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黄花败酱茎秆二氯甲烷萃取相作用K562细胞的实验研究

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黄花败酱茎秆二氯甲烷萃取相作用K562细胞的实验研究

作者：米乐园兰州大学

学位级别：硕士

目的:探讨黄花败酱茎秆乙醇提取物的二氯甲烷萃取相(DPSS)对K562细胞增殖抑制、促进凋亡、诱导分化的作用,从细胞及分子水平初步探究DPSS对K562细胞的作用机制。方法:体外常规培养K562细胞,绘制生长曲线,用不同浓度DPSS(0、25、50、100... 详细信息

目的:探讨黄花败酱茎秆乙醇提取物的二氯甲烷萃取相(DPSS)对K562细胞增殖抑制、促进凋亡、诱导分化的作用,从细胞及分子水平初步探究DPSS对K562细胞的作用机制。方法:体外常规培养K562细胞,绘制生长曲线,用不同浓度DPSS(0、25、50、100和200μg/m L)分别作用于细胞24、48和72h后,采用MTT法检测K562细胞增殖情况;运用流式细胞术检测不同浓度DPSS对K562细胞凋亡、周期阻滞的影响;运用瑞氏-吉姆萨染色(Wright-Gimesa)观察DPSS作用后K562细胞形态学的变化并应用流式细胞术验证分化相关抗原CD33、CD11b的表达。采用Illumina测序技术(基于RNA-seq)对K562细胞和经过100μg/m L DPSS作用24h的K562细胞进行转录组测序分析,经Fast QC、Hisat2等软件将测序数据处理后,使用“limma”包进行差异分析筛选两组间差异表达基因,随后利用生物信息技术对差异基因进行GO富集,KEGG富集及蛋白互作网络构建,分析上调及下调基因对细胞生长的影响,最后选取部分基因利用q RT-PCR技术进行验证。结果:与对照组比较,加药组各浓度DPSS均对K562细胞的增殖有明显抑制作用,并且存在时间剂量依赖性(r=0.96);细胞周期结果表明,随着DPSS浓度升高,G0/G1期细胞减少(r=-0.70),G2/M期细胞增多(r=0.88),细胞被阻滞在G2/M期;凋亡结果显示,200μg/m L DPSS作用K562细胞48h,凋亡率最高;Wright-Gimesa染色结果显示,DPSS作用后K562细胞出现胞体增大,胞浆量增多,核浆比减小,核染色质粗糙等分化表现;细胞分化抗原检测发现DPSS作用后CD11b、CD33呈阳性表达。差异基因的结果分析表明,与对照组相比,100μg/m L DPSS组之间有1844个上调基因,2227个下调基因。GO基因功能注释表明,差异基因主要定位在细胞器、膜部分和大分子复合体部分;分子功能方面多数是具有催化活性、分子功能调节器和核酸结合转录因子活性;参与细胞过程、代谢过程和生物调节等26个生物过程。KEGG富集分析发现DEGs共涉及97条具有显著性的KEGG通路,主要通路包括代谢途径通路、细胞凋亡通路、自噬溶酶体通路、MAPK信号途径、嘧啶代谢、PI3K-AKT信号通路、P53信号通路及NF-kappa B信号途径等。结论:DPSS可以通过周期阻滞,诱导凋亡抑制K562细胞增殖,并且能够诱导K562细胞进一步分化。可能的机制是通过代谢途径通路、细胞凋亡通路、自噬溶酶体通路、MAPK信号途径、嘧啶代谢、PI3K-AKT信号通路、P53信号通路及NF-kappa B信号途径等通路诱导K562细胞分化及凋亡,从而具有潜在抗白血病细胞的作用。

关键词：黄花败酱茎杆抗白血病诱导分化细胞凋亡转录组分析

黄花败酱茎秆二氯甲烷萃取相对人白血病细胞K562增殖及分化的影响

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中国实验血液学杂志 2023年第1期31卷 25-32页

作者：米乐园李克晶李珊刘婷柴晓静张颖李娟兰州大学第一临床医学院甘肃兰州730000 甘肃省妇幼保健院临床检验中心甘肃兰州730050 兰州大学第一医院中心实验室甘肃兰州730000 甘肃省血液病遗传研究重点实验室甘肃兰州730000

