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作者：章明徐第三军医大学

学位级别：硕士

背景结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的一种传染性疾病。目前结核病的疫情仍然十分严峻,早期、快速诊断对于结核病的治疗和控制传播都有极其重要的意义。机体抵抗结核杆菌的免疫机制主要包括体液免疫和细... 详细信息

背景结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的一种传染性疾病。目前结核病的疫情仍然十分严峻,早期、快速诊断对于结核病的治疗和控制传播都有极其重要的意义。机体抵抗结核杆菌的免疫机制主要包括体液免疫和细胞免疫,因此结核病的诊断也主要从体液免疫和细胞免疫两个方面入手。体液免疫诊断主要是检测患者体液中结核杆菌抗原、抗体以及免疫过程中产生的各种免疫分子;而细胞免疫诊断则是通过检测细胞免疫功能进行疾病的诊断,它包括T细胞的数量、功能及其产物如细胞因子等的检测。目前结核病的实验室诊断主要有痰涂片抗酸染色法、细菌培养法、结核杆菌PCR扩增法以及γ干扰素释放试验(IGRAs)等。其中痰涂片检查阳性率低;痰培养需时又太长;PCR扩增法技术要求较高;IGRAs可一定程度上弥补上述不足,具有较高的灵敏度和特异性,但仍不能满足临床需要,不能区分结核潜伏期、活动期,对结核病不同病程的诊断也十分困难。由于不同结核感染人群存在不同免疫分子谱,采用高通量检测方法同时检测体液免疫和细胞免疫的多个结核免疫标志物,可有效提升结核诊断阳性率,并有可能通过对结核病不同病程时免疫分子谱的表达研究,了解结核杆菌感染活动期、潜伏感染期的抗原结构、功能及表达情况,发现新的诊断分子标志物。目的本研究旨在通过流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测结核感染后不同病程患者体内细胞免疫中起重要作用的调节性T细胞(Regulatory cell,Treg)和TH17细胞,构建以液态芯片技术(Luminex)为平台的多种结核免疫分子(EGF、FGF-2、Eotaxin、TGF-α、G-CSF、Fit-3L、GM-CSF、Fractalkine、IFN-α2、IFNγ、GRO、IL-10、MCP-3、IL-12P40、MDC、IL-12P70、IL-13、IL-15、sCD40L、IL-17A、IL-1RA、IL-1α、IL-9、IL-1β、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IP-10、MCP-1、MIP-1α、MIP-1β、TNF-α、TNF-β、VEGF)同时检测的高通量检测技术,并分析不同病程结核免疫分子谱表达情况,确定结核病的不同感染阶段特有的生物学标志物,为临床对结核患者的诊断、免疫功能和预后评估提供科学依据。方法1.分别采集结核感染活动期(66例)、潜伏感染期(57例)以及健康对照人群(58例)外周静脉抗凝全血,通过流式细胞术检测不同阶段患者外周血中treg细胞和th17细胞的表达水平,同时通过elisa法检测血浆中细胞因子il-10和il-17的表达情况,分析这两类t淋巴细胞亚群在结核病不同病程中的表达情况及用于区分结核感染不同病程的可能性。并用roc曲线验证各指标用于区分结核活动性感染和潜伏性感染的诊断效益。2.分别采集结核感染活动期(50例)、潜伏感染期(49例)以及健康对照人群(50例)外周静脉抗凝全血,通过液态芯片技术同时检测38种(egf、fgf-2、eotaxin、tgf-α、g-csf、fit-3l、gm-csf、fractalkine、ifn-α2、ifnγ、gro、il-10、mcp-3、il-12p40、mdc、il-12p70、il-13、il-15、scd40l、il-17a、il-1ra、il-1α、il-9、il-1β、il-2、il-3、il-4、il-5、il-6、il-7、il-8、ip-10、mcp-1、mip-1α、mip-1β、tnf-α、tnf-β、vegf)与结核感染相关的免疫标志物,分析结核杆菌感染不同状态下免疫标志物的表达情况,了解结核杆菌感染活动期、潜伏感染期的抗原结构、功能及表达情况,从而提高结核感染诊断的阳性率和发现新的诊断分子标志物。并用roc曲线验证各指标用于区分结核活动性感染和潜伏性感染的诊断效益。结果1.结核活动期组treg细胞和th17细胞的比例明显高于结核潜伏期组和正常对照组(treg细胞:9.61±2.26%vs6.31±1.44%和9.61±2.26%vs4.16±1.01%p0.05)。结核活动期组il-10和il-17的表达量明显高于结核潜伏期组和正常对照组(p<0.05),结核潜伏期组il-10的表达量明显高于正常对照组(p<0.05),但结核潜伏期组il-17

