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ZC3H7B调控circ＿0058429靶向miR145-5p在非小细胞肺癌中的作用

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ZC3H7B调控circ＿0058429靶向miR145-5p在非小细胞肺癌中的作用

作者：穆蝶承德医学院

学位级别：硕士

目的:1.检测环状RNA circ＿0058429在NSCLC细胞系中的表达。2.验证circ＿0058429通过靶向miR145-5p影响下游分子HMGB3的表达,进而影响NSCLC细胞的增殖、凋亡,并探究其作用机制。3.探索ZC3H7B对circ＿0058429生成的影响。方法:1.通过生... 详细信息

目的:1.检测环状RNA circ＿0058429在NSCLC细胞系中的表达。2.验证circ＿0058429通过靶向miR145-5p影响下游分子HMGB3的表达,进而影响NSCLC细胞的增殖、凋亡,并探究其作用机制。3.探索ZC3H7B对circ＿0058429生成的影响。方法:1.通过生物信息学分析筛选确定目的环状RNA circ＿0058429,采用qRT-PCR技术检测NSCLC细胞系A549、H520中circ＿0058429的表达水平,并通过sanger测序验证circ＿0058429的形成。2.分别转染circ＿0058429 si RNA、circ＿0058429 si NC、circ＿0058429过表达质粒、对照空载质粒(vector)至NSCLC细胞系中,通过qRT-PCR检测circ＿0058429及其亲本基因SGPP2 m RNA表达水平确定转染效率,通过CCK-8实验、流式细胞术检测circ＿0058429对NSCLC细胞增殖、凋亡能力的影响。3.通过共转染miR145-5p mimic+circ＿0058429-WT、miR145-5p NC+circ＿0058429-WT、miR145-5p mimic+circ＿0058429-MUT、miR145-5p NC+circ＿0058429-MUT,检测荧光素酶活性变化,直接验证两者结合关系。通过AGO2蛋白抗体进行RNA免疫沉淀(RIP)实验,检测产物中circ＿0058429、miR145-5p基因富集水平,以间接验证两者结合关系。转染circ＿0058429 si RNA、circ＿0058429 si NC后,通过qRT-PCR、western blotting实验检测高迁移率组盒3(HMGB3)m RNA和蛋白表达水平,以证明circ＿0058429靶向miR145-5p调控HMGB3的作用机制。4.通过Circular RNA Interactome数据库筛选与circ＿0058429相关的RNA结合蛋白,初步得到RNA结合蛋白ZC3H7B可以与circ＿0058429亲本基因SGPP2的pre-m RNA结合。转染ZC3H7B过表达质粒、对照空载质粒(vector)后,通过qRT-PCR、western blotting实验检测ZC3H7B m RNA和蛋白表达水平确定转染效率,通过qRT-PCR检测circ＿0058429的表达水平,随后利用RIP实验、sanger测序检测ZC3H7B结合位点,以验证ZC3H7B在circ＿0058429形成过程中的作用。结果:***-PCR结果表明,与正常支气管上皮细胞HBE相比,环状RNA circ＿0058429在NSCLC细胞系A549、H520中高表达(P0.05);与vector组相比,circ＿0058429组circ＿0058429表达显著增加(P0.05),表明si RNA和质粒均针对circ＿0058429反向剪接位点,而对亲本基因无明显影响。***-8结果显示si-circ＿0058429组较si-NC组OD值显著下降(P<0.05),circ＿0058429组OD值较vector组显著升高(P<0.05),表明circ＿0058429可以促进NSCLC细胞增殖。4.流式细胞术结果显示si-circ＿0058429组细胞较si-NC组凋亡细胞数量显著增加(P<0.05),circ＿0058429组凋亡细胞数量较vector组显著减少(P<0.05),表明circ＿0058429可以抑制NSCLC细胞凋亡。5.双荧光素酶报告基因实验结果显示,共转染miR145-5p mimic+circ＿0058429-WT型组别荧光素酶活性下降(P<0.05),其余组别无明显变化。RIP实验显示anti-AGO2组circ＿0058429、miR145-5p表达量较anti-Ig G组增高(P<0.05),两种实验直接和间接的证明了circ＿0058429可以结合miR145-5p。qRT-PCR、western blotting结果显示,si-circ＿0058429组HMGB3 m RNA、蛋白表达水平较si-NC组降低(P<0.05),表明circ＿0058429可通过靶向miR145-5p上调