目的:探讨黄花败酱茎秆乙醇提取物的二氯甲烷萃取相(DPSS)对K562细胞增殖抑制和诱导分化作用及其相关作用机制。方法:不同浓度DPSS(0、25、50、100和200μg/ml)分别作用于细胞24、48和72 h后,采用MTT法检测K562细胞增殖情况;应用流式细... 详细信息

目的:探讨黄花败酱茎秆乙醇提取物的二氯甲烷萃取相(DPSS)对K562细胞增殖抑制和诱导分化作用及其相关作用机制。方法:不同浓度DPSS(0、25、50、100和200μg/ml)分别作用于细胞24、48和72 h后,采用MTT法检测K562细胞增殖情况;应用流式细胞术检测不同浓度DPSS对K562细胞凋亡、周期阻滞的影响;应用瑞氏-吉姆萨染色观察DPSS作用后K562细胞形态学的变化并应用流式细胞术验证分化相关抗原CD33、CD11b的表达。结果:与对照组比较,加药组各浓度DPSS均对K562细胞的增殖有明显抑制作用,并且存在时间剂量依赖性(r=-0.96);细胞周期分析结果表明,随着DPSS浓度升高,G2/M期细胞增多(r=0.88),细胞被阻滞在G_(2)/M期;流式细胞术结果显示,当200μg/ml DPSS作用48 hK562细胞凋亡率最高;瑞氏-吉姆萨染色结果显示,DPSS作用后K562细胞出现胞体增大,包浆量增多,核浆比减小,核染色质粗糙等分化表现;细胞分化抗原检测发现,DPSS作用后CD33、CD11b呈阳性表达。结论:DPSS可以通过周期阻滞诱导K562细胞凋亡、抑制其增殖,并且能够诱导K562细胞向单核细胞分化,具有潜在抗白血病细胞的作用。

关键词：黄花败酱茎秆二氯甲烷萃取相 K562细胞诱导分化细胞凋亡

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妊娠剧吐孕妇呕吐蛔虫1例报道

中国热带医学 2022年第1期22卷 94-96页

作者：米乐园赵盼蒙洁张颖杨杰董雪梅甘肃省妇幼保健院甘肃兰州730050

现对一例罕见妊娠剧吐孕妇呕吐蛔虫病例诊疗过程进行报道,为临床诊疗提供参考。患者女性,26岁,孕21周,因妊娠期间多次呕吐当地治疗无效就医。经辅助检查后,以妊娠剧吐、低钾血症、低钠血症收治入院,在住院当天,呕吐物中发现一条条索状成... 详细信息

现对一例罕见妊娠剧吐孕妇呕吐蛔虫病例诊疗过程进行报道,为临床诊疗提供参考。患者女性,26岁,孕21周,因妊娠期间多次呕吐当地治疗无效就医。经辅助检查后,以妊娠剧吐、低钾血症、低钠血症收治入院,在住院当天,呕吐物中发现一条条索状成虫,长度约12 cm,后经鉴定为蛔虫成虫。该患者粪便常规检验时未检出虫卵,但是呕吐物中的虫体在盐水中浸泡3 d后可观察到成团蛔虫卵。考虑到常规抗寄生虫药物有胎儿致畸的风险,对该患者予以对症治疗,症状缓解后出院,并嘱其定期复查B超和粪便常规。该孕妇生活在城区,因工作原因曾经在甘肃省宕昌县生活过一段时间,而宕昌位于陇南,地形以山区为主,流行病学调查显示具有较高的蛔虫感染率,推测在此时感染蛔虫,为无症状感染,妊娠反应诱使蛔虫从口中排出。妊娠期感染蛔虫可致孕妇营养不良,影响胎儿生长发育,当存在胆道蛔虫症、肠穿孔、腹膜炎、阑尾炎及肝脓肿等合并症时,可导致流产、早产及死胎等,严重威胁母婴健康。提示检验人员在临床工作中,不应忽视寄生虫感染的可能性。

关键词：蛔虫妊娠剧吐呕吐

佛波酯化合物TPA诱导急性早幼粒细胞白血病细胞NB4增殖与凋亡的机制研究

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中国实验血液学杂志 2023年第5期31卷 1296-1302页

