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绵羊支原体HSP70的原核表达及抗体间接ELISA检测方法的建立

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动物医学进展 2024年第4期45卷 16-20页

作者：李祥龙章志涛孔令丽罗雨昕秦泽亮王冬英广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 广西水产畜牧业协会广西南宁530022 广西壮族自治区兽用生物制品工程研究中心广西南宁530004

为建立绵羊支原体(Mycoplasma ovis)的血清学检测方法,根据GenBank收录的绵羊支原体HSP70蛋白C端的基因序列(登录号:CP006935.1),构建了重组原核表达质粒。通过原核表达获取重组蛋白,并将纯化的重组蛋白作为包被抗原,建立了绵羊支原体间... 详细信息

为建立绵羊支原体(Mycoplasma ovis)的血清学检测方法,根据GenBank收录的绵羊支原体HSP70蛋白C端的基因序列(登录号:CP006935.1),构建了重组原核表达质粒。通过原核表达获取重组蛋白,并将纯化的重组蛋白作为包被抗原,建立了绵羊支原体间接ELISA抗体检测方法。结果显示,成功构建了绵羊支原体HSP70蛋白的重组原核表达质粒;重组蛋白在大肠埃希氏菌BL21(DE3)感受态细胞中,同时以可溶性蛋白和包涵体蛋白的形式表达;以重组蛋白作为包被抗原建立的绵羊支原体间接ELISA抗体检测法,抗原包被最佳浓度为4μg/mL,血清最佳稀释度为1∶100,酶标二抗最佳稀释度为1∶2000。建立的ELISA方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,为绵羊支原体的检测及试剂盒的开发提供了技术支持。

关键词：绵羊支原体热休克蛋白70 原核表达间接ELISA

基于嗜盐嗜碱硫功能菌的含硫废水处理及耦合产电研究

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基于嗜盐嗜碱硫功能菌的含硫废水处理及耦合产电研究

作者：章志涛河北科技大学

学位级别：硕士

本研究中含硫废水主要指的是含有大量无机硫化物(HS、HS、S)的废水,其来源广泛,因具有毒性大、腐蚀强等特点对环境造成了很大的影响。传统的物理化学处理法存在运行费用高、能耗高、对设备要求高等缺点。为此,本研究利用嗜盐嗜碱微生物... 详细信息

本研究中含硫废水主要指的是含有大量无机硫化物(HS、HS、S)的废水,其来源广泛,因具有毒性大、腐蚀强等特点对环境造成了很大的影响。传统的物理化学处理法存在运行费用高、能耗高、对设备要求高等缺点。为此,本研究利用嗜盐嗜碱微生物耦合生物电化学系统,构建微生物燃料电池和微生物电解池,探讨其处理含硫废水的可行性。通过考察电极材料以及电子中介体对微生物电解池性能的影响,确认最佳操作工况;采用微生物电化学合成的方法,评估硫化物作为电子源驱动硫酸盐还原的性能,提出了一种基于嗜盐嗜碱硫功能菌的含硫废水处理及耦合产电的方法。本文的主要研究内容和成果如下:1)嗜盐嗜碱微生物耦合生物电化学体系构建。构建的微生物燃料电池最大脱硫速率为0.43 m M/d,最大脱硫效率为55.67%,比非生物对照组产生了更高、更稳定以及更持续的电压和电流,其最大的输出电压和电流密度分别为801 m V和57m A/m。在微生物燃料电池的基础上构建微生物电解池,其最大脱硫率达到了80%,最大电流密度比微生物燃料电池高出8倍左右。结果表明,生物电化学系统可以用于脱硫产电,其中微生物电解池的脱硫效果和产电性能更好。2)考察电极材料和电子中介体对微生物电解池反应器性能的影响。研究表明,当阳极电极材料为石墨毡时,反应器具有最大的脱硫速率和硫化物氧化率,分别达到0.525 m M/d和85.45%,硫化物去除率接近100%,最大的电流密度为3201.22m A/m。添加电子中介体中性红可以提高硫化物氧化速率,其最大脱硫速率能达到0.66 m M/d。电化学活性分析表明,石墨毡电极上的生物电活性最高,添加中性红可以使生物电极的可逆性更强。3)阳极硫化物氧化所释放的电子作为外源电子介导阴极硫酸盐还原。结果表明,硫化物可以代替COD作为电子源,处理贫营养的硫酸盐废水。在阳极中,利用嗜盐嗜碱微生物能产生比非生物反应器更高的电流,其最大电流密度达到3753 m A/m。嗜盐嗜碱微生物能良好的附着在电极上并具有较高的电化学活性。16S r RNA基因测序结果表明,在阳极上,Desulfurivibrio AMe S2占主导地位,表明其具有将胞内电子传到胞外的能力;在阴极,Desulfonatronovibrio是主力菌,首次表明其可以接收来自电极的电子进行硫酸盐还原反应,有望成为在工业极端环境中处理硫酸盐废水的候选菌。

