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基于JAK2/STAT3信号通路探讨雷公藤甲素诱导宫颈癌耐药细胞自噬性死亡的机制

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中国药学杂志 2022年第24期57卷 2099-2107页

作者：刘秀玲王茹娜符小春张海龙王培培赵广彩驻马店市中心医院肿瘤妇科河南驻马店463000 驻马店市中心医院药学部河南驻马店463000 山东大学齐鲁医院山东青岛266003

目的探讨雷公藤甲素(triptolide,TPL)增敏顺铂(cisplatin,DDP)促进宫颈癌耐药细胞自噬性死亡的作用机制。方法体外构建人宫颈癌DDP耐药细胞株HeLa/DR,分为空白组、DDP(10μg·mL^(-1))组、TPL组(50 nmol·L^(-1))、DDP+TPL组用于药效学... 详细信息

目的探讨雷公藤甲素(triptolide,TPL)增敏顺铂(cisplatin,DDP)促进宫颈癌耐药细胞自噬性死亡的作用机制。方法体外构建人宫颈癌DDP耐药细胞株HeLa/DR,分为空白组、DDP(10μg·mL^(-1))组、TPL组(50 nmol·L^(-1))、DDP+TPL组用于药效学研究;分为TPL组、N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC,5 mmol·L^(-1))组、TPL+NAC组、Janus激酶2/信号转导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)抑制剂AG490(8μg·mL^(-1))组、TPL+JAK2/转录信号传导子和激活子3(STAT3)激活剂RO8191(20μmol·L^(-1))组用于机制研究。采用CCK-8法检测细胞增殖率,计算半数抑制浓度(IC50)和药物敏感度指数(SI),采用中位药效法(chou-talalay)计算DDP和TPL联合用药指数(CI)。采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期分布;采用MitoTracker green和DQ BSA red染色观察溶酶体数量和吞噬功能;采用GFP-LC3和MitroTracker共定位染色法观察线粒体自噬体数量。Western blot法检测相关蛋白表达。结果TPL剂量≤200 nmol·L^(-1)时,CI<1,与DDP具有协同作用;50 nmol·L^(-1)TPL与DDP的协同作用最显著,可增加HeLa/DR细胞对DDP、5-氟尿嘧啶和紫杉醇的敏感性(SI=8.05±0.28,3.17±0.14,4.05±0.12)。与DDP组相比,TPL+DDP组细胞凋亡率和G0/G1期细胞比例明显升高(P<0.05)。此外,虽然LC3-Mitro共定位绿色荧光增多且线粒体总蛋白中LC3-II/LC3-I比值和Beclin1蛋白表达升高(P<0.05),但是DQ BSA red/Lysotracker green荧光比值降低(P<0.05)。与空白组相比,TPL组HeLa/DR细胞的2′,7′-二氯荧光素(DCF)荧光强度明显升高,而加入NAC后可显著降低活性氧(ROS)生成量,同时Beclin蛋白相对表达量和LC3-II/LC3-I蛋白比值降低。网络药理学揭示了TPL-宫颈癌-JAK2/STAT3通路之间的关系。Western blot结果显示,与空白组相比,TPL组、AG490组p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3蛋白表达比值明显降低,但是TPL+RO8191组和TPL+NAC组p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3蛋白表达比值则较TPL组升高(P<0.001)。结论TPL通过诱导ROS产生抑制JAK2/STAT3信号通路,同时促使线粒体损伤并破坏DDP作用建立的线粒体-溶酶体交互作用,从而协同DDP诱发HeLa/DR细胞自噬性死亡。

关键词：宫颈癌雷公藤甲素 Janus激酶2/信号转导与转录激活因子3通路顺铂耐药线粒体-溶酶体交互作用

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睾丸CR16与精子发生

中华男科学杂志 2012年第11期18卷 1032-1035页

作者：符小春相文佩华中科技大学同济医学院计划生育研究所湖北武汉430030

精子发生是依靠各种激素(FSH、LH、T、17β雌二醇)、细胞因子和基因调节的复杂调控过程。基因调控在精子发生中的研究已逐渐成为热点,已发现的与精子发生相关的基因,如AYZ、DAZ、YRRM、NOSTRIN等。但目前关于CR16在男性生殖方面的报道... 详细信息

