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高盐饮食抑制小鼠NK细胞成熟和杀伤功能的研究

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陆军军医大学学报 2022年第9期44卷 882-890页

作者：陶洪云童师雯殷文伟重庆医科大学附属第二医院感染科病毒性肝炎研究所重庆400010

目的探究高盐饮食对小鼠自然杀伤(natural killer,NK)细胞成熟和功能的影响。方法3~4周龄雄性C57BL/6J小鼠(体质量约9 g)分为正常盐饮食(normal-salt diet,NSD)组(给予普通饲料及高压灭菌水喂养)和高盐饮食(high-salt diet,HSD)组(给予... 详细信息

目的探究高盐饮食对小鼠自然杀伤(natural killer,NK)细胞成熟和功能的影响。方法3~4周龄雄性C57BL/6J小鼠(体质量约9 g)分为正常盐饮食(normal-salt diet,NSD)组(给予普通饲料及高压灭菌水喂养)和高盐饮食(high-salt diet,HSD)组(给予含4%NaCl高盐饲料及含1%NaCl高压灭菌水喂养)。采用CD27和CD11b的表达界定NK细胞成熟亚群,CD69标记细胞的早期活化,流式细胞术分析两组小鼠NK细胞亚群分布和活化水平;采用polyI:C体内处理18 h和体外佛波酯/离子霉素刺激4 h,流式细胞术检测两组小鼠NK细胞IFN-γ产生水平;通过YAC-1体内杀伤实验,流式细胞术评估两组小鼠NK细胞的细胞毒作用。结果高盐饮食不影响肝脏﹑脾脏﹑骨髓和外周血NK细胞比例,但抑制肝脏、脾脏NK细胞CD69表达(P<0.01)。高盐饮食组小鼠较正常盐饮食组小鼠肝、脾、骨髓中未成熟的NK细胞(CD27^(+)CD11b^(-))比例增加(P<0.05),而成熟的M1 NK细胞亚群(CD27^(+)CD11b^(+))比例降低(P<0.05),DX5^(+)NK1.1^(+)成熟NK细胞比例也降低(P<0.05),表明高盐饮食抑制NK细胞成熟。高盐饮食组小鼠NK细胞IFN-γ的表达低于正常盐饮食组小鼠(P<0.01),提示高盐饮食抑制NK细胞功能。体内杀伤实验表明,高盐饮食组小鼠腹腔剩余YAC-1细胞百分比和绝对数升高(P<0.01),提示高盐饮食抑制NK细胞的细胞毒作用。结论高盐饮食抑制NK细胞成熟,抑制NK细胞的活化和功能。

关键词：高盐饮食 NK细胞 CD27 CD11b IFN-γ YAC-1细胞

白细胞介素15促进Vδ2 γδT细胞杀伤人白血病K562细胞

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中华微生物学和免疫学杂志 2015年第11期35卷 812-815页

作者：殷文伟张琼芳邵建营童师雯重庆医科大学附属第二医院感染科/重庆医科大学病毒性肝炎研究所 400010 重庆医科大学附属第二医院感染科/重庆医科大学临床营养科 400010

目的研究细胞因子白细胞介素15（IL-15）对 Vδ2γδ（Vδ2）T细胞杀伤人白血病K562细胞的影响。方法分离人外周血单个核细胞，唑来膦酸联合IL-2扩增Vδ2T细胞；体外IL-15刺激，流式检测Vδ2T细胞活化和功能变化。结果唑来膦酸可以大量... 详细信息

目的研究细胞因子白细胞介素15（IL-15）对 Vδ2γδ（Vδ2）T细胞杀伤人白血病K562细胞的影响。方法分离人外周血单个核细胞，唑来膦酸联合IL-2扩增Vδ2T细胞；体外IL-15刺激，流式检测Vδ2T细胞活化和功能变化。结果唑来膦酸可以大量扩增Vδ2T细胞，IL-15能活化Vδ2T细胞，增强Vδ2T细胞脱颗粒能力和分泌IFN-γ功能，并能促进Vδ2T细胞杀伤人白血病细胞K562。结论IL-15刺激可以显著活化Vδ2T细胞，增强杀伤K562细胞功能。