关键词：含硫化物废水嗜盐嗜碱体系生物电化学系统硫氧化菌微生物电合成硫酸盐还原菌

大片形吸虫丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A的原核表达及不同时期表达水平分析

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中国畜牧兽医 2023年第3期50卷 1107-1117页

作者：章志涛李祥龙孔令丽罗雨昕王冬英广西大学动物科学技术学院广西壮族自治区兽用生物制品工程研究中心广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室广西高校动物疫病预防与控制重点实验室南宁530004

【目的】克隆大片形吸虫丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A(Ser/Thr protein phosphatases 2A,PP2A)基因并构建原核表达载体,获得原核表达蛋白,为探究PP 2 A基因功能及其在大片形吸虫的发育中的作用奠定基础。【方法】提取大片形吸虫成虫虫体... 详细信息

【目的】克隆大片形吸虫丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A(Ser/Thr protein phosphatases 2A,PP2A)基因并构建原核表达载体,获得原核表达蛋白,为探究PP 2 A基因功能及其在大片形吸虫的发育中的作用奠定基础。【方法】提取大片形吸虫成虫虫体组织总RNA,应用RT-PCR方法扩增PP 2 A基因的完整编码区序列,并以双酶切的方式连接pET-28a(+)载体;经酶切、测序鉴定后获得阳性质粒pET-28a-PP2A,将pET-28a-PP2A重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行IPTG诱导表达,并对重组蛋白的诱导条件进行优化;通过SDS-PAGE及Western blotting检测大片形吸虫PP 2 A基因的表达效果;应用实时荧光定量PCR检测PP 2 A基因在大片形吸虫虫卵、囊蚴、6周龄童虫和成虫阶段中的表达情况。【结果】克隆的大片形吸虫PP 2 A基因编码区序列长1161 bp,编码386个氨基酸,分子式为C_(1980)H_(3105)N_(535)O_(566)S_(24),分子质量为44.23 ku。生物信息学分析结果显示,大片形吸虫PP 2 A基因编码的蛋白为PP2Ac,分子功能为信号转导(GO:0004871),生物学过程为蛋白去磷酸化(GO:0006470),细胞组分为细胞质(GO:0005829)。PP2A蛋白无信号肽,不存在跨膜结构域,为亲水性蛋白,共含有37个磷酸位点。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,大片形吸虫PP2A在30℃、0.8 mmol/L IPTG诱导6 h时表达量最大,表达产物主要以包涵体的形式存在,且Western blotting检测结果显示,重组蛋白可被抗His标签识别;实时荧光定量PCR结果显示,PP 2 A基因在大片形吸虫6周龄童虫阶段表达量最高,极显著高于其他阶段(P0.05)。【结论】本研究成功构建了大片形吸虫PP2A原核表达载体并获得相应蛋白,为研究PP 2 A基因在大片形吸虫生长发育中的功能奠定了基础。