精子发生是依靠各种激素(FSH、LH、T、17β雌二醇)、细胞因子和基因调节的复杂调控过程。基因调控在精子发生中的研究已逐渐成为热点,已发现的与精子发生相关的基因,如AYZ、DAZ、YRRM、NOSTRIN等。但目前关于CR16在男性生殖方面的报道尚不多见,其在精子发生中的作用机制并不十分清楚,本文主要从支持细胞形成血睾屏障角度,对CR16在男性生殖系统精子发生中的研究做一综述。

关键词： CR16 血睾屏障支持细胞男性生殖精子发生

CR16低表达影响小鼠睾丸支持细胞结构和功能的研究

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CR16低表达影响小鼠睾丸支持细胞结构和功能的研究

作者：符小春华中科技大学

学位级别：硕士

目的：采用化学合成的小分子干扰RNA（siRNA）转染小鼠睾丸支持细胞株TM4细胞，观察CR16mRNA和蛋白表达情况，筛选出CR16-siRNA的有效干扰序列，为后续的实验提供研究基础。方法：在TM4有内源性表达CR16的基础上，针对小鼠CR16mRNA靶... 详细信息

目的：采用化学合成的小分子干扰RNA（siRNA）转染小鼠睾丸支持细胞株TM4细胞，观察CR16mRNA和蛋白表达情况，筛选出CR16-siRNA的有效干扰序列，为后续的实验提供研究基础。方法：在TM4有内源性表达CR16的基础上，针对小鼠CR16mRNA靶序列设计三段不同的CR16干扰序列（si-CR16序列1、2、3），通过荧光标记的siRNA（cy3-CR16-siRNA）确定最佳转染浓度后，在脂质体Lipofectamine2000介导下分别用三段si-CR16序列转染TM4细胞，设立空白对照组（未转染）、试剂对照组（加Lipofectamine2000）和阴性对照组（转染阴性siRNA序列，N-controlsiRNA）。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western-Blot技术分别检测转染后48h各组细胞CR16mRNA和72h蛋白的表达情况，确定si-RNA的最优干扰序列。结果： TM4细胞内源性表达CR16。Cy3-siRNA转染TM4细胞后，20nM组可见微弱的红色荧光，随着转染浓度的增加，表达红色荧光的TM4细胞增多，以50nM和100nM最为明显，根据实验有效性和节约性原则，选定50nM作为CR16-siRNA的有效转染浓度。三种si-CR16序列转染TM4细胞48h后，CR16mRNA相对表达量均较空白对照组显著下降（P0.05）。结论：成功筛选出针对CR16mRNA靶序列的有效干扰序列si-RNA3，荧光转染筛选出最优转染浓度50nM，且RNA干扰后CR16蛋白和mRNA表达均降低。目的研究CR16和N-WASP在空白组、试剂组、阴性对照组和干扰组TM4细胞中的定位及定量表达，进一步探讨二者的相关性及在支持细胞功能中的作用。方法采用免疫细胞化学法、免疫荧光双标、WB（western blot）和逆转录-聚合酶链反应（reverse transcript polymerase chain reaction，RT-PCR）检测CR16蛋白和N-WASP蛋白共表达情况，检测CR16mRNA、N-WASPmRNA和Arp2/3mRNA在TM4细胞中的表达情况。结果荧光双标结果显示CR16和N-WASP二者共表达于睾丸支持细胞中，主要表达在支持细胞胞浆、胞膜及细胞间连接处。RNA干扰后CR16的表达明显弱于空白组，随着时间延长，这种干扰作用更明显。RNA干扰后CR16mRNA表达72h(0.2468±0.034)和48h(0.0986±0.026)的细胞组弱于24h(0.2856±0.032)组，72h和24h间差异无统计学意义（P>0.05），24h与48h和72h比较有显著性差异（P<0.01）。干扰组各个时段三种mRNA表达与空白组比较均有显著性差异（P<0.01）。同一种mRNA在干扰后不同时段比较，CR16mRNA48h和72h差异有统计学意义（P<0.05），48h干扰组CR16mRNA的表达(0.0986±0.026)显著弱于空白组、且对应的N-WASPmRNA表达(0.1896±0.028)、Arp2/3mRNA的表达(0.2088±0.035)也显著弱于空白对照组（1.000±0.001）（P<0.01）。Arp2/3mRNA48h(0.2088±0.035)和72h(0.2357±0.042)差异有统计学意义（P<0.05），24h(0.3248±0.029)分别与48h和72h有显著性差异（P<0.01）。Western Blot结果与三种mRNA表达变化基本一致，也呈现良好的时效关系，转染后48h蛋白和mRNA表达均达到最佳抑制水平。免疫荧光双标显示CR16与N-WASP以复合物形式共表达于小鼠睾丸支持细胞。结论RNA干扰组CR16表达水平显著降低，对应的N-WASP和Arp2/3表达与CR16相一致。免疫细胞化学结果表明CR16蛋白在RNA干扰后48h低表达，推测可能与支持细胞活动被抑制有关，其蛋白表达水平同mRNA水平相一致。免疫荧光双标结果进一步证实CR16与N-WASP以CR16/N-WASP复合物形式表达于睾丸支持细胞中。目的研究CR16RNA干扰后支持细胞形态和功能的变化，初步探讨CR16与精子发生的相关性。方法采用HE染色、R250细胞骨架染色和透射电镜（TEM）方法，观察各组支持细胞大体结构和细胞骨架的改变，免疫荧光观察微管蛋白的表达变化。结果空白组、试剂组、阴性序列组和干扰组HE染色形态无明显变化，镜下可见支持细胞形态完整。但R250细胞骨架染色发现与空白组相比，试剂组、阴性序列组和干扰组细胞骨架发生变化，细

