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Galectin-1 RNAi载体构建及其稳定转染LST-R1细胞系的建立

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解放军医学杂志 2009年第3期34卷 307-310页

作者：童华生张亚历姜泊苏磊广州军区广州总医院ICU 广州510010 南方医科大学南方医院消化病研究所

目的构建galectin-1基因特异小分子干扰RNA(siRNAs)真核干扰载体,并获得干扰载体稳定转染的LST-R1细胞系。方法设计2对galectin-1 mRNA(GenBank:NM002305)特异性siRNAs,两端分别带有BamHⅠ/HindⅢ酶切位点和一个9nt的发夹结构,通过基因... 详细信息

目的构建galectin-1基因特异小分子干扰RNA(siRNAs)真核干扰载体,并获得干扰载体稳定转染的LST-R1细胞系。方法设计2对galectin-1 mRNA(GenBank:NM002305)特异性siRNAs,两端分别带有BamHⅠ/HindⅢ酶切位点和一个9nt的发夹结构,通过基因克隆技术将其插入真核表达质粒pSUPER-puro中,构建galectin-1 siRNA表达载体,以EcoRⅠ和HindⅢ双酶切及测序验证重组载体的正确性。将重组载体与pcDNA6/TR共转染LST-R1细胞,以嘌呤霉素(0.8μg/ml)进行阳性克隆筛选。四环素(4μg/ml)诱导48h后,RT-PCR检测galectin-1 mRNA表达水平,Western blotting和细胞免疫化学方法检测galectin-1蛋白质水平的变化。结果测序表明galectin-1 siRNA真核表达载体p-shRNA1和p-shRNA2干扰序列与读码框相符。p-shNRA1和p-shRNA2与pcDNA6/TR共转染LST-R1细胞,获得稳定的重组质粒转染细胞p-shRNA1-LST和p-shRNA2-LST。RT-PCR显示,galectin-1 mR-NA在LST-R1细胞、p-shRNA1-LST细胞、p-shRNA2-LST细胞以及p-LST细胞中的表达量分别为0.616、0.298、0.373和0.641,以p-shRNA1-LST的干扰效果最好。Western blotting结果显示,在LST-R1、p-shRNA1-LST、p-shRNA2-LST和p-LST细胞中galectin-1的表达量分别为1.00、0.07、0.38和0.97,以p-shRNA1-LST干扰效果最好,与免疫细胞化学的结果一致。结论成功构建了galectin-1真核干扰载体,RNAi载体转染LST-R1细胞系的建立为进一步研究galectin-1在大肠侧向扩散型肿瘤中的作用奠定了实验基础。

关键词：结直肠肿瘤半乳糖结合蛋白 RNA干扰细胞系,转化

Galectin-1表达对LoVo细胞凋亡的影响

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中国普通外科杂志 2009年第4期18卷 362-366页

作者：童华生张亚历姜泊苏磊广州军区广州总医院ICU科广东广州510010 南方医科大学南方医院消化内科广东广州510515

目的观察galectin-1对LoVo细胞生长的影响。方法构建galectin-1真核表达载体转染LoVo细胞,观察LoVo细胞生长情况。用免疫细胞化学方法检测转染后细胞galectin-1蛋白表达水平,免疫印迹检测转染后细胞Bcl-2表达的变化。结果成功构建了gale... 详细信息

目的观察galectin-1对LoVo细胞生长的影响。方法构建galectin-1真核表达载体转染LoVo细胞,观察LoVo细胞生长情况。用免疫细胞化学方法检测转染后细胞galectin-1蛋白表达水平,免疫印迹检测转染后细胞Bcl-2表达的变化。结果成功构建了galectin-1真核表达载体pEGFP-C1/GAL1(p-GAL1),并建立了稳定的空载体(LoVo)细胞和真核表达载体转染细胞(p-LoVo细胞和p-GAL1-LoVo细胞)。p-GAL1细胞可表达galectin-1,而另2组细胞则不能。galectin-1表达可降低LoVo细胞Bcl-2的表达,诱导的细胞凋亡增加,3组细胞凋亡率分别为(9.61±0.56)%,(3.56±0.53)%和(3.46±0.46)%(P<0.001)。而细胞生长曲线表明,p-GAL1-LoVo细胞增殖与p-LoVo和LoVo细胞相似。结论galectin-1可促进LoVo细胞凋亡可能与galectin-1可降低LoVo细胞Bcl-2的表达有关。