作者：赵盼张翀董雪梅颜鲁伟米乐园李亚娇康甲超王晶甘肃中医药大学公共卫生学院甘肃兰州730000 甘肃省妇幼保健院临床检验中心甘肃兰州730050 兰州大学第一临床医学院甘肃兰州730000

目的:探讨佛波酯化合物TPA对急性早幼粒细胞白血病细胞NB4增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法:CCK-8法检测不同浓度TPA在不同时间点对NB4细胞增殖的影响;瑞氏-吉姆萨染色观察NB4细胞形态学变化;流式细胞术检测TPA处理后NB4细胞周期、... 详细信息

目的:探讨佛波酯化合物TPA对急性早幼粒细胞白血病细胞NB4增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法:CCK-8法检测不同浓度TPA在不同时间点对NB4细胞增殖的影响;瑞氏-吉姆萨染色观察NB4细胞形态学变化;流式细胞术检测TPA处理后NB4细胞周期、凋亡情况;高通量微阵列分析和实时荧光定量PCR法分析TPA处理后NB4细胞m RNA的表达;Western blot检测CDKN1A、CDKN1B、CCND1、MYC、Bax、Bcl-2、c-Caspase 3、c-Caspase 9、PIK3R6、AKT和p-AKT的蛋白表达。结果:与对照组相比,TPA能抑制NB4细胞增殖,诱导细胞向成熟粒-单核系分化;诱导细胞G_(1)期阻滞及凋亡;差异表达的m RNA显著富集在PI3K/AKT通路;TPA能提高NB4细胞中CCND1、CCNA1、CDKN1A的m RNA水平,降低MYC的m RNA水平;TPA能上调NB4细胞中CDKN1A、CDKN1B、CCND1、Bax、c-Caspase 3、c-Caspase 9、PIK3R6蛋白水平,下调MYC、Bcl-2、p-AKT蛋白水平。结论:TPA通过调控PIK3/AKT信号通路诱导NB4细胞周期阻滞于G_(1)期并促进其凋亡。

关键词： TPA 急性早幼粒细胞白血病 NB4细胞增殖凋亡

甘肃地区1例短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症的诊断和基因突变分析

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中国优生与遗传杂志 2023年第10期31卷 2162-2165页

作者：郭媛媛王连赵倩冯暄郝胜菊米乐园王兴甘肃省妇幼保健院医学遗传中心甘肃兰州730050

目的探讨甘肃地区1例疑似新生儿短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(SCADD)患儿的新发基因突变特点和诊断依据。方法对2022年1—12月60150例新生儿利用串联质谱技术,检测滤纸片干血斑酰基肉碱水平,通过尿有机酸气相质谱检测技术及短链酰基辅酶... 详细信息

目的探讨甘肃地区1例疑似新生儿短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症(SCADD)患儿的新发基因突变特点和诊断依据。方法对2022年1—12月60150例新生儿利用串联质谱技术,检测滤纸片干血斑酰基肉碱水平,通过尿有机酸气相质谱检测技术及短链酰基辅酶A脱氢酶(ACADS)基因突变分析进一步诊断。结果发现1例SCADD高度可疑患儿,该患儿血串联质谱丁酰基肉碱(C4),及其与丙酰基肉碱(C3)和乙酰基肉碱(C2)的比值均增高;尿气相质谱乙酰甘氨酸和乙基丙二酸明显增高;全外显基因测序发现短链酰基辅酶A脱氢酶(ACADS)基因c.164C>T和c.1030-7T>G两个位点突变。结论通过血串联质谱技术可以筛出可疑SCADD患儿,配合尿有机酸测定和基因检测可明确诊断该代谢病,进而早干预,减少相关临床症状。

关键词：短链酰基辅酶A脱氢酶缺乏症基因突变链酰基辅酶A脱氢酶基因

新生儿非肌性肌球蛋白重链9基因相关疾病1例

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中华新生儿科杂志（中英文） 2023年第8期38卷 503-504页

