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浙江省蚊媒携带流行性乙型脑炎病毒的分布特点

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中华预防医学杂志 2009年第4期43卷 282-286页

作者：谢荣辉张晓锋朱函坪徐芳姚苹苹程胤凯张意坚朱智勇浙江省疾病预防控制中心出血热重点实验室杭州310051 浙江省农业科学院浙江省仙居县疾病预防控制中心

目的了解浙江部分地区蚊媒及猪携带流行性乙型脑炎（乙脑）病毒情况以及浙江省存在的乙脑病毒基因型别。方法于2007年5月至10月在浙江省仙居、龙泉和慈溪3个县人房及猪舍采集蚊虫标本和猪血清，共采集10662只蚊虫和204份猪血清，蚊虫标... 详细信息

目的了解浙江部分地区蚊媒及猪携带流行性乙型脑炎（乙脑）病毒情况以及浙江省存在的乙脑病毒基因型别。方法于2007年5月至10月在浙江省仙居、龙泉和慈溪3个县人房及猪舍采集蚊虫标本和猪血清，共采集10662只蚊虫和204份猪血清，蚊虫标本中以淡色库蚊和中华按蚊为主。利用病毒分离和荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测蚊虫携带乙脑病毒，应用酶联接免疫吸附剂测定（ELISA）方法对猪血清进行抗体检测。应用荧光定量RT—PCR方法对细胞分离株进行病毒鉴定；利用RT—PCR方法扩增新分离乙脑病毒PrM基因，并对细胞分离到的病毒进行基因分型。结果在蚊虫标本中检出7批乙脑病毒核酸阳性样本，并分离出3株病毒，经鉴定3株病毒均为乙脑病毒，基因分析表明3株病毒均属于基因I型乙脑病毒。猪血清有121份阳性，总阳性率为59．3％。6月份有50％以上的猪血清中乙脑病毒抗体呈阳性。结论浙江省部分地区存在着乙脑的传播媒介，在蚊媒和猪中携带有乙脑病毒；采集的蚊虫标本中分离到3株病毒，经鉴定为基因I型乙脑病毒，是近年来在浙江省首次分离到的基因I型乙脑病毒。

关键词：脑炎病毒,日本脑炎,虫媒病毒环境监测基因型

汉坦病毒Z5株M和S片段全基因序列测定及分析

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中国人兽共患病学报 2010年第3期26卷 215-217,225页

作者：李婵谢荣辉朱函坪徐芳姚苹苹程胤凯朱智勇浙江省疾病预防控制中心出血热重点实验室杭州310051

目的测定汉坦病毒Z5株M、S片段的全长序列,了解其分子结构特征,并分析Z5与其他汉坦病毒株的遗传学差异。方法设计引物,用RT-PCR技术扩增Z5株全长M与S片段。PCR产物纯化后克隆入T载体并测定序列及分析。结果Z5株M片段的全基因序列含有3 ... 详细信息

目的测定汉坦病毒Z5株M、S片段的全长序列,了解其分子结构特征,并分析Z5与其他汉坦病毒株的遗传学差异。方法设计引物,用RT-PCR技术扩增Z5株全长M与S片段。PCR产物纯化后克隆入T载体并测定序列及分析。结果Z5株M片段的全基因序列含有3 616个核苷酸,编码1 135个氨基酸。S全基因序列含有1 700个核苷酸,编码429个氨基酸。经核苷酸与氨基酸同源性分析,Z5株应属于汉坦病毒的汉滩型(HTN型)毒株,与Z10株同属一个亚型。结论Z5株病毒和其他汉滩病毒病毒在核苷酸序列上有差异,但在氨基酸水平上的同源性仍较高。

关键词：汉坦病毒 M和S基因片段序列分析

Ⅱ型登革病毒NS1基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达

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中国人兽共患病学报 2008年第12期24卷 1114-1117页

作者：谢荣辉朱函坪程胤凯徐芳姚苹苹翁景清朱智勇浙江省疾病预防控制中心出血热重点实验室杭州310051

目的获得II型登革热病毒NS1基因并在昆虫细胞中表达,为进一步研发登革热血清学检测试剂盒提供抗原。方法RT-PCR扩增II型登革热病毒NS1基因并测序列,并定向克隆入杆状病毒转移载体pFastBac-HTA,获得重组转移载体pFastBac-NS1。并将pFastB... 详细信息

