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枸杞多糖干预β-淀粉样蛋白1-42诱导SH-SY5Y细胞损伤:线粒体自噬的保护作用

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中国组织工程研究 2025年第31期29卷 6688-6696页

作者：苏琴贾思玮郭敏芳孟涛李雁冰穆秉桃宋丽娟马存根尉杰忠山西中医药大学神经生物学研究中心/国家中医药管理局益气活血法治疗多发性硬化重点研究室山西省晋中市030619 山西大同大学脑科学研究所/分子细胞免疫学大同市重点实验室山西省大同市037009 大同市第五人民医院山西省大同市037009

背景:神经退行性疾病与线粒体自噬调节失衡密切相关。课题组前期研究表明枸杞多糖具有神经保护作用,但其能否通过调控线粒体自噬来改善β-淀粉样蛋白1-42诱导的SH-SY5Y细胞损伤尚不明确。目的:探讨枸杞多糖对β-淀粉样蛋白1-42诱导的SH-... 详细信息

背景:神经退行性疾病与线粒体自噬调节失衡密切相关。课题组前期研究表明枸杞多糖具有神经保护作用,但其能否通过调控线粒体自噬来改善β-淀粉样蛋白1-42诱导的SH-SY5Y细胞损伤尚不明确。目的:探讨枸杞多糖对β-淀粉样蛋白1-42诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及机制。方法:通过β-淀粉样蛋白1-42诱导SH-SY5Y细胞建立阿尔茨海默病细胞模型,并用枸杞多糖进行干预。将SH-SY5Y细胞分为3组:对照组,β-淀粉样蛋白1-42组(20μmol/Lβ-淀粉样蛋白1-42干预24 h),枸杞多糖组(先提前1 h加入1 g/L枸杞多糖形成保护作用,然后再加入20μmol/Lβ-淀粉样蛋白1-42与枸杞多糖共同干预24 h)。CCK-8法检测细胞活力;JC-1检测线粒体膜电位;TUNEL染色检测细胞凋亡;免疫荧光和Western blot检测突触、凋亡和线粒体自噬相关指标的表达。结果与结论:①与对照组比较,β-淀粉样蛋白1-42组细胞活力下降(P<0.05),细胞凋亡率上升(P<0.05),线粒体膜电位下降(P<0.05),促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达升高(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低(P<0.05),突触相关蛋白Syn、PSD-95表达降低(P<0.05),线粒体自噬相关蛋白Pink1、LC3A/B、Parkin、Beclin-1表达降低(P<0.05),P62表达升高(P<0.05);②与β-淀粉样蛋白1-42组比较,枸杞多糖组细胞活力升高(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),线粒体膜电位上升(P<0.05),Bax和Caspase-3表达降低(P<0.05),Bcl-2表达升高(P<0.05),Syn和PSD-95表达升高(P<0.05),Pink1、LC3A/B、Parkin、Beclin-1表达升高(P<0.05),P62表达降低(P<0.05)。结果表明:枸杞多糖可能通过调控线粒体自噬来抑制β-淀粉样蛋白1-42诱导的SH-SY5Y细胞损伤,减少细胞凋亡,增加神经元突触可塑性。

关键词：枸杞多糖阿尔茨海默病 SH-SY5Y细胞线粒体自噬 β-淀粉样蛋白细胞凋亡工程化细胞

慢性高原病骨髓单个核细胞及上清液IGF-1和IGF-2的表达研究

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慢性高原病骨髓单个核细胞及上清液IGF-1和IGF-2的表达研究

作者：穆秉桃青海大学

学位级别：硕士

目的慢性高原病是一种与高原缺氧、低气压等环境因素有直接关系的红细胞增殖性疾病,而红细胞增殖受多种造血生长因子和凋亡因子的调控。胰岛素样生长因子-1是重要的红系造血调控因子。低氧可诱导IGF系统的表达,且IGF系统与低氧诱导因子-... 详细信息