关键词： Treg细胞 Th17细胞流式细胞术液态芯片技术高通量检测结核免疫分子谱

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结核病免疫学标记物研究进展

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重庆医学 2014年第13期43卷 1654-1656页

作者：章明徐邓少丽第三军医大学大坪医院检验科 400042

结核病是由结核杆菌复合群（mycobacterium tuberculosis complex，MTBC）引起的慢性感染性疾病。据世界卫生组织统计，全世界结核病每年新增病例870万左右，其中，110万人合并 HIV感染［1］。目前，主要依靠有效的疫苗、精确的诊断技... 详细信息

结核病是由结核杆菌复合群（mycobacterium tuberculosis complex，MTBC）引起的慢性感染性疾病。据世界卫生组织统计，全世界结核病每年新增病例870万左右，其中，110万人合并 HIV感染［1］。目前，主要依靠有效的疫苗、精确的诊断技术及合理的药物治疗等方法对结核病进行有效的控制。然而，由于机体对结核杆菌（***，MTB）免疫反应的复杂性，致使目前为止对新型结核疫苗的评价、结核感染的诊断和感染后治疗方案的调整等仍没有确切的免疫学评价指标。因此，了解结核杆菌致病机制和宿主免疫反应之间的相互作用，无疑将有助于找到合适的免疫学标记物，以便明确感染各阶段评价指标。本文就结核杆菌感染不同阶段其与宿主的关系及各类免疫学标记物潜在应用价值作一综述，以期针对结核病的不同感染阶段确定特有的免疫学标记物，用以诊断结核病的病程和治疗效果的评价。

关键词：结核免疫学标记免疫机制研究进展

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结核病免疫学标记物研究进展

结核病免疫学标记物研究进展

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第四届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛

作者：章明徐邓少丽第三军医大学大坪医院野战外科研究所检验科

结核病是由结核分枝杆菌复合群（Mycobacterium tuberculosis complex,MTBC）引起的慢性感染性疾病。据世界卫生组织统计,全世界结核病每年新增病例870万左右,其中110万人合并HIV感染。目前主要依靠有效的疫苗、精确的诊断技术以及合理... 详细信息

结核病是由结核分枝杆菌复合群（Mycobacterium tuberculosis complex,MTBC）引起的慢性感染性疾病。据世界卫生组织统计,全世界结核病每年新增病例870万左右,其中110万人合并HIV感染。目前主要依靠有效的疫苗、精确的诊断技术以及合理的药物治疗等方法对结核病进行有效的控制。然而,由于机体对结核分枝杆菌（***,MTB）免疫反应的复杂性,致使目前为止对新型结核疫苗的评价、结核感染的诊断和感染后治疗方案的调整等仍没有确切的免疫学评价指标。因此,了解结核分枝杆菌致病机理和宿主免疫反应之间的相互作用,无疑将有助于找到合适的免疫学标记物,以便明确感染各阶段评价指标。本文就结核杆菌感染不同阶段与宿主关系及各类免疫学标记物潜在应用价值作一综述,以期针对结核病的不同感染阶段确定特有的免疫学标记物,用以诊断结核病的病程和治疗效果的评价。

关键词：结核病免疫反应免疫学标记物评价

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结核病免疫学诊断标志物

结核病免疫学诊断标志物

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第六届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛

作者：章明徐邓少丽第三军医大学大坪医院野战外科研究所检验科

虽然目前对结核病免疫机制的研究取得了重大突破,但到目前为止仍没有确切的免疫学评价标准应用于结核感染的诊断、治疗以及感染后各阶段患者免疫功能评估等。因此,深入了解机体抗结核感染的免疫机制将有助于找到合适的免疫学标志物,从... 详细信息

虽然目前对结核病免疫机制的研究取得了重大突破,但到目前为止仍没有确切的免疫学评价标准应用于结核感染的诊断、治疗以及感染后各阶段患者免疫功能评估等。因此,深入了解机体抗结核感染的免疫机制将有助于找到合适的免疫学标志物,从而有助于建立确切的评价标准。本文就结核病免疫学标志物研究进展及临床应用前景作一综述。

关键词：结核杆菌免疫标志物致病机理评价标准

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不同环境下取精对精液参数的影响

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中华男科学杂志 2019年第7期25卷 670-671页

作者：曹全富胡翠芳章明徐王博刘世玲冯庆兴王婧陆军军医大学第三附属医院生殖医学中心

目前男性因素导致的不育患病率日渐升高,临床上主要以常规精液分析对男性生育能力进行筛查及评估,对男性不育症的评估需要有效、完整的精液样本[1]。根据WHO的标准[2],取精地点应为医院,以保证精液的液化评价和温度波动对精液质量的影... 详细信息

目前男性因素导致的不育患病率日渐升高,临床上主要以常规精液分析对男性生育能力进行筛查及评估,对男性不育症的评估需要有效、完整的精液样本[1]。根据WHO的标准[2],取精地点应为医院,以保证精液的液化评价和温度波动对精液质量的影响不大。但医院单一、嘈杂的环境不利于取精,近年多种资料均显示不同的取精环境可能对精子质量造成不同的影响[3]。

关键词：取精环境精液参数精子浓度前向运动精子百分率液化时间 pH

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第三军医大学学报 2018年第7期40卷 625-630页

作者：廖玲黄恒柳章明徐秦海涛邹佳峻邓少丽陆军军医大学(第三军医大学)第三附属医院(野战外科研究所)检验科重庆400042

目的检测HBV相关性肝癌患者CD19^+CD24^+CD38^+调节性B细胞(Bregs细胞)的分布频率及血清白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)的水平并分析其临床意义。方法收集93例HBV相关性肝癌患者、47例HBV相关性肝硬化患者和57例健康体检者的外周... 详细信息

目的检测HBV相关性肝癌患者CD19^+CD24^+CD38^+调节性B细胞(Bregs细胞)的分布频率及血清白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)的水平并分析其临床意义。方法收集93例HBV相关性肝癌患者、47例HBV相关性肝硬化患者和57例健康体检者的外周血,采用流式细胞术检测CD19^+CD24^+CD38^+Bregs细胞分布频率,化学发光法检测血清IL-10水平,并分析其与疾病分期、肿瘤个数、血管侵犯等临床指标的关系;同时收集20例HBV相关性肝癌患者的癌组织、癌旁组织和远癌组织,采用流式细胞术检测组织中CD19^+CD24^+CD38^+Bregs细胞分布频率,并分析其与肿瘤位置的相关性。结果 HBV相关性肝癌外周血CD19^+CD24^+CD38^+Bregs细胞显著高于肝硬化组和健康对照组,且HBV相关性肝癌晚期(C+D期)患者显著高于早期(0+A期)和中期(B期)患者(P<0.05,P<0.01);HBV相关性肝癌和HBV相关性肝硬化患者血清IL-10水平显著高于健康对照组(P<0.01);HBV相关性肝癌外周血CD19^+CD24^+CD38^+Bregs细胞分布频率和血清IL-10水平与肿瘤个数、是否血管侵犯有密切关系;HBV相关性肝癌患者外周血CD19^+CD24^+CD38^+Bregs细胞分布频率与血清IL-10呈正相关(r=0.46,P<0.01);HBV相关性肝癌患者癌组织和癌旁组织CD19^+CD24^+CD38^+Bregs细胞频率显著高于远癌组织(P<0.01)。结论 CD19^+CD24^+CD38^+Bregs细胞可能通过分泌IL-10在HBV相关性肝癌免疫微环境中发挥调节作用,参与肿瘤的发生、发展。

