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一株雷氏普罗维登斯菌的分离鉴定、生物学特性及其基因组学研究

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水生生物学报 2024年

作者：廖鹏飞李论柳晨涛丁钰杰黄秋雅胡祎玮葛楚天徐洁皓章晓栋浙江万里学院生物与环境学院绍兴文理学院生命与环境科学学院

为确定2020年6月浙江杭州一发病黄缘闭壳龟的病原体及病原特征,研究从患病龟肝脏中分离到一株优势菌HZ202006,对该菌进行形态学观察、16S rRNA序列分析、全基因组测序、人工感染实验及药敏试验。结果确认该菌株为雷氏普罗维登斯菌(Provi... 详细信息

为确定2020年6月浙江杭州一发病黄缘闭壳龟的病原体及病原特征,研究从患病龟肝脏中分离到一株优势菌HZ202006,对该菌进行形态学观察、16S rRNA序列分析、全基因组测序、人工感染实验及药敏试验。结果确认该菌株为雷氏普罗维登斯菌(Providencia rettgeri),短杆状,革兰氏阴性菌。全基因组测序显示该菌株完整基因组序列是由一条4.8 Mbp的双链DNA和2个质粒组成。利用耐药基因数据库(CARD)和毒力因子数据库(VFDB)对测序基因进行注释,发现该菌有20个耐药基因和4个毒力因子。药敏试验结果显示, HZ202006只对阿米卡星表现为中度敏感,对青霉素类、头孢类、氨基糖苷类等16种常见的抗生素耐药。研究分离并鉴定了一株使黄缘闭壳龟患病的雷氏普罗维登斯菌,为水产养殖动物防控该菌引起的相关疾病提供参考。

关键词：雷氏普罗维登斯菌分离鉴定药敏实验全基因测序黄缘闭壳龟

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偏肺病毒对副粘病毒细胞融合的新注释

微生物学报 2014年第4期54卷 376-382页

作者：刘晓瑜章晓栋魏永伟绍兴文理学院医学院浙江绍兴312000 绍兴文理学院生命科学学院浙江绍兴312000 宁波大学海洋学院浙江宁波315211

对于副粘病毒科中的大多数病毒而言,细胞融合过程需要病毒的融合蛋白和吸附蛋白共同参与,其中吸附蛋白负责与受体结合,吸附蛋白与融合蛋白的相互作用激活融合蛋白进而激活细胞融合。而偏肺病毒介导的细胞融合则与上述副粘病毒的融合显... 详细信息

对于副粘病毒科中的大多数病毒而言,细胞融合过程需要病毒的融合蛋白和吸附蛋白共同参与,其中吸附蛋白负责与受体结合,吸附蛋白与融合蛋白的相互作用激活融合蛋白进而激活细胞融合。而偏肺病毒介导的细胞融合则与上述副粘病毒的融合显著不同,所有已报道偏肺病毒介导的细胞融合不需要吸附蛋白的参与,其融合蛋白可单独完成与受体结合和融合。并且近年研究发现有些人偏肺病毒毒株介导的融合需要低pH条件,禽偏肺病毒A型具备极强的融合能力,而禽偏肺病毒B型则较弱。原有的副粘病毒细胞融合理论模型均不能解释上述现象,偏肺病毒介导的这种融合机制目前还不清楚,其研究在近几年日趋成为细胞融合机制研究的热点。近年发现的偏肺病毒介导的融合现象打破了人们对副粘病毒融合的固有理解,拓展了人们对副粘病毒介导的细胞融合的认识。本文旨在对偏肺病毒介导的细胞融合的最新成果和进展加以综述和讨论。

关键词：偏肺病毒细胞融合融合蛋白

日本沼虾肌抑素前体肽在枯草芽孢杆菌的表达及其对生长效果的影响

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水生生物学报 2020年第1期44卷 44-49页

作者：章晓栋沈文英任岗绍兴文理学院生命科学学院生物系

为研究日本沼虾肌抑素前体肽(MSTNpp)对生长的作用机理,实验采用枯草芽孢杆菌表达日本沼虾肌抑素前体肽蛋白,按照枯草芽孢杆菌的偏爱密码子,对MSTNpp基因序列进行优化合成BsMSTNpp,构建得到重组表达质粒pGJ105-BsMSTNpp。经枯草芽孢杆... 详细信息