目的慢性高原病是一种与高原缺氧、低气压等环境因素有直接关系的红细胞增殖性疾病,而红细胞增殖受多种造血生长因子和凋亡因子的调控。胰岛素样生长因子-1是重要的红系造血调控因子。低氧可诱导IGF系统的表达,且IGF系统与低氧诱导因子-1之间存在相互调控关系;人类红系祖细胞表达IGF-1和IGF-2及IGF受体,并认为IGFs以自分泌/旁分泌方式调控红系造血。本文通过检测CMS患者骨髓单个核细胞中IGF-1及IGF-2 mRNA表达水平,测定骨髓上清液中IGF-1和IGF-2蛋白水平,初步探讨IGF-1和IGF-2在CMS发病机制中的作用。方法按照第六届国际高原医学和低氧生理学术大会CMS诊断标准确诊的18例CMS患者为研究对象,均为男性,平均年龄(47.05±11.65)岁。16名健康男性作为对照组,平均年龄(50.29±16.24 )岁。采集骨髓液标本,用淋巴细胞分离液分离单个核细胞,采用RT-PCR方法半定量检测骨髓单个核细胞IGF-1和IGF-2 mRNA的表达,用固相双抗体夹心ELISA方法测定骨髓上清液IGF-1和IGF-2蛋白浓度,并进行比较分析。结果①CMS患者IGF-1 mRNA和IGF-2 mRNA的相对表达水平分别为0.639±0.320和0.613±0.325,均明显高于对照组IGF-1(0.177±0.12)和IGF-2(0.216±0.175),均为P<0.01;ELISA检测结果显示CMS患者IGF-1和IGF-2蛋白水平分别为(229.3±93.7)ng/ml和(192.3±46.3)ng/ml,均明显高于对照组IGF-1(110.1±16.0)ng/ml和IGF-2(85.9±8.2)ng/ml,均为P<0.01。②CMS组中IGF-1 mRNA和IGF-2 mRNA与其蛋白表达水平之间呈正相关(r =0.730,r =0.778,P<0.O1);CMS组IGF-1和IGF-2 mRNA分别与血红蛋白浓度间呈正相关(r =0.590,r =0.585,P<0.O1);CMS组IGF-1和IGF-2蛋白表达水平与血红蛋白浓度呈正相关(r =0.609,r =0.672,P<0.O1)。CMS组IGF-1和IGF-2 mRNA与SaO呈负相关(r =-0.619,r =-0.591,P<0.O1);CMS组IGF-1和IGF-2蛋白表达水平与SaO呈负相关(r =-0.591,r =-0.573,P<0.O1)。结论CMS患者骨髓细胞中IGF-1和IGF-2表达升高,且与血红蛋白间均呈正相关,与氧饱和度间均呈负相关。提示在CMS患者中,低氧可能直接或通过低氧诱导因子-1诱导骨髓细胞表达IGF-1和IGF-2,IGF-1和IGF-2又以自分泌/旁分泌方式促进红细胞过度增生,可能是CMS的重要发病机制之一。

关键词：慢性高原病骨髓胰岛素样生长因子

雷公藤甲素通过调节cAMP/PKA/BDNF信号通路促进脑缺血再灌注损伤神经元可塑性

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中国现代应用药学 2024年第7期41卷 911-916页

作者：穆秉桃郭敏芳于婧文张慧宇山西大同大学医学院山西大同037009 山西大同大学中医药健康服务学院山西大同037009

目的研究雷公藤甲素(triptolide,TP)对脑缺血再灌注(ischemia-reperfution,I/R)损伤大鼠的疗效评价及其发挥效能的机制。方法大脑中动脉线栓法手术复制大鼠脑I/R损伤模型,治疗组给予TP(0.1,0.2 mg·kg^(-1)),同时设假手术组。Longa评分... 详细信息

目的研究雷公藤甲素(triptolide,TP)对脑缺血再灌注(ischemia-reperfution,I/R)损伤大鼠的疗效评价及其发挥效能的机制。方法大脑中动脉线栓法手术复制大鼠脑I/R损伤模型,治疗组给予TP(0.1,0.2 mg·kg^(-1)),同时设假手术组。Longa评分法测评鼠神经功能,尼氏染色呈现大鼠缺血侧脑组织神经元形态,免疫荧光法检测缺血侧脑组织中MAP2和Syn的表达水平。Western blotting法检测cAMP、PKA、BDNF、Syn、PSD-95的表达水平。结果与模型组比较,TP治疗组神经学评分明显下降(P<0.01或P<0.001),对损伤神经元有保护作用,且TP治疗组cAMP、PKA、BDNF、PSD-95、Syn的表达均显著上调。结论TP治疗能显著改善I/R损伤,其机制可能与激活cAMP/PKA/BDNF信号通路有关。

