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齐墩果酸通过AMPK介导的信号通路激活自噬改善脂毒性诱导的肝细胞损伤

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浙江临床医学 2020年第2期22卷 155-157,160页

作者：冯璐燕赖尚磊叶萤燕张漪婷窦晓兵李松涛浙江中医药大学生命科学学院 310053 浙江中医药大学生命科学学院第二临床医学院 310053 浙江中医药大学生命科学学院基础医学院 310053 浙江中医药大学分子医学研究所 310053

目的研究中药单体齐墩果酸(OLA)对棕榈酸(PA)诱导的Aml-12小鼠肝细胞脂毒性的保护作用,并揭示其潜在分子机制.方法给予Aml-12小鼠肝细胞不同浓度OLA(10、20、40μmol/L)预处理2h后添加PA干预12h诱导肝细胞脂毒性.通过检测细胞乳酸脱... 详细信息

目的研究中药单体齐墩果酸(OLA)对棕榈酸(PA)诱导的Aml-12小鼠肝细胞脂毒性的保护作用,并揭示其潜在分子机制.方法给予Aml-12小鼠肝细胞不同浓度OLA(10、20、40μmol/L)预处理2h后添加PA干预12h诱导肝细胞脂毒性.通过检测细胞乳酸脱氢酶释放量、Hoechst细胞核染色检测OLA对PA诱导脂毒性的保护作用;通过Western blot及siRNA干扰等技术检测OLA保护脂毒性的潜在分子机制.结果 PA干预以剂量依赖关系诱导肝细胞脂毒性.OLA干预显著改善PA诱导的肝细胞脂毒性(P<0.05),并呈明显的剂量依赖关系.机制研究表明激活自噬可显著抑制PA诱导的脂毒性,而抑制自噬加重PA诱导的脂毒性.OLA显著激活肝细胞自噬,且抑制自噬显著阻断OLA保护脂毒性的作用.此外,OLA显著激活自噬调控上游分子腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的磷酸化水平,采用化学抑制剂或siRNA干扰抑制AMPK可显著抑制OLA对脂毒性的保护作用.结论 OLA通过激活自噬显著改善PA诱导的肝细胞脂毒性,AMPK激活参与OLA对脂毒性的保护作用.OLA具有潜在防治非酒精性脂肪性肝病的作用.

关键词：齐墩果酸脂毒性自噬棕榈酸 AMPK

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10种中药单体改善脂毒性研究

浙江临床医学 2020年第5期22卷 636-638,642页

作者：郑思彤钱倩宇徐甜甜吴相尧窦晓兵柴惠浙江中医药大学生命科学学院 310053

目的通过评价10种中药单体的抗脂毒性活性,筛选获得可以改善脂肪肝的中药。方法体外培养HepG2细胞,用油酸(OA)和棕榈酸(PA)构建脂毒性模型,选取10种中药活性单体对细胞进行药物干预:酶法检测细胞内甘油三酯含量,Bodipy染色法观察胞内的... 详细信息

目的通过评价10种中药单体的抗脂毒性活性,筛选获得可以改善脂肪肝的中药。方法体外培养HepG2细胞,用油酸(OA)和棕榈酸(PA)构建脂毒性模型,选取10种中药活性单体对细胞进行药物干预:酶法检测细胞内甘油三酯含量,Bodipy染色法观察胞内的脂滴;LDH方法检测乳酸脱氢酶释放率,MTT法测定细胞存活率,利用Hochest染色检测细胞死亡情况,综合分析药物干预前后肝细胞脂质蓄积及死亡的情况变化,通过模型筛选出对OA诱导的脂质沉积及对PA诱导的肝细胞损伤具有保护作用的活性单体。结果栀子苷(40μM),升麻素(40μM),黄芪甲苷(100μM)可以降低由OA诱导的脂质沉积,对PA诱导的细胞凋亡具有保护作用,数据均具有统计学意义(P<0.05)。结论为改善脂毒性功能传统中药的开发提供理论基础。

关键词：中药单体脂毒性药物筛选

熊果酸通过AMPK介导的信号通路激活自噬改善油酸诱导的肝细胞脂肪沉积

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浙江中医药大学学报 2019年第10期43卷 1150-1155页

作者：丁秦超冯璐燕应娜宋庆叶萤燕窦晓兵李松涛浙江中医药大学生命科学学院杭州310053 浙江中医药大学分子医学研究所浙江中医药大学第二临床医学院浙江中医药大学基础医学院

