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整合子介导鲍曼不动杆菌多重耐药分子机制

整合子介导鲍曼不动杆菌多重耐药分子机制

作者：童卫杭中国人民解放军军医进修学院

学位级别：硕士

【研究背景】鲍曼不动杆菌已成为引起严重致死性院内感染重要病原菌,常表现为对多种抗菌药物耐药即多重耐药,易引起医院获得性肺炎、菌血症、泌尿系统感染、脑膜炎、软组织感染以及腹腔内感染等严重感染。特别是近年国内外报道耐碳青霉... 详细信息

【研究背景】鲍曼不动杆菌已成为引起严重致死性院内感染重要病原菌,常表现为对多种抗菌药物耐药即多重耐药,易引起医院获得性肺炎、菌血症、泌尿系统感染、脑膜炎、软组织感染以及腹腔内感染等严重感染。特别是近年国内外报道耐碳青霉烯类多重耐药鲍曼不动杆菌,在重症监护病房、血液病房引起爆发流行,病死率高。鲍曼不动杆菌感染治疗越来越困难,临床治疗面临着严峻的挑战。因此加强对其耐药性监测,研究其耐药分子机制,对于控制和治疗鲍曼不动杆菌引起的医院内感染具有重要的现实意义。【目的】筛选临床分离鲍曼不动杆菌中多重耐药菌株,测定其耐药表型;测定多重耐药菌株产β-内酰胺酶的表型和基因型;对临床分离鲍曼不动杆菌中含整合酶分布状况进行研究,用PCR方法测定鲍曼不动杆菌中整合酶基因及类型;测定整合子可变区耐药基因,分析整合子结构,探讨整合子阳性菌株中耐药基因对鲍曼不动杆菌耐药表型的影响。【方法】(1)利用常规纸片扩散药敏试验从北京地区医院临床分离的82株鲍曼不动杆菌中筛选出多重耐药的菌株(至少对两种及两种以上抗菌药物耐药),采用琼脂二倍稀释法检测24种抗菌药物对82株鲍曼不动杆菌的耐药表型。(2)采用改良三维试验,PCR扩增及DNA测序等方法测定耐药菌株的AmpC酶和ESBLs、碳青霉烯酶的表型及基因型。用RAPD分型方法分析耐药鲍曼不动杆菌的基因同源性,分析产酶情况不同的菌株在耐药表型方面的差异。初步探讨耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌多重耐药机制。(3)设计3类整合酶基因特异性引物(IntI1,2,3)进行PCR扩增反应和DNA测序,测定82株鲍曼不动杆菌中整合酶基因及类型,分析整合子阳性菌株在耐药表型方面的差异。(4)以整合酶阳性的菌株为研究对象,用PCR扩增和DNA测序方法测定整合子可变区基因盒,通过PCR扩增测序产物结果直接在GeneBank上进行序列比对分析,了解内插耐药基因情况,分析整合子结构。【结果】(1)82株不动杆菌经常规生化反应和Vitek系统进一步核查鉴定,确定为鲍曼不动杆菌。6种抗菌药物纸片药敏试验结果显示,有68株细菌为

关键词：整合子鲍曼不动杆菌多重耐药碳青霉烯酶耐药基因盒随机扩增多态性DNA

液相色谱-串联质谱法测定人血浆中氯法拉滨的浓度

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中国临床药理学杂志 2022年第7期38卷 711-715页

作者：张茜童卫杭吕亚丽陈慧雷宁李广润李鹏飞首都医科大学附属北京朝阳医院西院药事办北京100000 首都医科大学附属北京朝阳医院药事部北京100000 中国人民解放军火箭军特色医学中心药学部北京100088

目的建立一种测定人血浆中氯法拉滨浓度的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测方法,并用于氯法拉滨的药代动力学研究.方法血浆样品经乙腈沉淀蛋白,以替米沙坦为内标.色谱柱:Aglient TC-C18柱(150.0 mm×4.6 mm,5μm),流动相:甲醇-1 mmol·L^... 详细信息

目的建立一种测定人血浆中氯法拉滨浓度的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)检测方法,并用于氯法拉滨的药代动力学研究.方法血浆样品经乙腈沉淀蛋白,以替米沙坦为内标.色谱柱:Aglient TC-C18柱(150.0 mm×4.6 mm,5μm),流动相:甲醇-1 mmol·L^(-1)乙酸铵溶液,梯度洗脱,流速:1.0 mL·min^(-1);柱温:35℃,进样10μL.离子喷雾离子化源,正离子模式,多重反应监测模式.考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、精密度与回收率、稳定性、基质效应和稀释效应.结果氯法拉滨和内标的保留时间分别为3.71和3.80 min.血浆样本中氯法拉滨在2.00~1000.00 ng·mL^(-1)内线性关系良好,标准曲线为y=3.85×10^(-3)x+1.95×10^(-3)(r=0.9949).氯法拉滨的提取回收率在80.76%以上,其日内、日间RSD在1.00%~5.69%,稳定性、基质效应和稀释效应均符合生物样本分析的相关要求.结论本方法简便、灵敏、快速、准确,适用于氯法拉滨的血药浓度测定及药代动力学研究.