关键词：雷公藤甲素缺血再灌注突触可塑性环磷酸腺苷蛋白激酶A 脑源性神经营养因子

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浅谈组胚教学引进多媒体辅助教学的利与弊

大同医学专科学校学报 2005年第3期25卷 55-56页

作者：穆秉桃大同医学专科学校组胚教研室 037008

组织胚胎学是一门医学形态基础课,具有内容繁杂、结构细微、理论抽象等特点,理论讲解十分困难,学习难于理解。引进多媒体辅助教学,可充分发挥多媒体教学的优势,克服不利因素,提高组胚教学质量。

关键词：组织胚胎学多媒体教学多媒体辅助教学组胚教学引进组织胚胎学多媒体教学医学形态不利因素教学质量基础课

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肺泡表面活性物质超微结构的研究进展

大同医学专科学校学报 2006年第2期26卷 33-34页

作者：穆秉桃山西大同大学医学院组胚教研室

肺泡衬里层的固定方法,不断改进为由组织块固定、支气管灌注固定、肺血管灌注固定、血管灌注固定加组织块固定相结合的方法,称为PS复合固定法。PS复合固定法能较好地保留肺泡衬里层,可以更好地显示肺泡表面活性物质(PS)的超微结构。

关键词：肺泡表面活性物质固定超微结构肺血管灌注 PS复合固定法

雷公藤甲素通过促进小胶质细胞M2极化减轻脑缺血再灌注大鼠神经元损伤

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第3期40卷 222-228页

作者：穆秉桃郭敏芳于婧文张慧宇山西大同大学医学院山西大同037009 山西大同大学中医药健康服务学院山西大同037009

目的研究雷公藤甲素(TP)对大鼠脑缺血再灌注(I/R)后小胶质细胞M1/M2极化的影响及分子机制。方法采用大脑中动脉栓塞法(MCAO)制备大脑中动脉栓塞再灌注模型,给予(0.1、0.2)mg/kg TP处理,假手术组大鼠作为对照。Longa评分法进行大鼠神经... 详细信息

目的研究雷公藤甲素(TP)对大鼠脑缺血再灌注(I/R)后小胶质细胞M1/M2极化的影响及分子机制。方法采用大脑中动脉栓塞法(MCAO)制备大脑中动脉栓塞再灌注模型,给予(0.1、0.2)mg/kg TP处理,假手术组大鼠作为对照。Longa评分法进行大鼠神经功能缺损进行评分,HE染色观察缺血侧脑组织神经元形态,神经元特异性核蛋白(NeuN)免疫荧光染色观察神经元数量;Western blot法检测缺血侧脑组织钙离子结合接头蛋白分子1(Iba1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg1)、Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)、NeuN和胱天蛋白酶3(caspase-3)的表达;ELISA检测白细胞介素1β(IL-1β)和IL-10的水平;免疫荧光双标记法检测小胶质细胞内Arg1和TLR4的表达。结果与模型组比较,TP处理组神经学评分明显降低,神经元损伤明显改善;IL-1β水平降低,IL-10水平增加;iNOS、TLR4、NF-κB、和caspase-3表达降低,Arg1和NeuN表达增加。结论TP处理逆转大鼠脑I/R损伤,可能与促进小胶质细胞M2极化、减少炎症因子释放与抑制凋亡有关。

关键词：雷公藤甲素(TP) 缺血再灌注(I/R) 小胶质细胞极化炎症凋亡

雷公藤甲素调节小胶质细胞极化反应保护损伤的神经元

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中国组织工程研究 2023年第33期27卷 5342-5347页