[目的]揭示熊果酸改善油酸诱导的肝细胞脂质沉积的作用及其潜在分子机制。[方法]采用油酸诱导HepG2肝细胞建立脂质沉积模型,给予不同浓度熊果酸(10、20、40μmol·L-1)进行干预,采用酶法检测细胞内甘油三酯含量,Bodipy染色法观察胞内的... 详细信息

[目的]揭示熊果酸改善油酸诱导的肝细胞脂质沉积的作用及其潜在分子机制。[方法]采用油酸诱导HepG2肝细胞建立脂质沉积模型,给予不同浓度熊果酸(10、20、40μmol·L-1)进行干预,采用酶法检测细胞内甘油三酯含量,Bodipy染色法观察胞内的脂滴,Western blot检测抗微管相关蛋白1轻链3B(microtubule-associated protein 1 light chain 3B,LC3B)蛋白表达及腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)磷酸化水平。[结果] 0.5mmol·L-1油酸干预肝细胞16h可建立肝脂质沉积体外模型;不同浓度熊果酸干预16h可以显著减轻油酸导致的肝细胞脂质沉积(P<0.05,P<0.01),且保护作用呈剂量依赖关系。自噬激动剂雷帕霉素可显著降低油酸诱导后肝细胞甘油三酯含量,并抑制胞内脂滴的形成(P<0.05);而自噬抑制剂氯喹显著加重油酸诱导的肝脂质沉积(P<0.05)。熊果酸干预可显著上调肝细胞内LC3B的表达(P<0.05,P<0.01),从而激活自噬,而抑制自噬可显著阻断熊果酸对肝脂质沉积的减轻作用。熊果酸还可显著激活自噬调控开关AMPK的磷酸化水平(P<0.05)。[结论]熊果酸通过激活自噬改善油酸诱导的肝细胞脂质沉积,AMPK可能是熊果酸激活自噬的潜在分子靶点。

关键词：熊果酸自噬油酸 AMPK 肝细胞脂质沉积

金花茶通过AMPK/PPAR-α通路减轻NAFLD引起的脂代谢异常机制研究

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浙江中医药大学学报 2019年第10期43卷 1138-1143,1161页

作者：应娜刘禹臣钱倩宇胡林峰蒋福升李松涛窦晓兵浙江中医药大学

[目的]观察金花茶(Camellia chrysantha(Hu) Tuyama)对非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的防治效果,初步研究其作用机制。[方法]将48只C57BL/6小鼠随机分为6组:对照组、NAFLD模型组、金花茶粉末低剂量组、金花茶粉末高剂量组、金花茶水提物低剂量组、金花茶水提物高剂量组,每组各8只。除对照组采用普通饲料喂养外,其他各组采用高脂膳食喂养8周建立NAFLD模型,喂养结束后检测小鼠的体重、脂肪重量、血清生化指标、肝组织中极低密度脂蛋白受体(very low density lipoprotein receptor,VLDLR)、过氧化物酶体增殖物激活受体-α(peroxisome proliferator activated receptor-α,PPAR-α)与磷酸化腺苷酸激活蛋白激酶(phosphorylated-adenosine monophosphate activated protein kinase,p-AMPK)蛋白的表达水平变化。[结果]低剂量金花茶粉末与水提物均可以显著降低NAFLD小鼠血清中甘油三酯(triglyceride,TG)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)水平(P<0.05),其中低剂量金花茶水提物显著降低NAFLD小鼠肝组织中VLDLR表达水平(P<0.05),显著提高p-AMPK与PPAR-α蛋白表达水平(P<0.05)。[结论]金花茶水提物通过下调VLDLR蛋白表达,上调p-AMPK、PPAR-α蛋白表达,减轻NAFLD引起的脂代谢异常,缓解NAFLD小鼠肝脏脂质病变。

关键词：金花茶 NAFLD VLDLR PPAR-α p-AMPK

Let-7诱导自噬在酒精性肝病中的作用研究

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浙江中医药大学学报 2019年第5期43卷 474-480页

作者：钱倩宇潘然常开心田男钱颖杜仲燕李松涛窦晓兵浙江中医药大学杭州310053 浙江大学

[目的]探讨lncRNA/let-7在酒精性肝病(alcohol liver disease, ALD)中的作用机制。[方法]通过喂食饲料含酒精的酒精喂养组(alcohol feeding group, AF),建立基于C57BL/6小鼠的ALD动物模型。制备血液和肝脏组织样品。在ALD小鼠模型和H2O... 详细信息