关键词：结直肠肿瘤 galectin-1 基因重组细胞凋亡

高低转移表型大肠癌细胞株蛋白质表达谱差异初步分析

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世界华人消化杂志 2005年第1期13卷 109-112页

作者：童华生张亚历姜泊赖卓胜马文敏耿焱南方医科大学南方医院医院消化病研究所广东省广州市510515

目的:应用蛋白质组学技术分析高低转移表型大肠癌SW480 细胞株和LoVo细胞株间的蛋白质表达谱差异. 方法:以双向电泳技术分离两种细胞株总蛋白质,银染显色,进行差异蛋白质分析. 结果:SW480和LoVo细胞株双向电泳图谱蛋白质点数分别为1184... 详细信息

目的:应用蛋白质组学技术分析高低转移表型大肠癌SW480 细胞株和LoVo细胞株间的蛋白质表达谱差异. 方法:以双向电泳技术分离两种细胞株总蛋白质,银染显色,进行差异蛋白质分析. 结果:SW480和LoVo细胞株双向电泳图谱蛋白质点数分别为1184±47和1124±54,共获得88±5的蛋白质差异点,其中48±3个点仅在SW480细胞株中表达或表达明显增强, 41±3个点仅在LoVo细胞中表达或表达明显增强. 结论:高低转移表型大肠癌SW480细胞株和LoVo细胞株间的蛋白质表达谱存在一定的差异,对这些差异点进行鉴定将为研究大肠癌转移机制提供一定的线索.

关键词：蛋白质表达谱 SW480 LoVo细胞表型大肠癌细胞株转移差异结论线索

热打击诱导肝细胞释放的外泌体生物学功能及其致肝损伤作用分析

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解放军医学杂志 2020年第3期45卷 277-284页

作者：李悦祝鑫桃张明梁泳欣施学智童华生解放军南部战区总医院重症医学科/解放军热区损伤与组织修复重点实验室广州510010 广州医科大学第六附属医院/清远市人民医院重症医学科广东清远511500

目的探讨中暑诱导肝细胞释放外泌体的生物学功能及其对重症中暑肝损伤的作用。方法将人肝癌细胞系HepG2细胞分为对照组与热打击组,提取上清经超高速离心法分离外泌体。透射电子显微镜(TEM)观察外泌体形态,纳米颗粒追踪分析法(NTA)检测... 详细信息

目的探讨中暑诱导肝细胞释放外泌体的生物学功能及其对重症中暑肝损伤的作用。方法将人肝癌细胞系HepG2细胞分为对照组与热打击组,提取上清经超高速离心法分离外泌体。透射电子显微镜(TEM)观察外泌体形态,纳米颗粒追踪分析法(NTA)检测外泌体直径分布,Western blotting检测外泌体特征性标记物表达。通过等重同位素多标签相对定量蛋白质组学(iTRAQ)方法分析对照组与热打击组肝细胞外泌体中蛋白质的组成差异,采用KEGG通路对差异蛋白质集合进行生物信息学分析。外泌体刺激受体肝细胞实验将受体肝细胞分为对照组、正常刺激组、热打击刺激组(10μg/5 ml,24 h)、热打击组及热打击预处理组,检测各组谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)水平。外泌体体内回输刺激实验将小鼠分为对照组、正常输注组、热打击输注组(40μg/只)、热打击组及热打击预处理组,9 h后处死,检测其血清ALT、AST、LDH水平,以评价肝组织损伤情况。结果肝细胞分泌的微粒在TEM下呈双层膜状包裹的圆形或椭圆形结构,NTA检测显示其直径为90~150 nm,Western blotting检测显示其高表达CD9、CD63和CD81,具有外泌体的特征。热打击组肝细胞释放的外泌体数量明显高于对照组[(8.46±1.38)×10~9/mlvs.(0.66±0.16)×10~9/ml,t=5.605,P=0.005]。iTRAQ分析显示,热打击明显改变了肝细胞外泌体的蛋白质表达谱,KEGG通路分析显示,参与坏死性凋亡途径、PI3K-Akt信号传导途径、抗原加工和呈递途径、凋亡途径及NOD样受体等信号通路的蛋白质富集。外泌体刺激受体肝细胞实验中,热打击刺激组受体肝细胞上清ALT、AST、LDH水平明显升高,热打击预处理组肝细胞上清ALT、AST、LDH水平明显低于热打击组(P<0.05)。外泌体体内回输刺激实验中,热打击输注组小鼠血清ALT、AST、LDH水平明显升高,热打击预处理组肝细胞血清ALT、AST、LDH水平明显低于热打击组(P<0.05)。结论热打击可诱导肝细胞释放外泌体,热打击后外泌体蛋白质谱发生变化,对急性肝损伤具有诱导作用。