目的获得II型登革热病毒NS1基因并在昆虫细胞中表达,为进一步研发登革热血清学检测试剂盒提供抗原。方法RT-PCR扩增II型登革热病毒NS1基因并测序列,并定向克隆入杆状病毒转移载体pFastBac-HTA,获得重组转移载体pFastBac-NS1。并将pFastBac-NS1转化到DH10Bac感受态细胞中,筛选到重组转座子rBacmid-NS1。在脂质体介导下将rBacmid-NS1转染Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒rBV-NS1。rBV-NS1感染Sf9细胞后,通过SDS-PAG和Western blot检测NS1重组蛋白。结果成功克隆II型登革病毒NS1基因,SDS-PAGE、间接免疫荧光和Western blot检测表明NS1基因在昆虫细胞得到表达,能与登革患者血清发生特异性免疫反应,具有免疫原性。结论II型登革病毒非结构蛋白NS1在昆虫中表达,为进一步研究NS1的生物学特性和血清学检测奠定基础。

关键词：登革病毒非结构蛋白克隆真核表达

浙江省基因Ⅰ型乙脑病毒全基因序列的测定及分析

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中华实验和临床病毒学杂志 2009年第4期23卷 245-247页

作者：谢荣辉朱函坪付士红程胤凯徐芳姚苹苹杨章女周小龙朱智勇浙江省疾病预防控制中心出血热重点实验室杭州310009 中国疾病预防控制中心病毒所

目的为了获得浙江省乙脑病毒基因组详尽的资料，研究基因Ⅰ型乙脑病毒的分子特征及变异程度，为乙脑病毒分子流行病学及其基因研究提供科学依据。方法设计特异性引物、RT-PCR分段扩增XJ69和XJP613株全基因，PCR产物纯化后克隆于T载体并... 详细信息

目的为了获得浙江省乙脑病毒基因组详尽的资料，研究基因Ⅰ型乙脑病毒的分子特征及变异程度，为乙脑病毒分子流行病学及其基因研究提供科学依据。方法设计特异性引物、RT-PCR分段扩增XJ69和XJP613株全基因，PCR产物纯化后克隆于T载体并进行序列测定。通过生物学软件进行核苷酸序列和氨基酸序列分析和病毒的系统进化分析。结果新分离乙脑病毒XJ69和XJP613株全基因组全长均为10964个核苷酸，含有一个开放阅读框架，编码3432个氨基酸。与GenBank中选择的32株乙脑病毒全基因序列比较发现，其核苷酸同源为83．5％～99．2％，氨基酸总体同源性为97．5％～99．7％。通过PrM／C区段、E区段及全基因序列进行系统进化分析均显示该毒株属于基因I型乙脑病毒。结论新分离的乙脑病毒XJ69和XJP613株属于基因Ⅰ型，与上海三带喙库蚊分离株sH17M-07关系最为接近。

关键词：脑炎病毒亚组日本序列分析种系发生

一步法流行性乙型脑炎病毒TaqMan荧光定量反转录聚合酶链反应方法的建立及应用

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中华流行病学杂志 2009年第3期30卷 277-280页

作者：谢荣辉徐芳朱函坪程胤凯傅桂明姚苹苹翁景清卢亦愚杨章女朱智勇浙江省疾病预防控制中心出血热重点实验室杭州310051

目的建立一种特异、灵敏、快速检测流行性乙型脑炎（乙脑）病毒的荧光定量RT-PCR方法。方法根据GenBank登录的乙脑病毒毒株序列，应用生物软件在乙脑病毒基因的保守区设计与筛选引物和探针，对荧光定量RT-PCR反应体系与条件进行优化，... 详细信息

目的建立一种特异、灵敏、快速检测流行性乙型脑炎（乙脑）病毒的荧光定量RT-PCR方法。方法根据GenBank登录的乙脑病毒毒株序列，应用生物软件在乙脑病毒基因的保守区设计与筛选引物和探针，对荧光定量RT-PCR反应体系与条件进行优化，验证方法的特异性、敏感性和重复性。并通过对蚊虫样本的检测，以评价该方法的实际应用价值。结果优化结果表明荧光定量RT-PCR的最佳反应体系为0．1gmol／L探针浓度，0．2gmol／L引物浓度，5mmol／L Mg^2＋浓度。结果表明该方法对乙脑病毒的检测有高度的特异性、通用性，对1～4型登革热病毒、狂犬病毒、汉坦病毒（SEO型与HTN型）均无交叉反应，检测的灵敏度达0．1TCID50，重复性分析表明同一样品Ct值的重复检测4次，其标准差均在合理范围内，分别为0．033、0．079、0．149和0．411。对110批蚊虫标本进行荧光定量RT-PCR检测和病毒分离检测，结果荧光定量RT-PCR检测出7份阳性，而病毒分离则只检测出3份阳性，表明建立的荧光定量RT-PCR方法更敏感，可直接从蚊虫样本中检测乙脑病毒核酸，从病毒核酸提取至完成检测仅需3h左右，且操作简便、敏感性高。结论研究建立的TaqMan荧光定量RT-PCR的方法具有特异、敏感、快速的特点，适用于乙脑病原学的快速检测。