[目的]探讨lncRNA/let-7在酒精性肝病(alcohol liver disease, ALD)中的作用机制。[方法]通过喂食饲料含酒精的酒精喂养组(alcohol feeding group, AF),建立基于C57BL/6小鼠的ALD动物模型。制备血液和肝脏组织样品。在ALD小鼠模型和H2O2处理的人肝癌细胞(Human hepatocellular carcinoma, HepG2)细胞氧化应激模型中测定6种let-7 miRNA候选物的表达水平。基于Targetscan 6.2和miRanda 3.3a的生物信息学分析用于预测可能与let-7相互作用的下游靶基因和长链非编码RNA (long non-coding RNA, lncRNA)候选物。然后使用qRT-PCR在小鼠肝组织中定量预测的靶miRNA和lncRNA的水平。[结果] 1) AF组肝组织中let-7表达显著低于对照饲料(pair feeding, PF)组(P<0.05),特别是let-7c、let-7d和let-7g表达水平显著降低(P<0.05)。2)与对照组(untreated, UT)相比,H2O2处理的HepG2细胞中let-7表达也下调(P<0.05)。3) AF组中发现自噬相关基因4 (autophagy related gene 4, Atg4)、自噬相关基因1 (autophagy related gene 1, Atg1)、自噬基因Beclin、自噬微管相关蛋白1轻链3B (light chain 3B, LC3B)等多种重要自噬生物标志物的表达水平均下调(P<0.05),与慢性酒精摄入可抑制细胞自噬水平的理论相一致。4)预测了3种调控let-7的潜在lncRNA候选物NONMMUT012132、NONMMUT019851和NONMMUT068425。其中,NONMMUT012132的表达在AF组中上调,而其他两个lncRNA被下调。[结论]本研究表明,由酒精消耗过量引起的肝组织氧化损伤可能导致let-7 miRNAs和细胞自噬活性的下调,lncRNA可能参与let-7活性水平的调节。

关键词：酒精性肝病 Let-7 lncRNA MicroRNA 自噬

学科竞赛的发展及其提升大学生创新能力的效果

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中国高等医学教育 2018年第4期 59-60页

作者：袁小凤黄在委李洪涛黄燕芬窦晓兵朱君华浙江中医药大学浙江杭州310053

浙江省大学生生命科学竞赛经历了9年的发展,其竞赛规模日益壮大,今年已经上升为国赛。生科竞赛特色鲜明,选题开放,重视过程培养,依托竞赛网络平台实时上传相关数据。调查表明,通过参加浙江省生命科学竞赛,大学生得到了系统的科研训练,... 详细信息

浙江省大学生生命科学竞赛经历了9年的发展,其竞赛规模日益壮大,今年已经上升为国赛。生科竞赛特色鲜明,选题开放,重视过程培养,依托竞赛网络平台实时上传相关数据。调查表明,通过参加浙江省生命科学竞赛,大学生得到了系统的科研训练,创新能力明显提高。与没参加的学生相比,参加过竞赛的学生无论学习成绩、评奖评优,还是就业方面,都有明显优势。学科竞赛激发了大学生参与创新活动的积极性和主动性,形成了以赛促学的良好氛围,导致创新创业活动全面开花,大学生创新能力和科研素质大为提高。

关键词：生命科学学科竞赛创新能力实践动手能力综合素质

阿魏酸抑制p38 MAPK保护棕榈酸诱导的肝细胞脂毒性

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中国临床药理学与治疗学 2021年第2期26卷 137-143页

作者：傅爱徐甜甜杨贞韩强窦晓兵李松涛浙江中医药大学基础医学院、公共卫生学院浙江杭州310053 浙江中医药大学生命科学学院浙江杭州310053 浙江中医药大学分子医学研究所浙江杭州310053

目的:研究阿魏酸对棕榈酸诱导的HepG2肝细胞脂毒性的保护作用并初步探究其分子机制。方法:采用棕榈酸诱导HepG2肝细胞建立脂毒性模型并给予阿魏酸进行干预,采用LDH法检测细胞损伤,采用MTT法检测细胞存活率。采用Western Blotting技术对... 详细信息

