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适用于大豆实时荧光定量PCR分析的内参基因的筛选和验证

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南京农业大学学报 2015年第5期38卷 787-795页

作者：曾文韬柴春月窦道龙南京农业大学植物保护学院江苏南京210095 南阳师范学院生命科学与技术学院河南南阳473061

[目的]选择合适的内参基因是实时荧光定量PCR(qRT-PCR)研究的关键。大豆由于基因组复杂等原因,内参基因的选择尤为重要。[方法]结合实验室先前试验结果及相关文献,选择了10个持家基因(Cons4、ACT11、TUA、Cons15、ACT20、Cons7、CYP2、C... 详细信息

[目的]选择合适的内参基因是实时荧光定量PCR(qRT-PCR)研究的关键。大豆由于基因组复杂等原因,内参基因的选择尤为重要。[方法]结合实验室先前试验结果及相关文献,选择了10个持家基因(Cons4、ACT11、TUA、Cons15、ACT20、Cons7、CYP2、Cons6、Tubulin and ELF1B),依次用3个统计学软件Ge Norm、Norm Finder和Best Keeper进行综合分析,研究其在大豆不同组织和大豆疫霉侵染不同时间点根中的表达稳定性。[结果]Cons4、ACT11和TUA在大豆疫霉侵染过程中的大豆根中表达稳定性最好,而Tubulin和ELF1B在大豆的所有样品中表达稳定性都较差。[结论]Cons4、ACT11、TUA可以推荐为大豆疫霉侵染病程中大豆基因表达qRT-PCR分析的首选内参基因;Cons15、CYP2、Cons4可以推荐为研究苗期大豆不同组织中基因表达qRT-PCR分析的内参基因。

关键词：大豆实时荧光定量PCR 内参基因大豆疫霉诱导表达

转棉花Gbve1基因拟南芥抗黄萎菌的细胞学机制分析

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南京农业大学学报 2014年第2期37卷 53-58页

作者：李红娟刘廷利刘莉张保龙窦道龙南京农业大学植物保护学院/农作物生物灾害综合治理教育部重点实验室江苏南京210095 江苏省农业科学院农业生物技术研究所江苏南京210014

Gbve1是海岛棉中的1个抗棉花黄萎菌基因,前期研究表明它能介导棉花与拟南芥对落叶型与非落叶型黄萎菌的抗性。为了揭示该基因的作用机制,对其细胞定位进行了研究。结果表明:该基因定位在植物细胞膜上;并检测了胼胝质沉积和活性氧积累情... 详细信息

Gbve1是海岛棉中的1个抗棉花黄萎菌基因,前期研究表明它能介导棉花与拟南芥对落叶型与非落叶型黄萎菌的抗性。为了揭示该基因的作用机制,对其细胞定位进行了研究。结果表明:该基因定位在植物细胞膜上;并检测了胼胝质沉积和活性氧积累情况,发现转基因拟南芥在黄萎菌侵染后胼胝质沉积,过氧化氢含量明显高于对照植株。推测:Gbve1是1个膜定位蛋白基因,它能响应黄萎菌的侵染,诱导拟南芥产生抗病性。

关键词：大丽轮枝菌 Gbve1基因拟南芥亚细胞定位抗病机制

基于环介导等温扩增技术检测由强雄腐霉引起的玉米茎腐病

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植物保护学报 2019年第3期46卷 626-633页

作者：赵媛媛沈丹宇于佳徐衡窦道龙南京农业大学植物保护学院

为建立强雄腐霉Pythium arrhenomanes的快速分子检测技术,基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)以β-tubulin基因为靶标序列,设计强雄腐霉的特异性引物,建立了一种准确快速的LAMP检测方法,并对该检测... 详细信息

为建立强雄腐霉Pythium arrhenomanes的快速分子检测技术,基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)以β-tubulin基因为靶标序列,设计强雄腐霉的特异性引物,建立了一种准确快速的LAMP检测方法,并对该检测方法的特异性、灵敏度和实际应用效果进行评估。25 μL LAMP最终反应体系为:10×ThermoPol Buffer 2.5 μL、10 mmol/L dNTPs 3.5 μL、6 mmol/L MgSO4 2 μL、5 mol/L甜菜碱4 μL、40 μmol/L FIP-1/BIP-1各1 μL、5 μmol/L F3-1和B3-1各1 μL、40 μmol/L LB-1 1 μL、Bst DNA polymerase 1 μL、2.5 mmol/L HNB 1.9 μL、模板DNA 2 μL、灭菌水3.1 μL。LAMP体系在等温64℃条件下反应60 min,HNB显色反应显示天蓝色即为阳性反应;扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳验证为梯形条带,也可判定为阳性反应。特异性检测结果显示,LAMP体系能特异性地检测出强雄腐霉,而其它卵菌近缘种和常见植物病原真菌均未检测出。灵敏度检测结果显示,LAMP体系的最低检测灵敏度为10 pg/μL,是普通PCR反应灵敏度的1 000倍。在实际应用中,LAMP体系能够快速检测出人工接种和实际发病玉米组织中的病原菌。表明本研究建立的快速、准确、可视化的LAMP检测方法能在60 min内检测出强雄腐霉。