关键词： CR1616(糖皮质激素区域表达基因16) RNA干扰 TM4细胞 siRNA CR16 N-WASP 肌动蛋白相关蛋白复合体 Arp2/3 支持细胞细胞间连接男性生殖细胞骨架精子发生自噬微管微丝

子宫内膜癌患者超声血流参数与肿瘤病理分期及预后的相关性

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实用癌症杂志 2022年第2期37卷 334-337页

作者：马少增符小春彭旭河南省驻马店市中心医院 463000

目的探讨子宫内膜癌患者超声血流参数与肿瘤病理分期及预后的相关性。方法选取子宫内膜癌患者100例纳入观察组,另选择同期确诊的子宫内膜增生患者60例纳入对照组。对2组超声基本特征及血流参数搏动指数(PI)、阻力指数(RI)、收缩期峰值流... 详细信息

目的探讨子宫内膜癌患者超声血流参数与肿瘤病理分期及预后的相关性。方法选取子宫内膜癌患者100例纳入观察组,另选择同期确诊的子宫内膜增生患者60例纳入对照组。对2组超声基本特征及血流参数搏动指数(PI)、阻力指数(RI)、收缩期峰值流速(PSV)进行比较;对不同病理分期及不同预后子宫内膜癌患者超声血流参数进行比较,利用Spearman分析病理分期与血流参数的相关性,利用受试者工作特征曲线(ROC)分析超声血流参数对患者预后的预测价值。结果观察组病灶形态规则率、内膜低回声率、均匀增强率相比对照组明显升高(P<0.05);观察组PI、RI相比对照组明显降低,PSV相比明显升高(P<0.05)。随着肿瘤分期逐渐升高,患者PI、RI水平明显降低,PSV水平明显上升(P<0.05);Spearman相关性分析结果表明,子宫内膜癌患者病理分期与PI(γ=-0.482,P<0.01)、RI(γ=-0.442,P<0.01)呈负相关,与PSV呈正相关(γ=0.387,P=0.012)。存活组PI、RI相比死亡组明显升高、PSV明显降低(P<0.05);ROC分析结果表明PI、RI、PSV分别预测子宫内膜患者预后的截点值及AUC值分别为(0.48,0.861)、(0.34,0.819)、(45.26 cm/s, 0.862)。结论子宫内膜癌患者超声血流参数与肿瘤病理分期及预后密切相关,PI、RI、PSV对患者病情及预后预测具有良好的价值。