目的:研究阿魏酸对棕榈酸诱导的HepG2肝细胞脂毒性的保护作用并初步探究其分子机制。方法:采用棕榈酸诱导HepG2肝细胞建立脂毒性模型并给予阿魏酸进行干预,采用LDH法检测细胞损伤,采用MTT法检测细胞存活率。采用Western Blotting技术对阿魏酸保护作用的分子机制进行研究。结果:不同浓度(25、50、100、200μmol/L)阿魏酸暴露对肝细胞无毒性作用(P>0.05)。阿魏酸干预显著抑制棕榈酸诱导的肝细胞损伤并改善棕榈酸诱导的细胞线粒体膜电位降低(P<0.05)。激活p38可显著增强棕榈酸诱导的肝细胞脂毒性(P<0.05),而抑制p38显著改善棕榈酸诱导的细胞损伤(P<0.05)。此外,阿魏酸显著抑制棕榈酸上调的p38磷酸化(P<0.05),采用p38激活剂处理细胞可阻断阿魏酸对脂毒性的保护作用(P<0.05)。结论:阿魏酸可有效改善脂毒性诱导的肝细胞损伤,该保护作用可能与其抑制p38信号通路有关。阿魏酸可能成为防治以脂毒性为主要病理特征性肝病的功效因子。

关键词：阿魏酸棕榈酸 p38 脂毒性肝细胞

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氧化应激与实热“上火”的相关性研究

世界中医药 2017年第12期12卷 2872-2875页

作者：李思敏包洁汪琴静窦晓兵范永升浙江中医药大学附属第三医院杭州310005 浙江中医药大学杭州310053 浙江中医药大学附属江南医院杭州311201

目的:通过检测观察组血液中过氧化指标(MDA、ROS)和抗氧化指标(GSH、T-AOC、SOD)的变化,探讨氧化应激与实热"上火"的相关性。方法:分别收集临床实热"上火"和正常人群的样本,检测其血浆中MDA、GSH、SOD、T-AOC水平和外周血白细胞中ROS含... 详细信息

目的:通过检测观察组血液中过氧化指标(MDA、ROS)和抗氧化指标(GSH、T-AOC、SOD)的变化,探讨氧化应激与实热"上火"的相关性。方法:分别收集临床实热"上火"和正常人群的样本,检测其血浆中MDA、GSH、SOD、T-AOC水平和外周血白细胞中ROS含量,进行比较。结果:与对照组比较,观察组血浆中MDA、GSH、SOD、T-AOC浓度水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05),而白细胞内的ROS含量显著下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:观察组过氧化指标与抗氧化指标均有显著变化,说明实热"上火"与氧化应激密切相关,观察组机体处于过氧化与抗氧化相互交争状态,但氧化与抗氧化水平尚且处于平衡阶段。

关键词：实热“上火” 氧化应激 MDA ROS GSH T-AOC SOD

激活自噬改善长链饱和游离脂肪酸诱导的血管内皮细胞黏附分子-1的表达

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浙江中医药大学学报 2019年第10期43卷 1124-1129页

作者：殷玉杰闫昭芫赖尚磊朱翔鸿窦晓兵李松涛浙江中医药大学生命科学学院杭州310053 浙江中医药大学滨江学院浙江中医药大学基础医学院、公共卫生学院

[目的]揭示自噬对长链饱和游离脂肪酸(long-chain saturated free fatty acids,L-SFAs)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)血管内皮细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)表达的影响及其作用机制。[方法]采用软脂酸(palmitic acid,PA)和硬脂酸(stearic acid,SA)对HUVECs进行处理,检测激活或抑制自噬对L-SFAs诱导下细胞内VCAM-1的mRNA及蛋白表达的影响。采用丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)通路抑制剂筛选参与自噬调控VCAM-1的分子信号通路,对关键靶点的蛋白表达水平进行检测。[结果] L-SFAs可显著上调HUVECs中VCAM-1的m RNA及蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),且作用呈剂量及时间依赖性。激活自噬可显著抑制PA诱导的VCAM-1表达增加(P<0.01);采用自噬抑制剂及siRNA干扰手段抑制自噬则能够促进VCAM-1的表达(P<0.05,P<0.01)。特异性抑制p38可显著抑制PA诱导的VCAM-1转录激活(P<0.05);调控自噬可显著逆转PA诱导的p38磷酸化水平的变化(P<0.05)。[结论]激活自噬通过下调L-SFAs诱导的p38磷酸化增加,从而抑制血管内皮细胞VCAM-1的表达,自噬调控有望成为改善血管内皮功能的有效策略。

关键词：自噬长链饱和游离脂肪酸血管内皮细胞血管内皮细胞黏附分子-1 p38