作者：张慧宇于婧文白振军李亮穆秉桃张金锋解佳伟山西大同大学中医药健康服务学院山西省大同市037009 山西大同大学医学院山西省大同市037009

背景:将小胶质细胞从M1表型转变为M2表型被认为是治疗神经退行性疾病的一种有希望的策略。多项研究表明,雷公藤甲素可以抑制神经炎症,改善多种神经退行性疾病,但是其机制尚不明确。目的:探讨雷公藤甲素对脂多糖激活小胶质细胞诱导SH-SY5... 详细信息

背景:将小胶质细胞从M1表型转变为M2表型被认为是治疗神经退行性疾病的一种有希望的策略。多项研究表明,雷公藤甲素可以抑制神经炎症,改善多种神经退行性疾病,但是其机制尚不明确。目的:探讨雷公藤甲素对脂多糖激活小胶质细胞诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其机制。方法:CCK8法检测BV2细胞活性筛选最佳的雷公藤甲素使用浓度;然后将BV2细胞分为3组:对照组,模型组(1μg/mL脂多糖),雷公藤甲素组(1 nmol/L雷公藤甲素+1μg/mL脂多糖),收集上清液,采用Griess法检测一氧化氮水平,ELISA法检测促炎因子白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β和抗炎因子白细胞介素10水平;免疫荧光染色和Western blot法检测BV2细胞诱导型一氧化氮合酶和精氨酸酶1的表达。收集3组小胶质细胞条件培养液并分别作用于SH-SY5Y细胞:分为对照条件培养液组、模型条件培养液组和雷公藤甲素条件培养液组,TUNEL染色法检测SH-SY5Y细胞凋亡率,免疫荧光染色和Western blot法检测caspase3、Bax和Bcl-2的表达。结果与结论:(1)与对照组比较,模型组BV2细胞上清液中一氧化氮、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β的释放量明显增加,白细胞介素10的释放量明显减少,诱导型一氧化氮合酶蛋白的表达增加,精氨酸酶1蛋白的表达减少;与模型组比较,雷公藤甲素组BV2细胞上清液中一氧化氮、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β水平降低,白细胞介素10水平增加,诱导型一氧化氮合酶蛋白的表达下降,精氨酸酶1蛋白的表达增加;(2)与对照条件培养液组比较,模型条件培养液组SH-SY5Y细胞的凋亡率增加,caspase3、Bax表达增加,Bcl-2表达减少;与模型条件培养液组比较,雷公藤甲素条件培养液组SH-SY5Y细胞凋亡率下降,caspase3、Bax表达减少,Bcl-2表达增加;(3)结果说明,雷公藤甲素可以减轻脂多糖激活小胶质细胞诱导的神经毒性,其机制可能与促进小胶质细胞向M2型极化有关。

关键词：雷公藤甲素脂多糖小胶质细胞炎症因子极化神经元凋亡

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银杏内酯A对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠T细胞的免疫调节作用

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中国免疫学杂志 2021年第10期37卷 1181-1185,1190页

作者：杨鹏伟刘春云穆秉桃于婧文肖保国马存根山西中医药大学国家中医药管理局多发性硬化益气活血重点研究室神经生物学研究中心山西中医药大学太原030024 山西大同大学脑科学研究所神经炎症及变性疾病基础与应用研究山西省重点实验室大同037009 复旦大学华山医院神经病学研究所上海200025

目的:明确银杏内酯A(GA)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的疗效,探讨GA对T细胞的免疫调节作用。方法:将C57BL/6雌性小鼠分为用GA治疗EAE小鼠的EAE治疗组(ET)、用生理盐水治疗EAE小鼠的EAE对照组(EC)及用生理盐水处理正常小鼠的正... 详细信息