关键词：重症中暑热打击肝细胞外泌体肝损伤

脂多糖和热打击联合作用对人肠上皮细胞细胞骨架的影响

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广东医学 2010年第18期31卷 2346-2348页

作者：刘志锋曾平刘亚伟唐柚青童华生苏磊广州军区广州总医院ICU 广州510010 广东省医学科学院广东省老年医学研究所心内科广州510080 南方医科大学省部共建功能蛋白质组学重点实验室广州510515

目的观察脂多糖(LPS)与热打击单独和联合作用对人肠上皮细胞细胞骨架的影响。方法培养人肠上皮细胞株(SW 480),实验分组为:对照组,热打击组(又分为热打击1、3、6 h组),LPS刺激组,热打击和LPS联合刺激组,用骨架蛋白(肌动蛋白F-actin)的... 详细信息

目的观察脂多糖(LPS)与热打击单独和联合作用对人肠上皮细胞细胞骨架的影响。方法培养人肠上皮细胞株(SW 480),实验分组为:对照组,热打击组(又分为热打击1、3、6 h组),LPS刺激组,热打击和LPS联合刺激组,用骨架蛋白(肌动蛋白F-actin)的特异性染料罗丹明标记的F-actin特异性结合物鬼笔环肽(rhodam ine-phalloid in)和细胞核特异性染色剂(DAPI)行免疫荧光,检测在上述刺激作用下细胞形态的改变和F-actin在细胞内分布的变化。结果相比于对照组,热打击1 h就可以使细胞轮廓变圆,细胞伪足变短变粗,细胞间间隙变大。热打击3 h时上述情况更加明显,而热打击6 h时,细胞几乎全部坏死漂浮。单独LPS作用6 h时也能看到多数细胞出现伪足变短变粗,细胞间间隙增大情况,但较单独热打击1 h组程度轻。而热打击和LPS联合作用则可看到二者间存在一定的协同作用。正常对照组细胞的F-actin呈相对均匀分布,但以细胞周边和核的周围居多,而单独LPS作用即可看到细胞骨架发生重组,出现应力纤维,而和热打击联合作用时,细胞周边的F-actin明显减少,出现明显的应力纤维(变粗、变短、紊乱,排列呈明显的非极性单向分布)。结论热打击和LPS单独作用均可使细胞形态发生明显改变,细胞骨架发生重组,细胞间间隙增大,并且二者之间存在一定的协同效应,这为理解重症中暑至多脏器功能衰竭(MODS)发生发展过程中,肠屏障细胞的通透性增加进而引发肠道细菌和内毒素移位的作用机制提供了直观的实验依据。

关键词：脂多糖热打击细胞骨架肠上皮细胞重症中暑

临床护理路径在军事训练致重症中暑患者护理中的应用及效果评价

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中国急救复苏与灾害医学杂志 2017年第9期12卷 884-886页

作者：郭涛童华生广州总医院重症医学科广州510000

目的探讨临床护理路径（CNP）在军事训练致重症中暑患者中的应用效果。方法选择2014年5月-2016年10月广州总医院重症医学科收治的军事训练致重症中暑患者61例，随机分为试验组和对照组，试验组31例，对照组30例。对照组患者给予常规护... 详细信息

目的探讨临床护理路径（CNP）在军事训练致重症中暑患者中的应用效果。方法选择2014年5月-2016年10月广州总医院重症医学科收治的军事训练致重症中暑患者61例，随机分为试验组和对照组，试验组31例，对照组30例。对照组患者给予常规护理，试验组按照临床护理路径进行护理。比较两组入院2h降温效果、住院时间、费用、并发症、护理缺陷及患者满意度。结果试验组入院2h降温效果、住院时间、费用、并发症、护理缺陷及患者满意度与对照组对比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论临床护理路径是一种有效的护理服务模式，能够使军事训练致重症中暑患者体温快速降至目标体温，减少住院时间、费用、并发症及护理缺陷，提高患者满意度，值得推广。

关键词：临床护理路径军事训练重症中暑护理

血浆置换在急性肝功能障碍中的临床应用研究——单一脏器功能障碍与MODS的比较

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中国危重病急救医学 2007年第7期19卷 431-432页