关键词：氯法拉滨药代动力学液相色谱串联质谱

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盐酸吉西他滨致手足综合征1例

中国医院药学杂志 2013年第9期33卷 755-756页

作者：陈慧童卫杭刘丽宏北京朝阳医院药事部北京100120 中国人民解放军第二炮兵总医院药学部北京100088

1临床资料患者,男,81岁,因＂腰背部疼痛6个月,恶心、呕吐5个月,加重3天＂于2010年2月22日入院。入院诊断胰腺癌、肝转移瘤。既往无药物过敏史,多次在我院住院。入院时查体：T 36.2℃,P 78次/min,BP 80/160mmHg。血常规检查示白细胞7.47... 详细信息

1临床资料患者,男,81岁,因＂腰背部疼痛6个月,恶心、呕吐5个月,加重3天＂于2010年2月22日入院。入院诊断胰腺癌、肝转移瘤。既往无药物过敏史,多次在我院住院。入院时查体：T 36.2℃,P 78次/min,BP 80/160mmHg。血常规检查示白细胞7.47×109/L,血小板132×109/L。给予禁食。

关键词：吉西他滨手足综合征骨髓抑制不良反应

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药学安全信息的来源与利用

中国医院药学杂志 2004年第1期24卷 50-51页

作者：童卫杭辛艳茹杨京燕第二炮兵总医院北京100088

目的 :从医院药学领域介绍如何利用现代计算机网络技术收集、评价药学安全信息及如何利用药学信息指导临床制定合理的治疗方案。方法 :通过收集文献及药学网站信息。结果 :药学信息内容十分广泛 ,在药学领域的不同部门药学信息所收集的... 详细信息

目的 :从医院药学领域介绍如何利用现代计算机网络技术收集、评价药学安全信息及如何利用药学信息指导临床制定合理的治疗方案。方法 :通过收集文献及药学网站信息。结果 :药学信息内容十分广泛 ,在药学领域的不同部门药学信息所收集的内容、作用方式以及评价利用有很大不同 ,就医院药学领域应能更好地利用现代计算机网络技术收集、评价药学安全信息使病人得到安全、有效、经济合理的治疗。结论 :医院药学信息的网络化可以提高合理用药水平 ,降低药源性疾病 ,避免医疗纠纷的发生。

关键词：药学信息安全评价利用

测定人血浆中利奈唑胺浓度的HPLC-MS/MS法建立

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国际药学研究杂志 2016年第4期43卷 740-743页

作者：郭明星彭珑吴诚童卫杭中国人民解放军火箭军总医院药学部北京100088

目的建立高效液相色谱串联质谱法（HPLC-MS/MS）测定人血浆中利奈唑胺的血药浓度,为临床合理用药提供参考。方法以替米沙坦为内标,血浆样品经乙腈沉淀蛋白进行提取分离,以含0.1%甲酸的1 mmol/L乙酸铵溶液和乙腈为流动相,梯度洗脱,采用m/... 详细信息

目的建立高效液相色谱串联质谱法（HPLC-MS/MS）测定人血浆中利奈唑胺的血药浓度,为临床合理用药提供参考。方法以替米沙坦为内标,血浆样品经乙腈沉淀蛋白进行提取分离,以含0.1%甲酸的1 mmol/L乙酸铵溶液和乙腈为流动相,梯度洗脱,采用m/z 338.1→m/z 296.3（利奈唑胺）和m/z 515.3→m/z 276.3（替米沙坦,内标）离子对进行扫描。结果利奈唑胺在0.23~46μg/ml线性范围内关系良好,r=0.9993,最低定量限为46 ng/ml,提取回收率为87%~109%,日内、日间精密度的相对标准偏差均在2.5%~8.6%范围内。结论建立的LC-MS/MS方法专属性强,灵敏度高,操作简单,适于临床利奈唑胺血药浓度监测。

关键词：利奈唑胺高效液相色谱串联质谱法血浆

兔感染性模型组织液中左氧氟沙星浓度HPLC测定

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中国抗生素杂志 2005年第12期30卷 759-761页

作者：童卫杭柴栋崔俊昌陈锟王睿中国人民解放军总医院临床药理研究室

目的建立兔组织感染性模型组织液中左氧氟沙星药物浓度的高效液相色谱分析方法。方法以加替沙星为内标,室温下兔组织液样品15%高氯酸沉淀蛋白后,离心后取上清液进样测定。色谱柱为ZORBAXSB-C18(150mm×4.6mm,5μm)。流动相为0.05mol/L... 详细信息

目的建立兔组织感染性模型组织液中左氧氟沙星药物浓度的高效液相色谱分析方法。方法以加替沙星为内标,室温下兔组织液样品15%高氯酸沉淀蛋白后,离心后取上清液进样测定。色谱柱为ZORBAXSB-C18(150mm×4.6mm,5μm)。流动相为0.05mol/L磷酸二氢钾∶乙腈∶三乙胺(82∶18∶0.3,V/V/V),pH4.5,流速1ml/min,荧光检测激发波长298nm,发射波长458nm。结果线性范围0.025～3.0μg/ml(r=0.9999)。低、中、高浓度的绝对回收率均大于76%,相对回收率在97%～104%,日内、日间RSD分别小于2%和4%。最低检测浓度为0.025μg/ml,最低检测限为2ng/ml,S/N>3。本方法准确可靠,操作简便,适用于体内生物样品测定。