关键词：强雄腐霉环介导等温扩增快速检测羟基萘酚蓝(HNB)

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杨树溃疡病测报技术的研究

西北林学院学报 1997年第3期12卷 45-51页

作者：赵仕光景耀王颖窦道龙杨陵西北林学院森林资源保护系深圳蛇口动植物检疫局

通过在西北林学院苗圃的北京杨上进行孢子捕捉和病情调查，利用气象因子中的温度（Ｘ１）、湿度（Ｘ２）、降雨量（Ｘ３）、温湿比（Ｘ６）、雨温比（Ｘ７）、雨湿比（Ｘ８）以及树皮相对膨胀度ＲＴ％（Ｘ４）和孢子数（Ｘ５）来分别预... 详细信息

通过在西北林学院苗圃的北京杨上进行孢子捕捉和病情调查，利用气象因子中的温度（Ｘ１）、湿度（Ｘ２）、降雨量（Ｘ３）、温湿比（Ｘ６）、雨温比（Ｘ７）、雨湿比（Ｘ８）以及树皮相对膨胀度ＲＴ％（Ｘ４）和孢子数（Ｘ５）来分别预测４０ｄ后的病情指数（ｙ）以及第四个１０天内新出现病斑数量（ｙ′）和病情指数增长值（ｙ″）。利用ＳＹＳＴＡＴ软件分别做多元线性回归、逐步回归和非线性回归，得到三个模型，经过实际病情验证。

关键词：杨树溃疡病测报技术回归模型

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芥菜生物熏蒸对烟草疫霉菌的抑制作用

中国生态农业学报（中英文） 2023年第4期31卷 567-576页

作者：孙迪贺依琳沈丹宇窦道龙田月娥河南科技大学园艺与植物保护学院洛阳471000 南京农业大学植物保护学院南京210095

为了探究安全和环境友好的烟草黑胫病的绿色防控方式,本研究用‘地隆1号’芥菜采用培养皿培养方法进行生物熏蒸,研究了其对烟草疫霉菌(Phytophthora nicotianae)的抑制作用。采用菌丝生长速率法测定了其对烟草疫霉菌(A2交配型)Pp025菌... 详细信息

为了探究安全和环境友好的烟草黑胫病的绿色防控方式,本研究用‘地隆1号’芥菜采用培养皿培养方法进行生物熏蒸,研究了其对烟草疫霉菌(Phytophthora nicotianae)的抑制作用。采用菌丝生长速率法测定了其对烟草疫霉菌(A2交配型)Pp025菌丝生长的抑制情况,对烟草疫霉菌孢子囊形成及游动孢子释放、孢子萌发及芽管伸长和卵孢子形成的影响,通过电导率和丙二醛含量变化测定了其对烟草疫霉菌细胞膜透性的影响;采用离体叶片法测定了芥菜熏蒸处理后烟草疫霉菌致病力的变化。结果显示:利用‘地隆1号’芥菜进行生物熏蒸可显著抑制烟草疫霉菌的菌丝生长,其半最大效应浓度(EC50)值为0.362 g,75%最大效应浓度(EC75)值为0.499 g,最小抑菌量(MIC)为0.5 g,抑制效果与‘地隆1号’芥菜鲜物质的量呈剂量效应。0.3 g芥菜鲜物质即可显著抑制孢子囊的形成及游动孢子的释放,0.5 g芥菜鲜物质熏蒸处理对Pp025孢子囊形成和游动孢子释放的抑制率分别达72.8%和86.6%;当芥菜鲜物质的量增加为0.7 g时,可完全抑制Pp025孢子囊的形成;0.3 g和0.4 g鲜物质即可分别完全抑制游动孢子萌发及芽管伸长。‘地隆1号’芥菜鲜物质熏蒸处理可减少Pp025卵孢子的形成,且减少幅度与芥菜鲜物质的量呈剂量效应,0.7 g鲜物质熏蒸处理可完全抑制卵孢子的形成。同时,熏蒸处理后增大了菌丝体细胞膜透性并导致膜脂质过氧化,经熏蒸处理150 min后,Pp025的电导率为对照组的2.2倍,丙二醛含量是对照的8.0倍;熏蒸处理减弱了病菌的致病力,与对照相比,病斑减小面积达88.9%。本研究结果表明:‘地隆1号’芥菜鲜物质熏蒸处理对烟草疫霉菌具有很好的抑制和杀灭作用,且熏蒸效果与‘地隆1号’芥菜鲜物质的量呈剂量效应。研究结果对生产上利用‘地隆1号’芥菜防控烟草黑胫病提供了理论依据。

