传导手术中护理

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人性化护理在手术室护理中的应用

实用临床护理学电子杂志 2019年第21期4卷 61-61页

作者：米立娟北京安贞医院

目的探析人性化护理在手术室护理中的应用价值。方法选取2016.01～2018.01于我院行手术治疗的80例病患,采用隐匿数字随机法将其分为两组,每组40例。研究组采用人性化护理,对照组采用基础护理,对比护理效果。结果入室前及术后研究组焦虑... 详细信息

目的探析人性化护理在手术室护理中的应用价值。方法选取2016.01～2018.01于我院行手术治疗的80例病患,采用隐匿数字随机法将其分为两组,每组40例。研究组采用人性化护理,对照组采用基础护理,对比护理效果。结果入室前及术后研究组焦虑、抑郁评分及安全事件发生率均低于对照组,差异显著(P<0.05)。结论人性化护理应用于手术室护理中可缓解患者负面情绪,减少安全事件,值得推广应用。

关键词：手术室人性化护理基础护理

猪繁殖与呼吸综合征病毒核蛋白单克隆抗体的制备和初步鉴定

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吉林农业大学学报 2012年第6期34卷 661-666页

作者：米立娟吕宗吉张守峰刘晔王永志扈荣良吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 佛山科学技术学院佛山528200 军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室长春130122 吉林省农业科学院长春130133

克隆了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CC-11株的N基因全序列,将其克隆至原核表达载体pET28a,转化***株后经0.5 mmol/L IPTG诱导,获得了高水平表达。对表达的N蛋白进行纯化,以50μgN蛋白免疫BALB/c小鼠,3次免疫后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细... 详细信息

克隆了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CC-11株的N基因全序列,将其克隆至原核表达载体pET28a,转化***株后经0.5 mmol/L IPTG诱导,获得了高水平表达。对表达的N蛋白进行纯化,以50μgN蛋白免疫BALB/c小鼠,3次免疫后,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,通过间接ELISA筛选,获得9B12、7C2、7C6共3株稳定分泌抗PRRSV-N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,亚型鉴定结果分别为IgG2b、IgG1、IgG1亚型。通过Western blot分析和间接免疫荧光测定表明,3株单抗对PRRSV CC-11株、CH-1R和JXA1-R细胞毒以及4份临床疑似病料均发生特异性反应。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 N蛋白单克隆抗体

犬细小病毒VP2蛋白重组人5型腺病毒的构建

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中国生物制品学杂志 2013年第5期26卷 599-602页

作者：杨洋宫婷米立娟赵敬慧陈奇钱方刘晔张守峰扈荣良吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室吉林长春130122

目的构建犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)VP2蛋白重组人5型腺病毒。方法将从CPV中PCR扩增的VP2基因克隆至穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA中,经酶切及测序鉴定,将构建正确的重组穿梭质粒pacAd5-cVP2与骨架质粒pacAd5 9.2-100经PacⅠ酶切线性... 详细信息

目的构建犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)VP2蛋白重组人5型腺病毒。方法将从CPV中PCR扩增的VP2基因克隆至穿梭质粒pacAd5 CMVK-NpA中,经酶切及测序鉴定,将构建正确的重组穿梭质粒pacAd5-cVP2与骨架质粒pacAd5 9.2-100经PacⅠ酶切线性化,共转染293AD细胞,进行同源重组,包装出重组腺病毒rAd5v-cVP2,按Karber法计算重组腺病毒的病毒滴度(TCID50)。电镜下观察重组腺病毒的形态;RT-PCR及Western blot法检测CPV VP2基因mRNA的转录及蛋白的表达水平。结果重组穿梭质粒pacAd5-cVP2经酶切及测序证明构建正确;包装出的重组腺病毒rAd5v-cVP2的病毒滴度可稳定在108.25TCID50/ml;电镜下观察可见典型的腺病毒外型特征;重组腺病毒感染的293AD细胞可检测到VP2基因的转录和表达。结论已成功构建了CPV VP2蛋白重组人5型腺病毒。

关键词：细小病毒,犬 VP2基因腺病毒,人

小反刍兽疫病毒N蛋白的原核表达、纯化及其抗体间接ELISA检测方法的建立

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中国生物制品学杂志 2017年第8期30卷 838-842,846页

作者：王东方刘晔米立娟张守峰扈荣良吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室吉林长春130122

目的原核表达小反刍兽疫病毒(Peste des petits of ruminants virus,PPRV)N蛋白,纯化后建立其抗体间接ELISA检测方法。方法人工合成PPRV N蛋白基因序列,并构建重组质粒pSumo-mut-N,转化至大肠埃希菌Arctic Express中,IPTG诱导表达,并对I... 详细信息

目的原核表达小反刍兽疫病毒(Peste des petits of ruminants virus,PPRV)N蛋白,纯化后建立其抗体间接ELISA检测方法。方法人工合成PPRV N蛋白基因序列,并构建重组质粒pSumo-mut-N,转化至大肠埃希菌Arctic Express中,IPTG诱导表达,并对IPTG浓度和诱导时间进行优化。表达的融合蛋白经Ni柱亲和层析纯化后,以其作为包被抗原建立PPRV抗体间接ELISA检测方法,对临床样本进行检测。结果重组表达质粒pSumo-mut-N经双酶切和测序证明构建正确。N蛋白最佳诱导表达条件为0.5 mmol/L IPTG于11℃诱导10 h。表达的重组蛋白相对分子质量约71 900,纯化后纯度在80%以上,浓度可达120μg/ml,与PPRV阳性抗体具有良好的反应原性。基于N蛋白建立的PPRV抗体间接ELISA方法样品检测结果与已知血清之间的符合率为100%。结论原核表达并纯化了PPRV N蛋白,建立的基于N蛋白的PPRV抗体ELISA检测方法为PPRV抗体间接ELISA检测试剂盒的研制和应用奠定了基础,对于流行病学免疫监测及控制PPRV的流行具有重要意义。