关键词：白细胞介素15 Vδ2 细胞 IFN-γ K562细胞

肝脏持续过表达IL-15对NK/NKT细胞和T细胞数目和活化状态的影响

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第三军医大学学报 2013年第16期35卷 1692-1697页

作者：殷文伟童师雯刘俊英张琼方胡怀东重庆医科大学病毒性肝炎研究所重庆400010

目的研究靶向肝脏过表达细胞因子IL-15对机体免疫系统的影响。方法构建IL-15重组表达质粒pLIVE-IL-15,采用高压注射的方式尾静脉注射C57BL/6小鼠,ELISA检测小鼠血清中IL-15的表达水平,流式检测小鼠脾脏和肝脏淋巴细胞亚群变化。结果成... 详细信息

目的研究靶向肝脏过表达细胞因子IL-15对机体免疫系统的影响。方法构建IL-15重组表达质粒pLIVE-IL-15,采用高压注射的方式尾静脉注射C57BL/6小鼠,ELISA检测小鼠血清中IL-15的表达水平,流式检测小鼠脾脏和肝脏淋巴细胞亚群变化。结果成功构建pLIVE-IL-15质粒,pLIVE-IL-15质粒高压注射小鼠后血清中能检测到IL-15持续表达。与pLIVE-EGFP对照组相比,pLIVE-IL-15质粒注射鼠天然免疫系统NK细胞和NKT细胞以及获得性免疫系统的CD4+T细胞和CD8+T细胞数目均显著增加(P<0.05)。体内过表达IL-15促进NK细胞高表达CD69和IFN-γ,而NKT细胞活化状态改变不明显,IL-15能显著诱导CD8+T细胞高分泌IFN-γ(P<0.05),而对CD4+T细胞IFN-γ分泌影响较小。结论 pLIVE-IL-15靶向肝脏后能在体内持续表达,并且能调节天然免疫系统和获得性免疫系统反应。

关键词： IL-15 免疫系统肝脏高压注射

肠内联合肠外营养治疗肝部分切除术后患者的临床观察

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中国现代药物应用 2013年第14期7卷 61-62页

作者：童师雯重庆医科大学附属第二医院临床营养科 400016

目的探讨肠内联合肠外营养治疗对肝部分切除术后患者的临床疗效。方法选取本院2012年1月至2012年12月间实行肝部分切除术后进行肠内联合肠外营养治疗的20例患者作为观察组,同时选取同期的20例肝部分切除术后使用肠内营养治疗的患者作为... 详细信息

目的探讨肠内联合肠外营养治疗对肝部分切除术后患者的临床疗效。方法选取本院2012年1月至2012年12月间实行肝部分切除术后进行肠内联合肠外营养治疗的20例患者作为观察组,同时选取同期的20例肝部分切除术后使用肠内营养治疗的患者作为对照组,比较患者肛门排气时间、术后1～4d胃肠减压液量、5～7d日均进食量、并发症、腹泻和腹胀变化情况的差异。结果观察组患者肛门排气时间较对照组提前;术后5～7d日均进食量多于对照组;两组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。结论肠内联合肠外营养治疗肝部分切除术后患者,有利于改善患者的营养状况和消化功能。

关键词：肠内联合肠外营养治疗肝功能

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谷氨酰胺代谢与肿瘤

谷氨酰胺代谢与肿瘤

Mov10稳定表达肝癌细胞株的建立及其生物学研究

第五届全国中西医结合营养学术会议

作者：童师雯胡怀东重庆医科大学附属第二医院临床营养科

谷氨酰胺(glutamine,Gln)以往被认为主要功能是在肌肉中储存氮原子并在各器官间运输氮原子的一个非必需氨基酸。它是血浆中是最多的氨基酸,在肌肉蛋白氨基酸中占4%,它在血浆自由氨基酸池中占20%,在肌肉自由氨基酸池中占40%。哺乳动物在... 详细信息