关键词：子宫内膜癌超声血流参数病理分期

安罗替尼联合TP化疗治疗晚期卵巢癌的疗效观察及对肿瘤干细胞标志物表达的影响

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医药论坛杂志 2023年第24期44卷 34-38页

作者：符小春刘秀玲王茹娜驻马店市中心医院肿瘤妇科河南驻马店463000

目的研究安罗替尼联合TP化疗治疗晚期卵巢癌的疗效观察及对肿瘤干细胞标志物表达的影响。方法纳入驻马店市中心医院2020年9月—2022年9月收治的148例晚期卵巢癌患者,按照随机数字表法将患者分为对照组(n=74)、研究组(n=74)。对照组采用T... 详细信息

目的研究安罗替尼联合TP化疗治疗晚期卵巢癌的疗效观察及对肿瘤干细胞标志物表达的影响。方法纳入驻马店市中心医院2020年9月—2022年9月收治的148例晚期卵巢癌患者,按照随机数字表法将患者分为对照组(n=74)、研究组(n=74)。对照组采用TP化疗方案治疗,研究组在对照组基础上加用安罗替尼治疗。比较两组临床疗效、治疗前后卡氏功能状态量表(KPS)、生活质量核心量表(QLQ-C30)评分、免疫功能指标(CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、NK)、血清肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、糖类抗原199(CA199)、分化抗原簇蛋白133(CD133)、DEAD家族多肽4(DDX4)]水平、血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、凋亡蛋白酶激活因子(Apaf-1)、趋化因子配体18(CCL18)水平、不良反应。结果研究组临床总有效率79.73%(59/74)高于对照组64.86%(48/74)(P0.05)。结论安罗替尼联合TP化疗治疗晚期卵巢癌患者疗效显著,可有效缓解临床症状,减少对机体免疫功能的影响,调节血清肿瘤标志物水平,促进病情恢复,且安全可控。

关键词：安罗替尼 TP化疗方案晚期卵巢癌疗效肿瘤标志物

线粒体融合蛋白2对小鼠受精卵发育影响的研究

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中国妇幼保健 2013年第3期28卷 513-516页

作者：赵娜陈文琦符小春相文佩华中科技大学同济医学院计划生育研究所湖北武汉430030

目的:观察线粒体融合蛋白2(Mitofusin2,Mfn2)对昆明小鼠受精卵发育的影响,探讨其在早期胚胎发育中的重要作用。方法:采用荧光定量PCR对昆明小鼠Mfn2基因反义序列进行沉默有效性的筛选,将所筛选的序列转染入小鼠2细胞受精卵中,观察并统... 详细信息

目的:观察线粒体融合蛋白2(Mitofusin2,Mfn2)对昆明小鼠受精卵发育的影响,探讨其在早期胚胎发育中的重要作用。方法:采用荧光定量PCR对昆明小鼠Mfn2基因反义序列进行沉默有效性的筛选,将所筛选的序列转染入小鼠2细胞受精卵中,观察并统计囊胚形成速率及质量。结果:成功筛选得到有效Mfn2基因反义序列,Mfn2基因沉默后囊胚形成速度减慢,且正常囊胚形成率明显减低。结论:Mfn2基因沉默组中的囊胚形成速率和数量明显降低,提示Mfn2参与小鼠受精卵的发育,推测Mfn2的正常表达对小鼠植入前胚胎发育具有重要作用。

关键词：线粒体融合蛋白2 胚胎囊胚形成率基因沉默线粒体

来曲唑联合坤泰胶囊对排卵障碍性不孕症患者卵巢体积及预后妊娠率的影响

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北方药学 2018年第8期15卷 32-33页

作者：符小春驻马店市中心医院妇科驻马店463000

目的:分析排卵障碍性不孕症采用来曲唑结合坤泰胶囊治疗的临床疗效,探讨适合应用于临床治疗的理想用药方案。方法:随机将入院治疗排卵障碍性不孕症的68例患者(于2015年3月~2017年3月收取)进行分组,采用氯米芬结合坤泰胶囊治疗的为参照组... 详细信息

目的:分析排卵障碍性不孕症采用来曲唑结合坤泰胶囊治疗的临床疗效,探讨适合应用于临床治疗的理想用药方案。方法:随机将入院治疗排卵障碍性不孕症的68例患者(于2015年3月~2017年3月收取)进行分组,采用氯米芬结合坤泰胶囊治疗的为参照组(34例),采用坤泰胶囊与来曲唑联合治疗的为试验组(34例),观察两组临床治疗效果。结果:参照组的睾酮(T)、黄体生成激素(LH)水平明显比试验组高,卵巢体积、卵泡数量、排卵率及妊娠率明显低于试验组,两组间的各项观察数据结果比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:排卵障碍性不孕症采用坤泰胶囊结合来曲唑治疗,不但有助于增加卵泡数量,增强卵巢功能,还能促进排卵,有利于受孕。