关键词：左氧氟沙星高效液相色谱法兔感染性模型

LC-MS/MS法同时测定人血浆中氨苄西林氯唑西林浓度

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药物分析杂志 2009年第4期29卷 613-616页

作者：丁春雷刘丽宏童卫杭李鹏飞马萍第二炮兵总医院药剂科北京100088

目的:建立高效液相色谱-串联质谱联用法同时测定人血浆中氨苄西林氯唑西林浓度。方法:选用Shim-pack VP-ODS色谱柱(5μm,150mm×4.6mm),以甲醇-10mmol·L-1醋酸铵为流动相,样品用甲醇进行沉淀蛋白后进样,选用3200 QTRAP型串联质谱多反... 详细信息

目的:建立高效液相色谱-串联质谱联用法同时测定人血浆中氨苄西林氯唑西林浓度。方法:选用Shim-pack VP-ODS色谱柱(5μm,150mm×4.6mm),以甲醇-10mmol·L-1醋酸铵为流动相,样品用甲醇进行沉淀蛋白后进样,选用3200 QTRAP型串联质谱多反应监测(MRM)扫描方式进行检测。结果:氨苄西林、氯唑西林的线性范围分别在0.1～30μg·mL-1和0.05～15μg·mL-1,准确度与精密度结果显示方法日间、日内变异均小于15%,方法提取回收率大于90%,稳定性较好。结论:本研究所建立的方法快速、灵敏,专属性强,重现性高,可用于氨苄西林氯唑西林人体药代动力学试验。

关键词：高效液相色谱-串联质谱氨苄西林氯唑西林

HPLC-MS/MS法同时检测大鼠微透析液中哌拉西林/三唑巴坦的浓度

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中国抗生素杂志 2015年第1期40卷 36-40页

作者：胡霜霜刘春生吴诚童卫杭张睢扬周丁华王丹吕进第二炮兵总医院北京100088

目的建立高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS／MS）法同时检测大鼠微透析液中哌拉西林／三唑巴坦的药物浓度。方法利用微透析技术对大鼠肝脏局部给药，并进行采样。微透析样品通过HPLC-MS／MS检测，采用Agilent TC-C18柱，（150mm×4．6mm... 详细信息

目的建立高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS／MS）法同时检测大鼠微透析液中哌拉西林／三唑巴坦的药物浓度。方法利用微透析技术对大鼠肝脏局部给药，并进行采样。微透析样品通过HPLC-MS／MS检测，采用Agilent TC-C18柱，（150mm×4．6mm，5μm），流动相为乙腈-0．5％甲酸，等度洗脱，以负离子扫描多反应监测（MRM）扫描方式进行检测，检测离子对哌拉西林m／z 516.2→233．0，三唑巴坦m／z299．0→138．0，内标替米沙坦m／z513．2→287．0。结果哌拉西林／三唑巴坦的线性范围均为0．0625-43．75μg／mL；日间和日内精密度相对偏差均小于15％；准确度和稳定性均符合生物样品的测定要求。结论本方法灵敏度高，操作简便快捷，适用于微透析样品中哌拉西林／三唑巴坦的浓度测定。

关键词：高效液相色谱-串联质谱哌拉西林三唑巴坦微透析技术

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天然药物防治放射性肺损伤的研究进展

中华放射医学与防护杂志 2014年第8期34卷 631-633页

作者：雷宁吕亚丽许本善邵帅曲功霖童卫杭马萍第二炮兵总医院药学部北京100088 首都医科大学附属北京朝阳医院药事部中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所

胸部肿瘤放射治疗、骨髓移植前的预处理及核辐射过后的机体中,肺组织由于受到一定剂量照射通常会引发不同程度的放射性肺损伤（RILI）[1],包括早期的急性放射性肺炎与后期的放射性肺纤维化.作为胸部肿瘤放射治疗的常见并发症,放射性肺... 详细信息

胸部肿瘤放射治疗、骨髓移植前的预处理及核辐射过后的机体中,肺组织由于受到一定剂量照射通常会引发不同程度的放射性肺损伤（RILI）[1],包括早期的急性放射性肺炎与后期的放射性肺纤维化.作为胸部肿瘤放射治疗的常见并发症,放射性肺损伤严重影响患者的生活质量,同时也是制约肿瘤靶区剂量和肿瘤局部控制率的主要因素之一[1-2].目前,对放射性肺损伤临床上尚缺乏有效的防治措施.国际上主要采用激素、抗氧化剂、细胞因子等治疗放射性肺炎[3-4],虽然取得了一定效果,但由于存在明显的不良反应,不宜长期使用或作为预防性用药.天然药物在临床放射性肺损伤防治领域具有重要的研究与开发价值.

关键词：放射性肺损伤药物防治天然药物急性放射性肺炎放射性肺纤维化胸部肿瘤放射治疗靶区剂量