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一株古尼拟青霉提取物清除自由基活性研究

一株古尼拟青霉提取物清除自由基活性研究

作者：章能胜安徽农业大学

学位级别：硕士

古尼拟青霉是一种具有很高药用价值、应用前景广泛的真菌。本研究对古尼拟青霉固体培养菌丝进行了清除自由基活性的研究,发现古尼拟青霉固体培养菌丝具有较强的清除自由基的活性。为了提高自由基清除剂的产量,以该菌株菌丝的自由基清除... 详细信息

古尼拟青霉是一种具有很高药用价值、应用前景广泛的真菌。本研究对古尼拟青霉固体培养菌丝进行了清除自由基活性的研究,发现古尼拟青霉固体培养菌丝具有较强的清除自由基的活性。为了提高自由基清除剂的产量,以该菌株菌丝的自由基清除率为指标,进行了培养条件和活性物质提取工艺的研究。具体内容主要包括：营养性因子和非营养性因子对古尼拟青霉菌丝清除自由基活性的影响研究;活性组分的分离提取工艺和纯化技术路线;活性化合物的纯度鉴定和结构解析。用二苯代苦味肼基自由基法(DPPH-TLC)和酶标仪法(DPPH-Microplate)对菌株RCEF4117固体培养菌丝甲醇提取物的清除自由基活性进行了定性和定量测定,发现其具有较强的清除自由基活性,在浓度为30mg/mL,于37℃下保温10min时,样品对0.2 mg/mL的DPPH自由基的清除率分别可达94.91%。HPLC-MS分析RCEF4117菌丝甲醇提取物成分较复杂,色谱图上有数十个峰,主要含有两个清除自由基活性成分,在HPLC色谱图上对应的保留时间分别为10.8 min和15.8 min,在MS色谱图离子流峰对应的保留时间分别为11.2 min和16.2 min。两个活性组分对应的离子流峰和紫外吸收峰都最强,是提取物中的主要成分,同时其对应的峰与周围峰的分离度很高,易制备出大量纯品。通过正交实验对菌株清除自由基活性的培养条件进行优化,发现菌株RCEF4117产活性成分的最佳培养基组成为：蔗糖20g／L,玉米粉10 g／L,酵母粉5g／L,NaNO33 g/L, MgSO4-7H2O 0.5g/L, NaC10.5 g/L, CaCl21.0 g/L, VB 0.2 g/L。最佳培养工艺为：种龄4天,接种量10%,培养时间8天,培养温度25℃。通过正交实验和响应面实验对菌株清除自由基活性物质提取工艺进行研究,发现菌株RCEF4117提取清除自由基活性物质的最佳工艺为：提取溶剂甲醇,提取温度37℃,提取功率80KHz,提取时间34 min,料液比1：30。在最优的提取条件下,古尼拟青霉固体培养菌丝自由基清除率模拟计算最高值为96.61%,实际测得值为96.58%,预测值与实际值基本一致。采用反相高效液相制备色谱对菌株RCEF4117清除自由基活性组分进行制备,得到活性组分pg-1和pg-2。HPLC法和UV法对pg-1和pg-2纯度进行分析,初步判断pg-1和pg-2为纯品,同时,采用HPLC峰面积归一化法,计算分离到的pg-1和pg-2纯度分别为97.3%和97.1%。对pg-1和pg-2进行高分辨质谱检测,得到它们的真正分子式为C17H15NO6和C16H14O6。用DPPH-Microplate法对pg-1和pg-2进行清除自由基活性确认,pg-1和pg-2的自由基清除率分别为89.62%和75.45%,表明两种活性化合物的制备是成功的,活性没有丢失。

关键词：古尼拟青霉清除自由基培养条件提取工艺分离纯化

古尼拟青霉中抗氧化活性组分的分离纯化和液质联用分析

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食品与发酵工业 2020年第16期46卷 154-158页

作者：章能胜陈晓玲胡丰林安徽卫生健康职业学院医学系安徽池州247099 安徽农业大学微生物防治省重点实验室安徽合肥230036

在虫生真菌代谢物抗氧化活性物质筛选中,发现一种古尼拟青霉菌株RCEF4117固体培养物中存在有较强的抗氧化活性物质。该研究目的是分离纯化这些活性组分,并制备纯品进行结构鉴定。采用二苯代苦味肼基自由基—薄层色谱法(1,1-dipheny1-2-p... 详细信息