关键词：排卵障碍性不孕症坤泰胶囊来曲唑临床疗效

线粒体融合蛋白2在胚胎停止发育者绒毛组织中的表达

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中国妇幼保健 2011年第33期26卷 5231-5234页

作者：庞文娟赵娜符小春温子娜徐晓燕相文佩华中科技大学同济医学院计划生育研究所湖北武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科

目的:测定线粒体融合蛋白2(Mitofusin 2,Mfn2)在正常早孕妇女和不明原因胚胎停止发育患者绒毛组织中的表达差异,探讨Mfn2在胚胎发育过程中的可能作用。方法:采用HE染色观察正常早孕妇女(正常早孕组,30例)和不明原因胚胎停止发育患者(胚... 详细信息

目的:测定线粒体融合蛋白2(Mitofusin 2,Mfn2)在正常早孕妇女和不明原因胚胎停止发育患者绒毛组织中的表达差异,探讨Mfn2在胚胎发育过程中的可能作用。方法:采用HE染色观察正常早孕妇女(正常早孕组,30例)和不明原因胚胎停止发育患者(胚胎停育组,35例)绒毛组织形态;采用免疫组织化学技术(SABC法)检测Mfn2在两组妇女绒毛组织中的定位表达和表达强度;同时采用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)技术检测两组妇女绒毛组织中Mfn2的相对表达。结果:Mfn2在正常早孕组和胚胎停育组绒毛合体滋养细胞和细胞滋养细胞中均有阳性表达,在细胞滋养细胞中表达尤为明显,而在间质细胞中无明显表达,且Mfn2阳性表达主要分布在细胞浆中。胚胎停育组的绒毛组织中Mfn2的相对表达量(0.006 8±0.003 2)显著低于正常早孕组(0.023 9±0.005 5),差异有统计学意义(P<0.01)。结论:Mfn2在不明原因胚胎停止发育患者绒毛组织中的表达水平下降,提示Mfn2可能与胚胎发育相关,绒毛滋养层细胞中Mfn2的正常表达可能对维持早期妊娠起到一定作用。

关键词：线粒体融合蛋白2 胚胎发育绒毛组织滋养层细胞线粒体

腹腔镜与开腹手术治疗良性卵巢肿瘤的效果观察及并发症发生率影响分析

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黑龙江中医药 2020年第1期49卷 39-40页

作者：符小春李智会驻马店市中心医院河南驻马店4630000

目的:探讨腹腔镜与开腹手术治疗良性卵巢肿瘤的效果观察及并发症发生率影响。方法:研究资料共选择2015年1月至2019年8月期间本院收治的良性卵巢肿瘤患者370例,依据手术方式分组,对照组行开腹手术治疗,共50例,观察组行腹腔镜卵巢肿瘤剥... 详细信息

目的:探讨腹腔镜与开腹手术治疗良性卵巢肿瘤的效果观察及并发症发生率影响。方法:研究资料共选择2015年1月至2019年8月期间本院收治的良性卵巢肿瘤患者370例,依据手术方式分组,对照组行开腹手术治疗,共50例,观察组行腹腔镜卵巢肿瘤剥除术治疗,共320例,观察两组手术时间、术后恢复时间及并发症发生情况。结果:观察组手术时间及出血量显著低于对照组,术后疼痛程度明显轻于对照组,且术后恢复、切口愈合及住院时间显著短于对照组,P<0.05;观察组术后并发症中切口感染率0.63%、皮下气肿率0.31%、肠梗阻率0.00%、盆腔粘连率0.31%,与对照组6.00%、4.00%、4.00%、6.00%,P<0.05。结论:针对良性卵巢肿瘤患者可采用腹腔镜卵巢肿瘤剥除术治疗,与开腹手术相比具有术中损害小、术后恢复快及并发症少等优势,而且手术疼痛程度轻,更易于被患者接受,属于可靠的治疗方案。

关键词：腹腔镜卵巢肿瘤剥除术开腹手术良性卵巢肿瘤并发症