关键词：调节性B细胞白细胞介素-10 乙肝相关性肝癌

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血清铁蛋白及ADMA在急性冠脉综合症中的临床应用价值

血清铁蛋白及ADMA在急性冠脉综合症中的临床应用价值

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第六届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛

作者：潘锋章明徐李发科陈鸣第三军医大学大坪医院野战外科研究所检验科

目的探讨血清铁蛋白（SF）及非对称二甲基精氨酸（ADMA）浓度与急性冠状动脉综合征（ACS）及其不同亚组之间的相关性,及其对ACS的诊断价值。方法我们对287例急性冠状动脉综合征患者（不稳定型心绞痛（UA）患者182例、非ST段抬高性心肌...

目的探讨血清铁蛋白（SF）及非对称二甲基精氨酸（ADMA）浓度与急性冠状动脉综合征（ACS）及其不同亚组之间的相关性,及其对ACS的诊断价值。方法我们对287例急性冠状动脉综合征患者（不稳定型心绞痛（UA）患者182例、非ST段抬高性心肌梗死（NSTEMI）患者38例、ST段抬高性心肌梗死（STEMI）患者67例）和183例正常对照人员血清中铁蛋白（SF）及非对称二甲基精氨酸（ADMA）浓度通过化学发光和酶联免疫吸附（ELASA）实验进行检测。结果 SF在ACS患者相较于对照组明显升高（P＜0.01）,SF在AMI组浓度水平显著高于UA组中的浓度水平（P=0.0021）,而在NSTEMI及STEMI中无显著差异（P=0.1470）;ADMA在ACS患者中的浓度水平显著高于对照组（P＜0.001）,在AMI组中浓度显著高于UA组（P=0.0158）,而NSTEMI组中ADMA水平也显著高于STEMI组（P=0.0100）;SF与ADMA并联检测诊断ACS其Sen=82.23%,Spe=50.60%,PPV=85.20%,NPV=44.09%。SF与ADMA串联检测诊断ACS其Sen=38.33%,Spe=95.18%,PPV=96.49%,NPV=30.86%。结论 SF和ADMA在ACS患者中明显升高,且与ACS病情严重程度相关,SF和ADMA的联合检测能相对排除其他能引起炎症指标改变的一系列疾病对其诊断性能的不良影响,能相对于单独检测显著提高对ACS的诊断性能。

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低免疫原性脂肪源性干细胞在骨组织工程应用中的探索

低免疫原性脂肪源性干细胞在骨组织工程应用中的探索

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第六届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛

作者：章明徐张可珺曹兴禄邓少丽第三军医大学大坪医院野战外科研究所检验科

目的探索脂肪源性干细胞（Adipose-derived stromal cell,ADSCs）的分离,培养方法,及其经基因修饰后在骨组织工程应用中作为种子细胞的可行性分析。方法取6月龄贵州小香猪腹股沟脂肪组织,分离培养脂肪源性干细胞,构建低免疫原性脂肪源... 详细信息

目的探索脂肪源性干细胞（Adipose-derived stromal cell,ADSCs）的分离,培养方法,及其经基因修饰后在骨组织工程应用中作为种子细胞的可行性分析。方法取6月龄贵州小香猪腹股沟脂肪组织,分离培养脂肪源性干细胞,构建低免疫原性脂肪源性干细胞（ADSCs）,检测其生物安全性,并验证修饰前后异体和异种移植的免疫排斥变化情况。结果从小香猪脂肪组织中培养出来的脂肪源性干细胞,能稳定增殖传代,经US基因修饰后的ADSCs生物安全性检测未引起异体和异种移植的免疫排斥变化。结论从脂肪组织中容易大量获得ADSCs并能稳定增殖传代,经基因修饰后的ADSCs生物安全性检测结果显示有可能成为骨组织工程理想的种子细胞之一。

关键词：低免疫原性脂肪源性干细胞生物安全性

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Treg细胞和Th17细胞及其相关细胞因子在结核病患者外周血中的表达...