在虫生真菌代谢物抗氧化活性物质筛选中,发现一种古尼拟青霉菌株RCEF4117固体培养物中存在有较强的抗氧化活性物质。该研究目的是分离纯化这些活性组分,并制备纯品进行结构鉴定。采用二苯代苦味肼基自由基—薄层色谱法(1,1-dipheny1-2-picrlyhydrazyl-thin layer chromatography,DPPH-TLC)和二苯代苦味肼基自由基—酶标仪法(DPPH-Microplate)对古尼拟青霉固体培养菌丝的甲醇提取物进行抗氧化活性测定。液质联用DPPH法(high performance liquid chromatography-mass spectrometry,HPLC-MS-DPPH)对活性物质进行初步鉴定;用反相高效液相色谱(reversed-phase-HPLC,RP-HPLC)制备分离活性成分。研究发现供试样品的甲醇提取物具有较强的抗氧化活性,进一步分离纯化从中得到2个高纯度的强抗氧化活性成分PG-1(纯度为97.31%,活性为89.62%)和PG-2(纯度为97.12%,活性为75.45%)。HPLC-MS-DPPH分析得PG-1、PG-2的分子式分别为C17H15NO6和C16H14O6。该研究首次从古尼拟青霉中成功分离纯化出2个抗氧化活性组分的纯品。

关键词：古尼拟青霉虫生真菌抗氧化二苯代苦味肼基自由基分离纯化质谱

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一种被毛孢菌丝体提取物的免疫调节活性研究

安徽农业大学学报 2009年第4期36卷 603-606页

作者：胡传久王金彬章能胜胡丰林安徽农业大学微生物防治省重点实验室合肥230036

经多菌株的虫生真菌生物活性筛选,发现一株被毛孢菌株RCEF0851发酵物具有较强的免疫增强作用,进一步采用荧光定量PCR方法研究RCEF0851不同提取物对体外培养小鼠巨噬细胞RAW 264.7的IL-1β、IL-6和TNF-α转录水平的影响。结果表明,乙酸... 详细信息

经多菌株的虫生真菌生物活性筛选,发现一株被毛孢菌株RCEF0851发酵物具有较强的免疫增强作用,进一步采用荧光定量PCR方法研究RCEF0851不同提取物对体外培养小鼠巨噬细胞RAW 264.7的IL-1β、IL-6和TNF-α转录水平的影响。结果表明,乙酸乙酯提取物能显著提高TNF-a转录水平的表达,但对IL-1β和IL-6的转录调节作用不明显;水提物和甲醇提取物能明显提高小鼠巨噬细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α的转录水平,表明它们具有免疫增强作用。

关键词：菌丝提取物巨噬细胞免疫调节被毛孢

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戴氏虫草中具清除自由基活性的物质分析

安徽农业大学学报 2010年第2期37卷 234-237页

作者：王金彬章能胜王小董胡丰林安徽农业大学微生物防治省重点实验室合肥230036

用二苯基苦基苯肼自由基法,首次对戴氏虫草(Cordyceps taii)的不同溶剂提取物进行了清除自由基活性定量分析,发现其乙酸乙酯提取物具有较强的清除自由基活性,当提取物浓度为2.5 ***-1时,其子实体和虫体乙酸乙酯提取物的自由基清除率分... 详细信息

用二苯基苦基苯肼自由基法,首次对戴氏虫草(Cordyceps taii)的不同溶剂提取物进行了清除自由基活性定量分析,发现其乙酸乙酯提取物具有较强的清除自由基活性,当提取物浓度为2.5 ***-1时,其子实体和虫体乙酸乙酯提取物的自由基清除率分别达到了83.29%±0.48%和14.77%±1.73%,远高于甲醇和石油醚提取物的自由基清除率。比较子实体和虫体提取物的清除自由基活性和薄层色谱,发现戴氏虫草中的自由基清除剂主要存在于子实体中。通过高分辨液质联用和活性联合分析,发现提取物中活性物质的可能分子式为C26H22O13。经天然产物数据库查询,发现没有与之相匹配的已知化合物,因此该活性成分可能为一新化合物。

关键词：戴氏虫草清除自由基活性测定液质联用二苯基苦基苯肼自由基(DPPH)

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病原生物与免疫学课程思政示范课程建设研究

中国教育技术装备 2023年第16期 53-57页

作者：章能胜安徽卫生健康职业学院安徽池州247099

病原生物与免疫学课程思政示范课程建设以《高等学校课程思政建设指导纲要》中的医学类专业课程思政建设要点为指导,深入挖掘课程中思政元素,着力培养学生的爱国情怀、科学素养、辩证思维、职业素养和奉献精神,引导青年学生坚定“四个... 详细信息

病原生物与免疫学课程思政示范课程建设以《高等学校课程思政建设指导纲要》中的医学类专业课程思政建设要点为指导,深入挖掘课程中思政元素,着力培养学生的爱国情怀、科学素养、辩证思维、职业素养和奉献精神,引导青年学生坚定“四个自信”,发挥课程思政的协同育人效应,取得了较好的效果。

关键词：病原生物与免疫学课程思政思政元素

高速逆流色谱法从蝙蝠蛾拟青霉中快速分离制备麦角甾醇纯品

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色谱 2010年第1期28卷 68-72页

作者：章能胜王金彬汪小艳王小董胡丰林安徽农业大学安徽省微生物防治重点实验室安徽合肥230036

建立了用高速逆流色谱从蝙蝠蛾拟青霉中高效、快速分离制备高纯度麦角甾醇的方法。将蝙蝠蛾拟青霉的乙酸乙酯提取物直接进行高速逆流色谱分离,考察了不同溶剂系统的分离效果。结果表明,最佳的溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(体积比... 详细信息