关键词：大片形吸虫丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶2A(PP2A) 原核表达

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梨形虫和伊氏锥虫双重PCR检测方法的建立

黑龙江畜牧兽医 2023年第4期 72-76页

作者：孔令丽李祥龙章志涛罗雨昕王冬英广西大学动物科学技术学院南宁530004 广西壮族自治区兽用生物制品工程研究中心南宁530004

为了建立梨形虫(Piroplasmida)和伊氏锥虫(Trypanosoma evansi)的双重PCR检测方法,试验根据梨形虫的18S rRNA基因和伊氏锥虫的kDNA基因设计两对特异性引物,以吕氏泰勒虫和伊氏锥虫阳性样品DNA为模板进行单重PCR和双重PCR,并对双重PCR的... 详细信息

为了建立梨形虫(Piroplasmida)和伊氏锥虫(Trypanosoma evansi)的双重PCR检测方法,试验根据梨形虫的18S rRNA基因和伊氏锥虫的kDNA基因设计两对特异性引物,以吕氏泰勒虫和伊氏锥虫阳性样品DNA为模板进行单重PCR和双重PCR,并对双重PCR的退火温度进行优化,对本研究建立并优化的双重PCR方法进行特异性试验、敏感性试验及临床样品的检测。结果表明:本研究建立的双重PCR方法能够扩增出350 bp和600 bp的特异性目的条带,而无浆体、肝簇虫、弓形虫和埃立克体样品均呈阴性,梨形虫和伊氏锥虫最低检测浓度分别为54.70 fg/μL和14.30 fg/μL,用本试验建立的方法对临床样品的检测结果与对照方法(巢式PCR)检测结果一致。说明本研究成功建立了灵敏、快速、简便、特异性高的双重PCR检测方法,能够用于梨形虫和伊氏锥虫的临床检测及流行病学调查。

关键词：梨形虫伊氏锥虫 PCR 检测方法应用

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小波阈值去噪在偏滤器光谱信号处理中的应用

量子电子学报 2022年第3期39卷 307-315页

作者：章志涛丁芳罗宇陈夏华叶大为胡振华罗广南中国科学院合肥物质科学研究院等离子体物理研究所安徽合肥230031 中国科学技术大学安徽合肥230026

等离子体发射光谱是研究托卡马克等离子体物理过程的重要诊断手段之一。边界等离子体中存在着复杂的原子分子物理过程,部分较弱的粒子光谱信号混杂着大量噪声,能否有效去除噪声、提高信号质量对后续利用其分析理解实验中相关物理过程具... 详细信息

等离子体发射光谱是研究托卡马克等离子体物理过程的重要诊断手段之一。边界等离子体中存在着复杂的原子分子物理过程,部分较弱的粒子光谱信号混杂着大量噪声,能否有效去除噪声、提高信号质量对后续利用其分析理解实验中相关物理过程具有重要意义。以仿真信号和真实托卡马克实验中钨原子光谱数据作为研究对象,采用信噪比(SNR)和均方根误差(RMSE)作为滤波效果的评价依据,对小波阈值去噪处理方法的去噪效果进行了研究。仿真实验对比分析表明:选取sym8小波基、4层小波分解、启发式阈值计算以及渐进半软阈值函数进行小波去噪时,可获得最大信噪比19.2166,最小均方根误差0.0290。进而将这些最佳匹配参数应用于实测偏滤器钨原子光谱信号处理中,也取得较好的去噪效果。结果表明:小波阈值去噪能够有效地消除偏滤器钨原子光谱信号中的噪声,同时较好地保留有用信号,避免信号失真,显著提高了信号质量。

关键词：光谱学偏滤器钨原子光谱信号小波变换阈值去噪信噪比均方根误差

基于小波变换的Stark展宽算法的优化研究

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核聚变与等离子体物理 2023年第2期43卷 212-218页

作者：章志涛丁芳罗宇陈夏华叶大为张青胡振华罗广南中国科学院等离子体物理研究所合肥230031 中国科学技术大学合肥230026

为了提升Stark展宽计算等离子体电子密度的准确性,基于小波阈值去噪处理方法,对EAST氘原子光谱信号进行了处理,以信噪比(SNR)和均方根误差(RMSE)作为滤波效果的评价依据,通过对比确定了最优小波基db4,最优小波分解4层。根据噪声估计值... 详细信息