为研究日本沼虾肌抑素前体肽(MSTNpp)对生长的作用机理,实验采用枯草芽孢杆菌表达日本沼虾肌抑素前体肽蛋白,按照枯草芽孢杆菌的偏爱密码子,对MSTNpp基因序列进行优化合成BsMSTNpp,构建得到重组表达质粒pGJ105-BsMSTNpp。经枯草芽孢杆菌转化、发酵及Western blot鉴定,结果显示重组MSTNpp蛋白分子量约为36.0 kD。重组MSTNpp表达量随发酵时间延长逐渐升高,100h表达量相对于24h提高了10倍。为验证表达产物的生物活性,选择平均体重为(1.52±0.11)g,平均体长为(4.55±0.21)cm的健康日本沼虾,随机分为4组,每组3个重复,每个重复200尾,在日本沼虾基础饲料中添加0.5‰和1‰重组枯草芽孢杆菌菌剂(109 CFU/g),作为实验组1和实验组2;投喂日本沼虾基础饲料,作为对照组1,在日本沼虾基础饲料中添加1‰空白枯草芽孢杆菌,作为对照组2;试验周期30d。结果显示,实验组1、实验组2日本沼虾特定生长率显著高于对照组1(P<0.05),和对照组2间不存在显著性差异;实验组1、实验组2的肌酸激酶(Creatine kinase,CK)活性显著高于对照组(P<0.05)。结果表明,重组表达MSTNpp枯草芽孢杆菌能有效提高日本沼虾CK酶活性,推测MSTNpp通过促进肌细胞增殖和分化提高肌肉组织生长,从而进一步影响日本沼虾生长速度。实验结果可以为进一步研究肌抑素前体肽应用于日本沼虾养殖提供技术支撑。

关键词：日本沼虾肌抑素前体肽枯草芽孢杆菌生长率肌酸激酶

养殖水体1株好氧反硝化菌的分离鉴定及脱氮特征研究

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绍兴文理学院学报 2022年第2期42卷 60-65页

作者：曲寅张涵张艳昕章晓栋沈文英绍兴文理学院生命科学学院浙江绍兴312000

从中华鳖高密度养殖水体中筛选出降亚硝酸盐氮的有益菌,分析其最适发酵条件及脱氮特征.通过定性显色反应从高密度养殖水体筛选出1株降亚硝酸盐氮菌.通过16S rDNA序列鉴定为肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae).通过对肺炎克雷伯菌的亚... 详细信息

从中华鳖高密度养殖水体中筛选出降亚硝酸盐氮的有益菌,分析其最适发酵条件及脱氮特征.通过定性显色反应从高密度养殖水体筛选出1株降亚硝酸盐氮菌.通过16S rDNA序列鉴定为肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae).通过对肺炎克雷伯菌的亚硝酸还原酶基因nirS、nirK进行扩增,结果表明该菌为nirS+,nirK-菌.对筛选出的菌进行培养条件优化,结果表明,以亚硝酸盐为氮源,柠檬酸钠为碳源,肺炎克雷伯菌在初始氮浓度为80 mg/L,碳氮比为10,温度为35℃,pH为6~7的条件下,生长状态良好,且能高效利用亚硝酸盐氮.为研究该菌脱氮效果,将菌液添加到亚硝酸盐氮浓度为5 mg/L的养殖污水,菌浓度为105 CFU/mL,第2天及第5天实验组亚硝酸盐氮含量均显著低于对照组(P<0.05),表明筛选获得的肺炎克雷伯菌能有效降低水体亚硝酸盐氮含量.

关键词：好氧反硝化菌肺炎克雷伯菌亚硝酸盐氮最适培养条件脱氮特征

重组甲基转移酶致弱水疱性口炎病毒的致病性与免疫原性

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2011年第4期37卷 355-362页

作者：章晓栋孙静李建荣于涟浙江大学动物科学学院预防兽医研究所浙江杭州310029 俄亥俄州立大学食品科学与技术系美国俄亥俄哥伦布43210

为了研究有效的水疱性口炎病毒疫苗,控制水疱性口炎疾病的蔓延,用甲基化能力致弱的重组水疱性口炎病毒VSV-E1764A,VSV-S1827A,VSV-Y1650A和VSV-F1691A作为疫苗,通过口腔灌服途径将1×106PFU的重组病毒接种5周龄BALB/c小鼠,研究以上重组... 详细信息

为了研究有效的水疱性口炎病毒疫苗,控制水疱性口炎疾病的蔓延,用甲基化能力致弱的重组水疱性口炎病毒VSV-E1764A,VSV-S1827A,VSV-Y1650A和VSV-F1691A作为疫苗,通过口腔灌服途径将1×106PFU的重组病毒接种5周龄BALB/c小鼠,研究以上重组病毒的致病性和免疫原性.结果表明:重组病毒VSV-S1827A,VSV-Y1650A和VSV-F1691A对小鼠的致病性减弱,而VSV-E1764A仍然具有较强的致病性;免疫后的小鼠用野生型水疱性口炎病毒(VSV)进行攻毒,发现VSV-S1827A和VSV-Y1650A能够诱导高水平的中和抗体,从而保护小鼠免于攻击.总之,甲基化酶致弱的水疱性口炎病毒VSV-S1827A和VSV-Y1650A不仅对动物的致病性减弱,而且表现出良好的免疫原性;因此,甲基化酶致弱的水疱性口炎病毒可能成为有良好开发前景的活疫苗.