作者：米乐园尹姣姣张钏胡晓燕赵盼董雪梅刘小晖甘肃省妇幼保健院临床检验中心兰州730050 甘肃省妇幼保健院医学遗传中心兰州730050 甘肃省妇保健院小儿综合内科兰州730050 甘肃省妇幼保健院产科兰州730050

本文报道1例非肌性肌球蛋白重链9基因相关疾病新生儿,患儿母亲孕前即发现血小板减少,治疗效果不佳,产前血小板波动于(9~71)×10^(9)/L,检测血小板功能正常,患儿生后血小板64×10^(9)/L,全外显子组测序发现母婴均存在MYH9基因第41号外显... 详细信息

本文报道1例非肌性肌球蛋白重链9基因相关疾病新生儿,患儿母亲孕前即发现血小板减少,治疗效果不佳,产前血小板波动于(9~71)×10^(9)/L,检测血小板功能正常,患儿生后血小板64×10^(9)/L,全外显子组测序发现母婴均存在MYH9基因第41号外显子c.5797C>T(***1933Ter)杂合变异,诊断明确,患儿无出血表现,未予治疗。

关键词：非肌性肌球蛋白重链9基因相关疾病 MYH9基因血小板减少症

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先兆流产孕妇感染迈氏唇鞭毛虫1例报告

中国感染控制杂志 2018年第11期17卷 1026-1027,1032页

作者：米乐园叶萍董雪梅赵慧敏卢云甘肃省妇幼保健院甘肃兰州730050

先兆流产是指妊娠28周前，出现下腹痛、宫颈口扩张、阴道出血症状，是妊娠过程中最常见的症状之一，不仅对孕妇的身心有较大的影响，而且对胎儿健康也有很大影响。引起先兆流产的原因很多，主要有遗传因素造成的胚胎异常、脐带供氧不足... 详细信息

先兆流产是指妊娠28周前，出现下腹痛、宫颈口扩张、阴道出血症状，是妊娠过程中最常见的症状之一，不仅对孕妇的身心有较大的影响，而且对胎儿健康也有很大影响。引起先兆流产的原因很多，主要有遗传因素造成的胚胎异常、脐带供氧不足、羊水疾病、胎盘病毒感染以及某些妇科炎症、孕妇营养不良等，但未见寄生虫感染引起流产的报道，现将我院一例先兆流产孕妇感染迈氏唇鞭毛虫（Chilomastix mesnili）病例报告如下。

关键词：先兆流产孕妇鞭毛虫迈氏唇鞭毛虫感染

Ni单原子负载氮掺杂多孔碳促进锂硫电池中的多硫化物转化

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Science China Materials 2024年第6期67卷 1938-1946页

作者：陈乐园孙焱焱常智柴思敏何琼潘安强 School of Materials Science and Engineering Central South UniversityChangsha 410083China School of Materials Science and Engineering Xinjiang UniversityUrumqi 830046China

由分散在氮掺杂碳载体上的原子级金属位点组成的单原子催化剂(M SAC@NC)因其具有最大的原子利用率、独特的物理化学性质和优异的催化活性,已成为Li-S电池中的高性能电催化材料.本文采用物理吸附和热解相结合的方法,成功制备了一系列具... 详细信息

由分散在氮掺杂碳载体上的原子级金属位点组成的单原子催化剂(M SAC@NC)因其具有最大的原子利用率、独特的物理化学性质和优异的催化活性,已成为Li-S电池中的高性能电催化材料.本文采用物理吸附和热解相结合的方法,成功制备了一系列具有相似结构和理化性质的M SAC@NC(M=Ni,Co,Fe).双球差校正高角环形暗场扫描透射电子显微镜和X射线吸收光谱表明成功形成了单原子金属位点.此外,对硫氧化还原反应的催化活性趋势为Ni SAC@NC>Co SAC@NC>Fe SAC@NC,其中Ni SAC@NC在0.5C下表现出1280.6mAh g^(-1)的最高容量,循环800次后,平均每圈容量衰减率仅为0.07%,具有优异的电池性能.

关键词： single-atomic catalyst electrocatalysis Li-S battery

子痫前期患者血流变、红细胞压积及血脂检测的临床研究

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子痫前期患者血流变、红细胞压积及血脂检测的临床研究