建立了用高速逆流色谱从蝙蝠蛾拟青霉中高效、快速分离制备高纯度麦角甾醇的方法。将蝙蝠蛾拟青霉的乙酸乙酯提取物直接进行高速逆流色谱分离,考察了不同溶剂系统的分离效果。结果表明,最佳的溶剂系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水(体积比为6∶1.7∶6∶0.3),以上相为固定相,下相为流动相,转速为850r/min,流速为2mL/min,检测波长为280nm。制备所得的麦角甾醇经紫外光谱(UV)和高分辨质谱(HRMS)鉴定及与标准品对照定性;纯度经高效液相色谱(HPLC)分析为99.2%(峰面积归一化法)。该方法制备麦角甾醇简便、快速,所得产物的纯度高,适合于麦角甾醇对照品的制备。

关键词：高速逆流色谱制备麦角甾醇蝙蝠蛾拟青霉

六株虫生真菌菌丝体提取物清除自由基活性的研究

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齐齐哈尔医学院学报 2016年第5期37卷 561-563页

作者：章能胜陈晓玲安徽人口职业学院池州247000

目的研究六株虫生真菌固体培养菌丝体的提取物进行了清除自由基活性。方法用二苯基苦基苯肼自由基(DPPH)薄层色谱法和酶标仪法,对六株虫生真菌固体培养菌丝体的提取物进行了清除自由基活性的定性和定量测定。结果发现固体培养的菌丝体... 详细信息

目的研究六株虫生真菌固体培养菌丝体的提取物进行了清除自由基活性。方法用二苯基苦基苯肼自由基(DPPH)薄层色谱法和酶标仪法,对六株虫生真菌固体培养菌丝体的提取物进行了清除自由基活性的定性和定量测定。结果发现固体培养的菌丝体清除自由基活性明显大于液体培养菌丝体;不同菌株的菌丝体提取物的自由基清除活性差异很大,在菌丝浓度为10 mg·m L-1,于37℃下保温10min时,其自由基清除活性最高为78.62%,最低为27.63%;自由基清除活性均与提取时间和样品浓度成正相关关系。结论二苯基苦基苯肼自由基薄层实验和不同溶剂提取实验结果表明,不同虫生真菌菌丝体提取物清除DPPH自由基的有效成分也各不相同。

关键词：虫生真菌菌丝体二苯基苦基苯肼自由基自由基清除率

翻转课堂在高职病原生物与免疫学教学中的应用——以《Ⅰ型超敏反应》教学为例

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现代职业教育 2018年第18期 122-123页

作者：章能胜陈晓玲安徽卫生健康职业学院

病原生物与免疫学课程内容多、概念抽象复杂,学生反映难理解、难学。以《Ⅰ型超敏反应》教学为例,从内容选取、学情分析、教学目标、教学方法、教学过程、考核方法、教学反思等方面,探究翻转课堂在高职病原生物与免疫学教学中的应用,取... 详细信息

病原生物与免疫学课程内容多、概念抽象复杂,学生反映难理解、难学。以《Ⅰ型超敏反应》教学为例,从内容选取、学情分析、教学目标、教学方法、教学过程、考核方法、教学反思等方面,探究翻转课堂在高职病原生物与免疫学教学中的应用,取得了较好的教学效果。

关键词：病原生物与免疫学高职翻转课堂

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农村留守儿童生殖健康教育干预效果分析

齐齐哈尔医学院学报 2017年第19期38卷 2304-2306页

作者：章能胜陈晓玲安徽卫生健康职业学院 247000

目的探索生殖健康咨询师定期到校开展青春期生殖健康教育的模式,对农村留守儿童生殖健康相关知识、态度、行为的影响。方法选取470名留守儿童作为本次研究干预对象,采用生殖健康咨询师定期到校开展青春期生殖健康教育的方法,主要通过讲... 详细信息

目的探索生殖健康咨询师定期到校开展青春期生殖健康教育的模式,对农村留守儿童生殖健康相关知识、态度、行为的影响。方法选取470名留守儿童作为本次研究干预对象,采用生殖健康咨询师定期到校开展青春期生殖健康教育的方法,主要通过讲座、话题讨论等形式,讲解青春期生殖健康相关知识、态度、行为等内容。干预活动时间为1学期,每月1次,每次2学时。采用问卷调查法,对干预前后留守儿童生殖健康相关知识、态度、行为进行比较分析。结果干预对留守儿童生殖健康知识、态度、行为均有所影响,其中,留守儿童生殖健康相关知识水平较干预前显著提高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论生殖健康咨询师入校开展青春期生殖健康教育的形式值得推广。

关键词：生殖早期干预留守儿童健康咨询师