关键词： RNA结合蛋白环状RNA 微小RNA 非编码RNA 非小细胞肺癌

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面向图像拼接检测的自适应残差算法

中国图象图形学报 2024年第2期29卷 419-429页

作者：张玲穆文鹏陈北京南京信息工程大学数字取证教育部工程研究中心南京210044 南京信息工程大学江苏省大气环境与装备技术协同创新中心南京210044 南京信息工程大学计算机学院南京210044

目的恶意的图像拼接篡改给名誉、法律、政治等带来一系列的挑战,而现有的图像拼接检测算法通常采用参数固定的高通滤波器提取滤波特征进行预处理,没有考虑图像之间的差异。方法本文设计自适应残差模块(adaptive residuals module, ARM... 详细信息

目的恶意的图像拼接篡改给名誉、法律、政治等带来一系列的挑战,而现有的图像拼接检测算法通常采用参数固定的高通滤波器提取滤波特征进行预处理,没有考虑图像之间的差异。方法本文设计自适应残差模块(adaptive residuals module, ARM)凸显拼接篡改痕迹,将卷积运算后的残差多次拼接,且每次拼接后再利用注意力机制实现通道间的非线性交互。然后,使用通道注意力SE(squeeze and excitation)模块以减少由ARM提取残差特征产生的通道之间信息冗余,并以在图像分类领域获得卓越性能的EfficientNet(high-efficiency network)为骨干网络,提出一种新的图像拼接检测算法。结果实验结果表明,所提算法在CASIA I(CASIA image tampering detection evaluation database),CASIA II,COLUMBIA COLOR,NIST16(NIST special database 16)和FaceForensic++这5个公开数据集上分别取得98.95%,98.88%,100%,100%,88.20%的检测准确率,获得比现有算法更高的准确率。提出的ARM将骨干网络EfficientNet在CASIA II数据集的准确率提高了3.94%以上。结论提出的基于自适应残差的图像拼接检测算法充分考虑图像之间的差异,凸显篡改区域与未篡改区域之间的区别,并获得更好的拼接检测结果。

关键词：图像取证深度神经网络图像拼接检测自适应残差 EfficientNet

基于单个B细胞抗体制备技术研制全犬源犬瘟热病毒H蛋白单克隆抗体

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基于单个B细胞抗体制备技术研制全犬源犬瘟热病毒H蛋白单克隆抗体

作者：穆永河南农业大学

学位级别：硕士

犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）是当前威胁犬科动物健康的重要病原体之一,该病具有较高的发病死亡率,各年龄阶段的犬均是感染对象。疫苗免疫是目前防控CDV感染的有效手段,由于免疫失败等原因造成CDV感染的犬,目前尚无用于该... 详细信息

犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）是当前威胁犬科动物健康的重要病原体之一,该病具有较高的发病死亡率,各年龄阶段的犬均是感染对象。疫苗免疫是目前防控CDV感染的有效手段,由于免疫失败等原因造成CDV感染的犬,目前尚无用于该病治疗的特效药。单克隆抗体（Monoclonal antibody,m Ab）特异性强、成分均一,作为抗体药物用于临床治疗时疗效显著,当前用于CDV辅助治疗的m Ab主要以鼠源单抗为主。鼠源单抗中的异源用于治疗时可能引起犬机体产生免疫排斥反应或过敏反应,随着人们对宠物犬健康更加关注,不含异源成分的全犬源单克隆抗体将是未来犬用抗体药物研发的主要方向。单个B细胞抗体制备技术是当前制备全人源或动物源单克隆抗体热门技术,目前该技术尚未在犬类上得到应用,因此本研究旨在利用单个B细胞抗体制备技术研制全犬源CDV单克隆抗体,为犬瘟热的治疗和研究提供新型基因工程抗体,以及为后续其他犬类病原体全犬源抗体药物的开发奠定基础。本研究主要包括以下几个方面:1、CDV H蛋白特异性记忆B细胞的分选与抗体基因的克隆用CDV弱毒苗对两只试验犬进行4次免疫,并对每次免疫后的血清抗体进行效价检测,选择体液免疫应答水平较高的犬分离外周血单个核细胞,并利用生物化H蛋白和荧光标记的犬CD分子单抗进行标记;通过流式细胞术分选抗原特异性单个记忆B细胞,利用单细胞RT-PCR技术扩增抗体重链和轻链可变区基因,最终从192个表型为CD3-/CD21+/CD27+/Ig G+/CDV H+的单个记忆B细胞中得到64条重链可变区序列（IGHV）、56条Lambda型轻链可变区序列（IGLV）及9条Kappa型轻链可变区序列（IGKV）,其中重轻链配对抗体37对。2、特异性记忆B细胞抗体可变区胚系基因多样性分析B细胞在分化发育过程中抗体基因会发生重排,形成高亲和力的B细胞抗原受体（B cell receptor,BCR）。本研究通过Ig BLASTH和IMGT/V-QUEST对测序得到的抗体重链和轻链可变区的多样性基因（Variable,V）、可变基因（Diversity,D）以及连接基因（Joining,J）的使用及重排情况,以及抗体可变区中互补决定区域（Complementarity determining region,CDR）的氨基酸分布规律进行分析,以此深入了解免疫犬BCR基因多样性形成机制。结果显示,在获得抗体基因中,IGHV胚系基因主要集中在IGHV3-38和IGHV3-19亚族,且IGHV3-38、IGHD2-1与IGHJ4-1的组合为优势重排;IGLV胚系基因多样性更加丰富,IGLV1-136亚族为优势亚族,而V-J重排却多发生在IGLV3-21与IGLJ3-1。IGHV-CDR3长度主要由8～17个氨基酸肽组成,而IGLV-CDR3长度集中在11个氨基酸肽。37对配对抗体可变区基因同源进化分析结果显示,抗体重链和轻链基因分别属于多个细胞亚群。3、全犬源单克隆抗体的表达与鉴定构建了17对重链和轻链配对抗体重组表达质粒,以重链和轻链质量比2:3共转染Exip CHO-S细胞进行抗体表达和纯化;通过Western-blot、SDS-PAGE对抗体表达及纯化情况进行鉴定,并通过ELISA、IFA以及病毒中和试验对m Ab生物学活性进行鉴定。结果显示,17株m Ab均成功表达,其中12株m Ab能被Protein A亲和层析树脂纯化;ELISA结果显示,表达17株m Ab中的10株能识别CDV H蛋白;IFA结果显示这10株CDV H蛋白m Ab均能识别转染H蛋白表达质粒的293细胞以及感染CDV的Vero细胞。综上所述,本研究首次建立了基于单个B细胞抗体制备技术制备全犬源单克隆抗体的技术平台,利用该技术平台筛选到10株CDV H蛋白特异性单克隆抗体,为后续CDV相关研究奠定了基础,也为全犬源抗体药物开发提供新方法。

关键词：犬 CDV H蛋白单个B细胞抗体制备技术全犬源单克隆抗体

火烧铺矿切顶卸压沿空掘巷“碎石-煤柱”协同承载机理研究

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火烧铺矿切顶卸压沿空掘巷“碎石-煤柱”协同承载机理研究

作者：穆航贵州大学

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基于数据挖掘和遥感的喀斯特农田土壤重金属Cd、Hg空间分布关系研究

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基于数据挖掘和遥感的喀斯特农田土壤重金属Cd、Hg空间分布关系研...

作者：穆田宝贵州大学

学位级别：硕士

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习近平文化思想融入大学生党员党性教育探析

学校党建与思想教育 2024年第12期 23-25页

作者：向敏穆帆中南财经政法大学金融学院湖北武汉430023

习近平文化思想是习近平新时代中国特色社会主义思想的文化篇,将习近平文化思想融入大学生党员党性教育,有利于把牢大学生党员党性教育“总开关”、贯通大学生党员党性教育“全链条”、增强大学生党员党性教育“亲和力”。习近平文化思... 详细信息

习近平文化思想是习近平新时代中国特色社会主义思想的文化篇,将习近平文化思想融入大学生党员党性教育,有利于把牢大学生党员党性教育“总开关”、贯通大学生党员党性教育“全链条”、增强大学生党员党性教育“亲和力”。习近平文化思想蕴含的文化自信、文化传播、文化主体等基本观点,与大学生党员党性教育中的理想信念、价值观念、群众路线等内容具有天然的内在耦合性。在习近平文化思想融入大学生党员党性教育的过程中,要坚持丰富教育内容、创新教育方法、提升教育队伍水平,全面提升大学生党员党性修养。

关键词：习近平文化思想大学生党员党性教育