谷氨酰胺(glutamine,Gln)以往被认为主要功能是在肌肉中储存氮原子并在各器官间运输氮原子的一个非必需氨基酸。它是血浆中是最多的氨基酸,在肌肉蛋白氨基酸中占4%,它在血浆自由氨基酸池中占20%,在肌肉自由氨基酸池中占40%。哺乳动物在大多数组织中可以合成谷氨酰胺,但在快速生长和疾病时期,细胞对谷氨酰胺的需求超过供给,谷氨酰胺变成必需的,因而它被定义为条件必需氨基酸。

关键词：肿瘤病理谷氨酰胺生理代谢药物治疗

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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第三军医大学学报 2014年第6期36卷 583-586页

作者：刘敏慧童师雯盛云建殷文伟彭虹任红汤慧重庆医科大学:附属第二医院感染科重庆加400010 泸州医学院附属医院感染科四川泸州646000 病毒性肝炎研究所重庆400010

目的构建稳定表达Mov10蛋白的HepG2细胞株,探讨Mov10在肝癌细胞增殖和侵袭等生物学行为中的作用。方法将含Mov10基因的真核表达载体pCMV-Mov10-GFP质粒,采用脂质体介导法转染至人肝癌细胞系HepG2,经过G418抗性筛选阳性克隆。采用qPCR、W... 详细信息

目的构建稳定表达Mov10蛋白的HepG2细胞株,探讨Mov10在肝癌细胞增殖和侵袭等生物学行为中的作用。方法将含Mov10基因的真核表达载体pCMV-Mov10-GFP质粒,采用脂质体介导法转染至人肝癌细胞系HepG2,经过G418抗性筛选阳性克隆。采用qPCR、Western blot技术检测Mov10的表达,免疫荧光技术观察稳定株Mov10的细胞分布。通过MTS、平板克隆形成试验、体外侵袭能力检测观察稳定细胞株的增殖情况、克隆形成能力和侵袭能力。结果成功构建了表达Mov10蛋白的稳定细胞株HepG2-Mov10。内源性及外源性Mov10蛋白主要分布于细胞质。稳定细胞株HepG2-Mov10较对照组细胞增殖速度快(P<0.05),体外侵袭能力强(P<0.05)。稳定细胞株HepG2-Mov10、HepG2-GFP和细胞株HepG2的克隆形成能力分别为(56.7±17.3)%、(38.3±12.1)%、(31.3±8.1)%,HepG2-Mov10细胞与后两者间差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建稳定表达Mov10的细胞株HepG2-Mov10,发现Mov10能促进肝癌细胞增殖并提高克隆形成能力和侵袭能力。

关键词：癌肝细胞 Mov10 质粒稳定细胞株

Vδ2 γδ T细胞亚群在慢性HCV感染中的特征

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中国免疫学杂志 2016年第9期32卷 1346-1349页

作者：殷文伟张琼方邵建营童师雯教育部感染性疾病分子生物学重点实验室重庆医科大学病毒性肝炎研究所重庆医科大学附属第二医院感染科重庆400010 重庆医科大学附属第二医院临床营养科重庆400010

目的:探讨γδT细胞及其亚群Vδ1和Vδ2 T细胞在慢性HCV感染中的作用。方法:采用流式细胞术检测人外周血γδT细胞及其亚群Vδ1和Vδ2 T细胞比例变化。结果:慢性HCV感染病人外周血中γδT细胞及其亚群Vδ1和Vδ2 T细胞比例与健康对照者... 详细信息

目的:探讨γδT细胞及其亚群Vδ1和Vδ2 T细胞在慢性HCV感染中的作用。方法:采用流式细胞术检测人外周血γδT细胞及其亚群Vδ1和Vδ2 T细胞比例变化。结果:慢性HCV感染病人外周血中γδT细胞及其亚群Vδ1和Vδ2 T细胞比例与健康对照者相比无显著差异。相关性分析显示HCV感染患者Vδ2 T细胞数目与肝脏损伤成正相关而与病毒滴度不相关。慢性HCV感染病人Vδ2 T细胞处于活化状态,CD107a表达高于对照组。结论:Vδ2 T细胞亚群参与慢性HCV感染所致肝损伤。