目的:明确银杏内酯A(GA)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的疗效,探讨GA对T细胞的免疫调节作用。方法:将C57BL/6雌性小鼠分为用GA治疗EAE小鼠的EAE治疗组(ET)、用生理盐水治疗EAE小鼠的EAE对照组(EC)及用生理盐水处理正常小鼠的正常对照组(HC)。用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)免疫EC组和ET组小鼠,制备EAE模型。免疫当天至第28天,记录各组小鼠的体重和临床评分。免疫后第28天取小鼠脊髓,制成冰冻切片进行HE和LFB染色;Western blot检测脊髓中炎症因子IL-17和IFN-γ表达;流式细胞术检测脾脏T细胞亚群变化。结果:对比EC组,GA能够缓解EAE小鼠症状的严重程度(P<0.01),减少体重丢失(P<0.05),抑制中枢神经系统炎症细胞浸润(P<0.05),减轻髓鞘脱失(P<0.001),抑制表达IL-17和IFN-γ的CD4+T细胞亚群比例(P<0.05),上调CD4+TGF-β+和CD4+IL-10+T细胞亚群百分比(P<0.000 1);此外,GA可下调脊髓中IL-17(P<0.01)和IFN-γ(P<0.05)表达。结论:GA通过调节T细胞亚群平衡,尤其是抑制Th1和Th17介导的炎症反应,减轻EAE小鼠临床症状。

关键词：银杏内酯A 实验性自身免疫性脑脊髓炎 T细胞

远志皂苷元改善脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症反应的机制

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解放军医学杂志 2024年

作者：穆秉桃郭敏芳于婧文曹佳蕾杨凤君贾思玮苏琴孟涛马存根尉杰忠宋丽娟山西大同大学脑科学研究所/分子细胞免疫学大同市重点实验室山西大同大学医学院山西中医药大学国家中医药管理局多发性硬化益气活血重点研究室/神经生物学研究中心大同市第五人民医院神经内科

目的探究远志皂苷元（SEN）通过核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/NOD样受体蛋白3(NLRP3通路缓解小胶质细胞炎症反应的机制。方法将BV2小鼠小胶质细胞随机分为对照组、模型组、SEN组和MCC950组。对照组细胞不做处理，模型组细胞加入1μg/m... 详细信息

目的探究远志皂苷元（SEN）通过核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/NOD样受体蛋白3(NLRP3通路缓解小胶质细胞炎症反应的机制。方法将BV2小鼠小胶质细胞随机分为对照组、模型组、SEN组和MCC950组。对照组细胞不做处理，模型组细胞加入1μg/ml脂多糖（LPS）,SEN组细胞加入1μg/ml LPS+4μmol/L SEN,MCC950组加入1μg/ml LPS+10μmol/L MCC950，作用24 h。采用CCK-8法检测不同浓度SEN对BV2细胞活力的影响。采用Griess法测定上清液一氧化氮（NO）释放量；实时荧光定量PCR法测定NLRP3、淋巴细胞凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、胱天蛋白酶-1(caspase-1)、白细胞介素（IL）-1β和IL-18 mRNA的表达水平；免疫荧光染色法检测ASC、IL-1β、Nrf2和血红素加氧酶-1(HO-1)的表达水平；Western blotting检测NLRP3、caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18、Nrf2、HO-1及核因子κB(NF-κB)、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的表达水平。结果 CCK-8法检测结果显示，2～20μmol/L SEN处理的BV2细胞活力与对照组差异无统计学意义（P>0.05）。与对照组比较，模型组BV2细胞活力明显下降（P<0.05）；与模型组比较，4μmol/L SEN组BV2细胞活力明显恢复（P<0.05）。Griess法检测结果显示，与对照组比较，模型组细胞NO释放量明显增加（P<0.05）；实时荧光定量PCR结果显示，模型组细胞NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA表达水平均明显增高（P<0.05）;Western blotting检测结果显示，模型组细胞NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达水平明显增高（P<0.05）；免疫荧光染色结果显示，模型组细胞iNOS、NF-κB蛋白表达水平增高，Nrf2和HO-1表达水平下降，差异均有统计学意义（P<0.05）。与模型组比较，SEN组和MCC950组细胞NO释放减少，NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA和蛋白表达水平降低，差异均有统计学意义（P<0.05）;SEN组iNOS和NF-κB表达水平降低，免疫荧光染色显示Nrf2易位到核内，Nrf2和HO-1蛋白表达明显增多，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 SEN可缓解LPS诱导的小鼠小胶质细胞炎症反应，抑制NLRP3炎性小体的活化和表达，效果与炎性小体抑制剂MCC950相当；其机制可能与调控上游因子Nrf2和HO-1的表达有关。

关键词：远志皂苷元脂多糖小胶质细胞 NLRP3炎性小体炎症反应