关键词：小反刍兽疫病毒 N蛋白原核表达抗体检测酶联免疫吸附测定

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狂犬病病毒糖蛋白单克隆抗体的制备

中国畜牧兽医 2012年第8期39卷 35-38页

作者：米立娟王永志刘晔张守峰扈荣良军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130122 吉林省农业科学院吉林长春130133

用狂犬病病毒BD06株脑毒免疫BALB/c小鼠,制备G蛋白单克隆抗体。将灭活的BD06脑毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,通过间接ELISA法和荧光抗体病毒中和试验法进行4轮筛选,获得6F12、1B12共2株具有中和活性的糖蛋... 详细信息

用狂犬病病毒BD06株脑毒免疫BALB/c小鼠,制备G蛋白单克隆抗体。将灭活的BD06脑毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,通过间接ELISA法和荧光抗体病毒中和试验法进行4轮筛选,获得6F12、1B12共2株具有中和活性的糖蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。通过Western blotting分析和直接免疫荧光检测结果显示,获得一株针对狂犬病病毒糖蛋白构象表位的单抗6F12和一株针对糖蛋白线性表位的单抗1B12。小鼠中和试验结果显示,两株杂交瘤细胞分泌的抗体均具有狂犬病病毒中和活性。结果表明,获得了两株针对狂犬病病毒G蛋白不同抗原表位的中和活性单克隆抗体,为狂犬病病毒特性研究和检测奠定了基础。

关键词：狂犬病病毒糖蛋白中和抗体单克隆抗体

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狂犬病抗血清在小鼠体内抗感染保护效果评价

中国生物制品学杂志 2016年第5期29卷 486-489页

作者：张静远陈腾刘晔米立娟张菲张守峰扈荣良军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130122

目的探讨被动免疫的狂犬病抗血清和免疫球蛋白(Ig G)对小鼠的攻毒保护作用及其可能的作用机制。方法单独使用Ig G,按照125、250、1 000 IU/kg体重的剂量,分别在攻击致死剂量的强毒前后注射平均体重(20±1)g的昆明小鼠,观察14 d(脑内攻毒... 详细信息

目的探讨被动免疫的狂犬病抗血清和免疫球蛋白(Ig G)对小鼠的攻毒保护作用及其可能的作用机制。方法单独使用Ig G,按照125、250、1 000 IU/kg体重的剂量,分别在攻击致死剂量的强毒前后注射平均体重(20±1)g的昆明小鼠,观察14 d(脑内攻毒)或28 d(外周攻毒)后,记录小鼠发病及死亡情况,计算存活率。同时以类似的方法使用不同效价的抗血清进行试验。结果在攻毒前先注射Ig G或抗血清的条件下,小鼠的存活率与被动免疫的Ig G剂量呈正比,当Ig G剂量达1 000 IU/kg时,小鼠可得到完全保护;在脑内攻毒后注射Ig G或抗血清的条件下,无论被动免疫的Ig G剂量高低,均不能提供任何保护;但在外周攻毒3 d后注射Ig G,高剂量的Ig G可提供部分保护。结论血脑屏障可能允许部分Ig G进入脑内,并在脑内病毒感染早期阻断病毒复制,但病毒在脑内开始复制后,给予任何剂量的Ig G均不能对病毒感染提供保护。

关键词：狂犬病抗血清剂量病毒攻击小鼠

稳定表达狂犬病病毒糖蛋白293T细胞系的构建及免疫原性研究

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中国兽医学报 2024年第11期44卷 2393-2399页

作者：汪芋张守峰于婷婷米立娟么乃全缪发明扈荣良吉林农业大学动物医学院中国农业科学院长春兽医研究所

为得到可用于狂犬病亚单位疫苗生产的高效表达狂犬病病毒(rabies virus, RABV)糖蛋白的细胞系，本研究以RT-PCR扩增获得RABV糖蛋白基因序列并克隆入慢病毒表达载体中。重组质粒pLV-RVG与包膜质粒pMD2.0G及包装质粒psPAX2共转染HEK-293T... 详细信息

为得到可用于狂犬病亚单位疫苗生产的高效表达狂犬病病毒(rabies virus, RABV)糖蛋白的细胞系，本研究以RT-PCR扩增获得RABV糖蛋白基因序列并克隆入慢病毒表达载体中。重组质粒pLV-RVG与包膜质粒pMD2.0G及包装质粒psPAX2共转染HEK-293T细胞，收获慢病毒并感染新的HEK-293T细胞，通过嘌呤霉素加压筛选获得293T-RVG细胞系。将此细胞系传代20代，间接免疫荧光法(IFA)及Western blot鉴定表明67 kDa的RABV-G蛋白在该细胞内能够高效表达；且细胞系冻融物293T-RVG辅以佐剂肌肉注射免疫小鼠，血清以FAVN法测定RABV中和抗体，在免疫14 d体内效价就可达到2.19 IU/mL,高于国际公认保护阈值(0.5 IU/mL)。本研究成功构建了稳定且高效表达RABV糖蛋白的细胞系293T-RVG,该细胞系能够对攻毒小鼠产生保护作用，可作为一种亚单位疫苗，具备用于大规模生产和应用潜能。

关键词：狂犬病狂犬病病毒糖蛋白慢病毒细胞系免疫试验亚单位疫苗