为了提升Stark展宽计算等离子体电子密度的准确性,基于小波阈值去噪处理方法,对EAST氘原子光谱信号进行了处理,以信噪比(SNR)和均方根误差(RMSE)作为滤波效果的评价依据,通过对比确定了最优小波基db4,最优小波分解4层。根据噪声估计值计算适合的阈值参数进行信号重构,并将经过去噪处理后的数据应用到后期Stark展宽算法计算等离子体密度的分析过程中。结果表明,小波硬阈值去噪能够有效提高光谱信号信噪比、降低均方根误差,在消除光谱信号中噪声的同时,最大程度保留了有用的光谱细节特征信息,进而有利于光谱数据的建模效果,获得更为准确的等离子体电子密度。

关键词：小波变换 EAST 偏滤器光谱信号 Stark展宽电子密度

运输应激对小鼠肠道的病理损伤及Bcl-2和Bax表达的影响

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中国畜牧杂志 2020年第5期56卷 157-162页

作者：温宇婷刘犇章志涛张雯苑梅婷彭瑞妮宜春学院生命科学与资源环境学院肉牛羊疾病控制实验室江西宜春336000 江西绿科农牧科技有限公司江西宜春336000

为了探究运输应激对小鼠小肠结构和Bcl-2和Bax表达的影响,本研究以16只ICR小鼠为试验对象,将其随机分为对照组(24℃环境下饲养,除了禁食禁水外不做任何处理)和处理组(人工模拟运输应激,处理条件为35℃、160 r/min摇床处理2h),采集十二... 详细信息

为了探究运输应激对小鼠小肠结构和Bcl-2和Bax表达的影响,本研究以16只ICR小鼠为试验对象,将其随机分为对照组(24℃环境下饲养,除了禁食禁水外不做任何处理)和处理组(人工模拟运输应激,处理条件为35℃、160 r/min摇床处理2h),采集十二指肠、空肠和回肠,HE染色观察小肠病理变化,同时采用免疫组织化学和Western Blot探讨运输应激对小鼠肠道Bcl-2和Bax表达的影响。结果表明:与对照组相比,处理组小鼠小肠组织形态结构损害明显,表现为小肠绒毛断裂、小肠黏膜细胞和隐窝细胞脱落以及淋巴细胞浸润;免疫组化定位发现,对照组Bcl-2和Bax表达强度不高,处理组Bcl-2在损伤的肠黏膜上皮细胞中高表达,Bax在肠腺细胞胞质中高表达;与对照组相比,处理组十二指肠和回肠Bcl-2和Bax的表达量增加(P0.05),空肠和回肠Bcl-2/Bax比值升高(P>0.05)。综上,运输应激会破坏肠道结构的完整性,运输后肠道Bcl-2和Bax蛋白的表达发生变化,表明运输应激对肠道的损伤作用与细胞凋亡途径有关,通过Bcl-2和Bax 2种蛋白进行调节。

关键词：运输应激小肠 Bcl-2 Bax 小鼠

运输应激对山羊肝脏和肾脏病理损伤及热休克蛋白表达的影响

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农业生物技术学报 2019年第10期27卷 1769-1781页

作者：郑文亚章志涛梅婷刘犇胡威崔燕甘肃农业大学动物医学院宜春学院生命科学与资源环境学院/肉牛羊疾病控制实验室

随着山羊(Capra hircus)产品需求的增加,山羊异地运输增多,运输应激会引起山羊体重和肉质下降、免疫力降低、引发疾病甚至死亡,运输过程中山羊的管理情况将直接影响盈利水平和动物福利。本研究针对运输应激对山羊肝脏和肾脏显微和超微... 详细信息