作者：卢勇秦伟毅苏磊童华生钱洪津吴恒义广州军区广州总医院急诊科广东广州510010

非生物型人工肝由血浆置换（PE）、血液吸附（灌流）及血液滤过（HF）3种血液净化方法组成，临床上根据肝功能障碍或衰竭的形式和严重程度不同，选用单一或组合方式进行辅助治疗，疗效较为肯定。我科利用PE治疗危重患者的急性肝功能障... 详细信息

非生物型人工肝由血浆置换（PE）、血液吸附（灌流）及血液滤过（HF）3种血液净化方法组成，临床上根据肝功能障碍或衰竭的形式和严重程度不同，选用单一或组合方式进行辅助治疗，疗效较为肯定。我科利用PE治疗危重患者的急性肝功能障碍，报告如下。

关键词：血浆置换肝功能障碍人工肝支持系统多器官功能障碍综合征

新型凝血和血小板功能分析仪在弥散性血管内凝血早期诊断中的价值

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中国急救医学 2014年第9期34卷 789-793,I0001页

作者：万鹏童华生张兴钦段鹏凯唐柚青苏磊宜昌市第一人民医院三峡大学人民医院重症医学科湖北宜昌443000 广州军区广州总医院重症医学科全军热区创伤救治与组织修复重点实验室广东广州510010

目的：评价凝血和血小板功能分析仪（ Sonoclot ）对重症患者并发弥散性血管内凝血（ DIC）的诊断价值。方法回顾性分析具有DIC潜在危险因素、临床表现或实验室检查疑诊DIC患者，依据国际血栓与止血学会（ ISTH）评分分为显性DIC组237... 详细信息

目的：评价凝血和血小板功能分析仪（ Sonoclot ）对重症患者并发弥散性血管内凝血（ DIC）的诊断价值。方法回顾性分析具有DIC潜在危险因素、临床表现或实验室检查疑诊DIC患者，依据国际血栓与止血学会（ ISTH）评分分为显性DIC组237例，非显性DIC组261例。观察年龄、性别、APACHE Ⅱ评分，并根据不同时间段进行常规凝血指标、血常规、D-二聚体、Sonoclot仪器指标检测。 ROC曲线分析评价Sonoclot 仪器指标的DIC诊断价值。结果两组年龄、性别比较差异无统计学意义，ISTH评分、APACHEⅡ评分比较差异有统计学意义（ P＜0．05）。在Sonoclot仪器各量化指标中，在早期（入院6 h内）激活凝血时间（ ACT ）、ACT联合凝血速率（ CR）在ROC曲线下面积分别为0．891和0．959，差异有统计学意义（P＜0．01），ACT诊断DIC特异度为96．2％，敏感度为76.7％，当ACT联合CR后敏感度上升至93．3％，特异度为86．8％。6～12 h指标检测中，ACT联合CR特异度最高达87．5％。而在后期（12 h后） Sonoclot 分析仪指标的敏感度及特异度则远小于传统的凝血指标。结论 Sonoclot 分析仪对DIC患者发生的凝血功能障碍作出早期的判断，为临床早期诊断DIC的有效选择。

关键词：凝血和血小板功能分析仪弥散性血管内凝血早期诊断

CRRT在重症中暑并发横纹肌溶解综合征患者的应用及护理

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中国急救复苏与灾害医学杂志 2017年第4期12卷 369-371页

作者：郭涛童华生广州总医院重症医学科广东510000

目的总结CRRT在重症中暑并发横纹肌溶解综合征应用及护理要点。方法收集2010年5月-2015年10月广州总医院重症医学科重症中暑伴横纹肌溶解综合征病例共60例，均采用连续。肾脏替代治疗（continuous renal feplacementtherapy，CRRT），... 详细信息

目的总结CRRT在重症中暑并发横纹肌溶解综合征应用及护理要点。方法收集2010年5月-2015年10月广州总医院重症医学科重症中暑伴横纹肌溶解综合征病例共60例，均采用连续。肾脏替代治疗（continuous renal feplacementtherapy，CRRT），通过病情观察，CRRT护理，深静脉导管的护理，出血的预防和监测，安全和心理护理等护理干预。结果通过CRRT治疗后其中4例因MODS死亡，其余均治愈，治愈率93％。结论CRRT在重症中暑并发横纹肌溶解综合征应用效果良好，护理工作在CRRI、中起着至关重要的作用，保证CRRT安全有效进行的前提条件，可有效提高救治成功率，减少并发症。

关键词：重症中暑 CRRT 横纹肌溶解护理