关键词：烟草疫霉菌芥菜生物熏蒸生长发育致病力

本氏烟NbWRKY40亚家族转录因子抗病相关功能研究

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植物病理学报 2016年第6期46卷 791-802页

作者：马丽娜张雄窦道龙柴春月南京农业大学植物保护学院南京210095 南阳师范学院生命科学与技术学院南阳473061

植物WRKY类转录因子的IIa亚类广泛参与调控植物的生物胁迫和非生物胁迫过程。本研究根据拟南芥和普通烟中具有抗病和抗胁迫功能的IIa亚类WRKY40转录因子的序列,利用基因同源克隆法,获得本氏烟中Nb WRKY40基因。序列分析表明在本氏烟中有... 详细信息

植物WRKY类转录因子的IIa亚类广泛参与调控植物的生物胁迫和非生物胁迫过程。本研究根据拟南芥和普通烟中具有抗病和抗胁迫功能的IIa亚类WRKY40转录因子的序列,利用基因同源克隆法,获得本氏烟中Nb WRKY40基因。序列分析表明在本氏烟中有5个属于IIa亚类的基因,其序列之间具有高度相似性。qRT-PCR检测发现Nb WRKY40基因是受寄生疫霉侵染诱导上调表达的基因,通过VIGS技术研究该类基因在本氏烟中的抗病相关功能,用半活体营养型寄生疫霉进行抗病性试验,结果表明Nb WRKY40基因的沉默降低了本氏烟对寄生疫霉的抗性,且在侵染点的细胞坏死程度增强,过氧化氢积累和胼胝质沉积都明显减少。Nb WRKY40基因沉默同样降低了本氏烟对死体营养型灰霉菌的抗性。检测Nb WRKY40基因沉默后4个不同抗病信号通路下游基因的表达,发现基因沉默导致参与抗病和SA途径的PR1b、PR2b基因受疫霉侵染诱导表达的水平明显下降。综上,推测Nb WRKY40基因可能依靠SA介导的信号通路参与调控本氏烟抗病性。

关键词：本氏烟 VIGS 转录因子 NbWRKY40 抗病性

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大豆疫霉菌致害与寄主适应性的分子机制

大豆疫霉菌致害与寄主适应性的分子机制

第五届全国入侵生物学大会——入侵生物与生态安全

作者：窦道龙南京农业大学植物保护学院

大豆疫霉(Phytophthora sojae)是一种危害严重的外来入侵生物,被我国列为对农业生产最危险的A1类检疫对象,其侵染大豆引起的疫霉根腐病(也称大豆疫病或大豆疫霉病,英文名为Phytophthora root rot)是大豆生产上的毁灭性病害。大豆疫霉和...

大豆疫霉(Phytophthora sojae)是一种危害严重的外来入侵生物,被我国列为对农业生产最危险的A1类检疫对象,其侵染大豆引起的疫霉根腐病(也称大豆疫病或大豆疫霉病,英文名为Phytophthora root rot)是大豆生产上的毁灭性病害。大豆疫霉和其它多种病原菌类似,其与寄主的分子互作呈现"此消彼长"的"之"字形共进化模式。在互作过程中,病原菌效应子攻击

关键词：

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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抗原类似物对HIV有作用

生物技术通报 2002年第6期18卷 43-44页

作者：彭昊窦道龙

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棉花高质量总RNA提取的一种有效方法

作物学报 2003年第3期29卷 478-479页

作者：窦道龙王冰山唐益雄王志兴孙敬三中国科学院植物研究所北京100093 中国农业科学院生物技术研究所北京100081

棉花抗病虫基因工程和纤维品质改良一直是国内外研究的热点之一，近年来许多实验室又开展了棉花功能基因组学研究，在这些研究中都需要提取高质量的RNA，但目前广为使用的TriZol reagent kit和异硫氰酸胍-酚-氯仿一步提取法从棉花中难... 详细信息

棉花抗病虫基因工程和纤维品质改良一直是国内外研究的热点之一，近年来许多实验室又开展了棉花功能基因组学研究，在这些研究中都需要提取高质量的RNA，但目前广为使用的TriZol reagent kit和异硫氰酸胍-酚-氯仿一步提取法从棉花中难以纯化出完整的RNA，尽管许多学者针对棉花也发展出了几种有效的方法，但是这些方法一般都费工、费时。本文综合比较这些技术，并对热CTAB法加以改进，提出了一种较为可行的提取高质量棉花总RTA的简便方法。

关键词：棉花总RNA 提取方法纯化