随着山羊(Capra hircus)产品需求的增加,山羊异地运输增多,运输应激会引起山羊体重和肉质下降、免疫力降低、引发疾病甚至死亡,运输过程中山羊的管理情况将直接影响盈利水平和动物福利。本研究针对运输应激对山羊肝脏和肾脏显微和超微结构及热休克蛋白(heat shock proteins, HSP)表达的影响进行探讨。实验随机选取了12只健康赣西公山羊随机分为对照组、2 h运输应激组和6 h运输应激组3组,采用苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining, HE)、透射电镜技术、免疫组织化学和蛋白质印迹(Western blot)技术,分析不同运输时间山羊肝脏、肾脏的损伤程度以及HSP27、HSP70和HSP90在其中分布和表达情况。显微与超微观察结果显示运输应激组山羊肝脏、肾脏均发生不同程度的损伤,肝脏中肝细胞出现明显的颗粒和水泡变性,部分细胞胞核染色质聚集,肾脏中肾小管和集合小管结构崩解,肾小球充血肿胀明显,肾小囊腔变窄,并且二者细胞中的线粒体肿大变形、嵴断裂消失,数量减少,甚至部分线粒体因肿胀、空泡化导致膜结构裂解。其中6 h运输应激组更为严重,部分肝细胞出现核溶解现象,管腔和肾小球细胞损伤程度也更加严重。免疫组织化学结果显示,肝脏中3种HSP主要在中央静脉和门管区附近的肝细胞胞质中表达,而肾脏中主要在肾小管和集合小管表达,在运输应激组表达更强。此外,HSP27在运输应激组肝脏中血管内皮、胆小管细胞和肾小体处也出现较强的阳性结果。Western blot分析结果显示在肝脏和肾脏中2和6 h运输应激组间,对比3种热休克蛋白表达量无显著差异(P>0.05),且肝脏中HSP90表达量在运输组与对照组间无明显变化(P>0.05)。在肝脏中2和6 h运输应激组HSP27和HSP70表达量分别极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)高于对照组;在肾脏中2和6 h运输应激组HSP27和HSP90蛋白表达量都极显著(P<0.01)高于对照组,并且肾脏中HSP70表达量在2和6 h运输应激组分别显著(P<0.05)和极显著(P<0.01)高于对照组。总之,运输应激对山羊肝脏、肾脏造成了较严重的病理损伤,并且随着运输时间的延长损伤加剧,3种热休克蛋白在肝脏、肾脏中分布有所不同,山羊肝脏、肾脏的HSP27和HSP70表达量在运输应激后均明显升高,提高了肝肾细胞的抗逆性。本研究为山羊运输应激的解决方案提供了一定的理论依据。

关键词：运输应激山羊肝脏肾脏热休克蛋白(HSP) 显微与超微病理变化

运输应激对山羊小肠黏膜结构及其免疫相关细胞数量的影响

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中国畜牧杂志 2020年第4期56卷 173-177页

作者：高霖刘犇彭瑞妮章志涛张雯苑李国生梅婷邹剑伟宜春学院生命科学与资源环境学院肉牛羊疾病控制实验室江西宜春336000 江西绿科农牧科技有限公司江西宜春336000

为研究运输应激对山羊小肠黏膜结构及免疫状态的影响,试验将18只健康赣西山羊随机平均分成3组,即对照组、2 h运输处理组和6 h运输处理组,采用苏木精-伊红(HE)、甲苯胺蓝-高锰酸钾(MTB)、过碘酸-雪夫氏(PAS)3种染色方法及图像分析法研究... 详细信息

为研究运输应激对山羊小肠黏膜结构及免疫状态的影响,试验将18只健康赣西山羊随机平均分成3组,即对照组、2 h运输处理组和6 h运输处理组,采用苏木精-伊红(HE)、甲苯胺蓝-高锰酸钾(MTB)、过碘酸-雪夫氏(PAS)3种染色方法及图像分析法研究不同处理山羊小肠黏膜结构及免疫相关细胞数量的变化。结果表明:运输处理组山羊小肠绒毛高度/隐窝深度极显著小于对照组;与对照组相比,运输处理组山羊各段小肠绒毛上皮内淋巴细胞、杯状细胞、肥大细胞数量均极显著增加。综上,说明短时间和长时间运输应激均对山羊小肠黏膜结构及免疫状态有明显影响。

关键词：运输应激山羊小肠黏膜结构淋巴细胞杯状细胞肥大细胞