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第七届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛

作者：邓少丽章明徐张可瑁罗杰颜保松第三军医大学大坪医院野战外科研究所检验科

目的人体感染结核杆菌后的免疫机制极其复杂,T细胞在抗结核免疫保护中起着关键作用,本研究通过对结核病不同病程患者外周血Treg细胞和Th17细胞及其相关细胞因子的检测,探讨其表达与结核病不同病程的相关性及用于区分结核感染后不同病程...

目的人体感染结核杆菌后的免疫机制极其复杂,T细胞在抗结核免疫保护中起着关键作用,本研究通过对结核病不同病程患者外周血Treg细胞和Th17细胞及其相关细胞因子的检测,探讨其表达与结核病不同病程的相关性及用于区分结核感染后不同病程的临床应用价值。方法我们对123例结核病不同病程患者（活动期组65例、潜伏期组58例）58例正常对照人员外周血Treg细胞和Th17细胞及其相关细胞因子（IL-10/IL-17）通过流式细胞术和ELISA进行检测。结果研究发现活动期组Treg细胞和Th17细胞的比例明显高于在潜伏期组和正常对照组（Treg细胞:9.61±2.26%VS 6.31±1.44%和9.61±2.26%VS 4.16±1.01%P＜0.05;Th17细胞:3.08±0.80%VS 1.31±0.50%和3.08±0.80%VS 1.15±0.46%P＜0.05）,潜伏期组Treg细胞的比例明显高于正常对照组（6.31±1.44%VS 4.16±1.01%P＜0.05）,但潜伏期组Th17细胞的比例和正常对照组相比无明显差异（1.31±0.50%VS 1.15±0.46%P＞0.05）。活动期组IL-10和IL-17的表达明显高于在潜伏期组和正常对照组（P＜0.05）,潜伏期组IL-10的表达明显高于正常对照组（P＜0.05）,但潜伏期组IL-17的表达和正常对照组无明显差异（P＞0.05）。Treg细胞和IL-10用于区分结核潜伏期和活动期的ROC曲线下面积分别为0.890和0.810。结论该研究提示可将Treg细胞及细胞因子IL-10作为结核病患者免疫功能评估的分子标记,有利于区别结核感染后的不同病程,协同Th17细胞可分析结核病患者免疫功能异常的机制,从而提高结核病免疫防治的效果。

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转录因子Blimp1在结核病患者外周血单个核细胞中的表达研究

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重庆医学 2014年第9期43卷 1029-1030,1033页

作者：章明徐陈婉燕谢小红张校康李发科陈鸣邓少丽第三军医大学大坪医院野战外科研究所检验科重庆400042

目的检测转录因子Blimp1在潜伏期、活动期结核病患者及健康者中的表达差异,评估其作为新型结核病诊断因子的可能性。方法选取60例活动期结核病患者(活动期组)、50例潜伏期结核病患者(潜伏期组)和50例健康体检者(对照组)作为研究对象,利... 详细信息

目的检测转录因子Blimp1在潜伏期、活动期结核病患者及健康者中的表达差异,评估其作为新型结核病诊断因子的可能性。方法选取60例活动期结核病患者(活动期组)、50例潜伏期结核病患者(潜伏期组)和50例健康体检者(对照组)作为研究对象,利用荧光定量PCR方法分别测定3组研究对象外周血单个核细胞中Blimp1 mRNA的表达情况。结果活动期组Blimp1 mRNA的表达量是对照组的15.35倍,是潜伏期组的2.21倍,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Blimp1参与抗结核免疫,有助于区分活动性肺结核和健康人群,为结核病的发病机制提供新的实验依据,从而进一步为结核病的早期诊断和治疗提供新的方向。

关键词：转录因子结核 ,肺基因表达

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