关键词：丙型肝炎病毒 γδT细胞 Vδ2 T细胞病毒滴度谷丙转氨酶

基于口蹄疫病毒2A片段的多基因共表达质粒的构建及表达

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中国生物制品学杂志 2014年第3期27卷 342-347页

作者：刘丹清廖勇刘敏慧刘俊英盛云建童师雯汤慧任红重庆医科大学附属第二医院感染科重庆400016 重庆医科大学病毒性肝炎研究所重庆400016

目的构建基于口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)2A片段的多基因共表达质粒,并在293T细胞中共表达HBx、人Sox2及人c-Myc基因。方法以FMDV 2A自剪切片段连接HBx、Sox2和c-Myc基因编码序列,克隆至载体pEGFP-C1,构建多基因共... 详细信息

目的构建基于口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)2A片段的多基因共表达质粒,并在293T细胞中共表达HBx、人Sox2及人c-Myc基因。方法以FMDV 2A自剪切片段连接HBx、Sox2和c-Myc基因编码序列,克隆至载体pEGFP-C1,构建多基因共表达质粒pEGFP-XSM;在脂质体LipofectamineTM2000的介导下,将重组质粒pEGFP-XSM转染293T细胞,同时设空载体组(转染空载体pEGFP-C1)和空白对照组(未转染),转染48 h后,荧光显微镜下观察细胞中绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达;Real-time PCR和Western blot法分别检测各组293T细胞中HBx、Sox2和c-Myc基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平。结果多基因共表达质粒pEGFP-XSM经酶切和测序鉴定构建正确;空载体组和pEGFP-XSM转染组细胞荧光镜下均可见GFP的表达;pEGFP-XSM转染组中HBx、Sox2和c-Myc基因mRNA的转录水平较空白对照组及空载体组均明显升高(P﹤0.001);pEGFP-XSM转染组可见相对分子质量约48 000的GFP-HBx-2A融合蛋白条带和约38 000的HA-Sox2-2A融合蛋白条带,各组均可见相对分子质量约49 000的c-Myc蛋白条带,pEGFP-XSM转染组c-Myc蛋白的表达水平明显高于空白对照组及空载体组(P﹤0.01)。结论成功构建了多基因共表达质粒pEGFP-XSM,并在293T细胞中实现了HBx、Sox2和c-Myc蛋白的共表达,为进一步深入研究该共表达蛋白在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生发展中的生物学机制奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒2A片段多基因共表达

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抗FLT3受体单克隆抗体的制备与鉴定

西部医学 2009年第1期21卷 3-5,8页

作者：童师雯宣景秀章崇杰魏大鹏四川大学华西医学中心基础医学与法医学院免疫教研室四川成都610041

目的制备抗FLT3受体的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以PET146-FLT3-His-tag表达蛋白作为免疫原免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗FLT3受体的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用EL... 详细信息

目的制备抗FLT3受体的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以PET146-FLT3-His-tag表达蛋白作为免疫原免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗FLT3受体的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用ELISA、Western blot、免疫组化对此抗体特性进行鉴定。结果筛选到两株能稳定分泌抗FLT3受体单克隆抗体的细胞株5F3B11B1和D3H2C12,亚类鉴定两种单抗为IgG1,ELISA法测定两株细胞腹水抗体效价分别为1∶409600和1∶102400,抗体相对亲和力为7.85×106L/mol。Western blot显示抗体能特异识别免疫原。细胞免疫组化显示此单抗可以特异的识别急性髓系白血病病人骨髓中原始细胞表达的FLT3受体。结论成功制备抗FLT3受体单克隆抗体,为进一步研究其与白血病等血液疾病的关系奠定了基础。

关键词： FLT3受体单克隆抗体白血病