关键词：水疱性口炎病毒甲基转移酶病原性免疫原性

稳定表达传染性法氏囊病病毒VP2蛋白突变体细胞系的建立

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2011年第5期37卷 473-478页

作者：孙静魏永伟章晓栋于涟浙江大学动物科学学院浙江省动物预防医学重点实验室浙江杭州310058

根据传染性法氏囊病病毒(IBDV)HZ2株VP2基因序列设计1对引物,将该基因成功克隆到真核表达载体pDsRed2-N1中,构建重组质粒pDsRed2-N1-VP2(简称PVP2);以PVP2作为过渡载体,运用PCR定点突变技术,对第279位点和第284位点的氨基酸残基分别或... 详细信息

根据传染性法氏囊病病毒(IBDV)HZ2株VP2基因序列设计1对引物,将该基因成功克隆到真核表达载体pDsRed2-N1中,构建重组质粒pDsRed2-N1-VP2(简称PVP2);以PVP2作为过渡载体,运用PCR定点突变技术,对第279位点和第284位点的氨基酸残基分别或同时进行突变,共构建P279、P284和PDA 3株突变体;在此基础上构建能稳定表达HZ2株IBDV及其突变体VP2蛋白的Vero细胞系,间接免疫荧光试验检测表明,Vero细胞系中IBDV VP2蛋白已成功表达.这为进一步深入研究IBDV毒力及抗原变异致病机制奠定了基础;此外,利用定点突变技术改造VP2蛋白,建立不同毒力的突变体,在探求高效、廉价的IBDV DNA疫苗上也有广阔的应用前景和重要意义.

关键词：传染性法氏囊病病毒 VP2基因定点突变突变体 Vero细胞系

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新时代青年员工职业信念提升工作的思考

管理观察 2018年第29期 19-20页

作者：章晓栋浙江省能源集团有限公司浙江杭州310007

随着中国经济进入增速换挡、结构调整和新常态,企业发展面临转型升级和创新发展的挑战。逐步成长为企业发展中坚力量的青年员工,其职业信念对公司可持续发展影响深远。如何做好新时代下青年员工职业信念提升工作,将是企业管理层长期探... 详细信息

随着中国经济进入增速换挡、结构调整和新常态,企业发展面临转型升级和创新发展的挑战。逐步成长为企业发展中坚力量的青年员工,其职业信念对公司可持续发展影响深远。如何做好新时代下青年员工职业信念提升工作,将是企业管理层长期探索的问题。本文通过分析新时代青年员工的特征、职业信念缺失原因、职业信念提升措施,对新时代青年员工职业信念提升工作进行了思考。

关键词：新时代青年员工职业信念提升措施

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国企选人用人方式“拔苗”也可“助长”

现代企业 2019年第4期 34-35页

作者：章晓栋浙江省能源集团有限公司

“治天下唯以用人为本”。国有企业选人用人方式是人力资源管理的重要一环,现有选人用人管理理念在人力资源管理中获得较大认可。谈到人力资源管理,不能不谈到企业人才的选、育、用、留机制,“知人善用”、“用人所长”等理念耳熟能详,... 详细信息

“治天下唯以用人为本”。国有企业选人用人方式是人力资源管理的重要一环,现有选人用人管理理念在人力资源管理中获得较大认可。谈到人力资源管理,不能不谈到企业人才的选、育、用、留机制,“知人善用”、“用人所长”等理念耳熟能详,却鲜有人提“拔苗助长”,甚至有管理者将其列入“企业用人十大典型错误观念”。

关键词：用人方式人力资源管理国企国有企业管理理念企业人才知人善用用人所长

IBDV VP2/4/3、ChIL-18共表达载体的构建及在Vero细胞上的表达

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2010年第1期36卷 1-8页

作者：侯贤宏魏永伟章晓栋于涟浙江大学动物科学学院浙江省动物预防医学重点实验室/农业部动物疫病病原学与免疫控制重点实验室浙江杭州310029

为提高传染性法氏囊病病毒(IBDV)多聚蛋白(VP2/4/3)DNA疫苗的免疫效果,应用重叠延伸剪切技术(splicing by overlapping extension)将IBDV VP2/4/3基因与鸡白细胞介素18(ChIL-18)基因分别经3次PCR获得融合基因片段VP2/4/3-ChIL-18和ChIL-18-VP2/4/3,将融合基因片段定向插入真核表达载体pCI中,获得重组质粒pCI-VP2/4/3-ChIL-18和pCI-ChIL-18-VP2/4/3;应用PCR法,在本实验室已成功构建的重组真核表达载体pCI-VP2/4/3和pCI-ChIL-18的基础上,构建VP2/4/3基因和ChIL-18基因的共表达载体co-pCI-VP2/4/3-ChIL-18。在脂质体介导下将上述重组真核表达载体转染Vero细胞,间接免疫荧光证实重组质粒能正常表达目的蛋白,表达的蛋白具有免疫反应性。这为进一步研究ChIL-18的分子免疫佐剂作用及研制高效、价廉的IBDV DNA疫苗提供了实验依据。

关键词： IBDV 基因融合共表达 DNA疫苗间接免疫荧光