关键词：流行性乙型脑炎病毒荧光定量反转录-聚合酶链反应检测

流行性乙型脑炎病毒非结构蛋白1基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达

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中国疫苗和免疫 2011年第1期17卷 41-44页

作者：谢荣辉程胤凯朱函坪翁景清徐芳姚苹苹朱智勇浙江省疾病坝防控制中心杭州310051

目的获得流行性乙型脑炎(乙脑)病毒非结构蛋白1(Non-structural Protein 1,NS1)基因并在昆虫细胞中表达,为研制乙脑病毒基因工程疫苗奠定基础。方法逆转录-聚合酶链反应扩增乙脑病毒NS1基因并测序列,定向克隆入杆状病毒(Baculovirus,BV... 详细信息

目的获得流行性乙型脑炎(乙脑)病毒非结构蛋白1(Non-structural Protein 1,NS1)基因并在昆虫细胞中表达,为研制乙脑病毒基因工程疫苗奠定基础。方法逆转录-聚合酶链反应扩增乙脑病毒NS1基因并测序列,定向克隆入杆状病毒(Baculovirus,BV)转移载体pFastBac HTa,获得重组转移载体pFastBac-NS1。并将pFastBac-NS1转化到DH10Bac感受态细胞中,筛选到重组转座子rBacmid-NS1。在脂质体介导下将rBacmid-NS1转染粉蚊夜蛾(Trichoplusia ni,TN)细胞获得重组BV(rBV-NS1)。rBV-NS1感染TN细胞后,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacryamide Gel Eleetrophoresis,SDS-PAG)、间接免疫荧光试验(Indirect Immunofluorescence Assay,IFA)和蛋白质印迹法(Western blotting,WB)检测NS1重组蛋白。结果成功克隆乙脑病毒NS1基因,SDS-PAGE、IFA和WB检测表明,NS1基因在昆虫细胞得到表达,能与乙脑患者血清发生特异性免疫反应,具有免疫原性。结论乙脑病毒NS1在昆虫细胞中表达,为研究NS1的生物学特性和研制基因工程疫苗奠定了基础。

关键词：流行性乙型脑炎病毒非结构蛋白1 克隆表达

辽宁省啮齿类动物肾综合征出血热病毒株的分离及鉴定

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中国卫生检验杂志 2009年第7期19卷 1625-1627,1653页

作者：刘芸秦彩明姚文清孙英伟张稷博程胤凯翁景清张全福李建东辽宁省疾病预防控制中心沈阳110005 浙江省疾病防控制中心杭州310009 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052

目的:通过对我省疫区捕获的鼠肺样本做病毒分离,初步掌握辽宁省啮齿类动物自然感染肾综合征出血热(HFRS)病毒亦称为汉坦病毒(Hantavirus,HV)的病毒型别,为今后疫区的防治工作提供可靠的依据。方法:将待检的阳性鼠肺样本分成二组,其中一... 详细信息

目的:通过对我省疫区捕获的鼠肺样本做病毒分离,初步掌握辽宁省啮齿类动物自然感染肾综合征出血热(HFRS)病毒亦称为汉坦病毒(Hantavirus,HV)的病毒型别,为今后疫区的防治工作提供可靠的依据。方法:将待检的阳性鼠肺样本分成二组,其中一组直接用vero-E6细胞做病毒分离,而另一组先做动物试验将病毒增殖,然后再做vero-E6细胞传代适应;最后应用型特异性引物进行逆转录套式PCR(RT-PCR,)扩增病毒核酸,并对其M片段的靶序列核苷酸序列进行测定,从而达到对所分离的汉坦病毒进行分型及鉴定。结果:样本直接做细胞分离获得阳性病毒株3株,经动物增殖两代后获得强阳性鼠肺3份,弱阳性鼠肺1份;再转vero-E6细胞传代适应后得到阳性毒株2株,经核酸检测与序列鉴定确定了我们所分离的5株病毒株均为汉坦病毒,其中1株为汉滩型病毒(Hantaan virus,HTNV),4株为汉城型病毒(Seoul virus,SEOV)。

关键词：汉坦病毒病毒分离 RT-PCR 分型及鉴定系统发生树

2007年浙江省鼠类感染汉坦病毒监测及病毒分离

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中国媒介生物学及控制杂志 2009年第4期20卷 349-351页

作者：姚苹苹徐芳朱函坪谢荣辉程胤凯梅玲玲朱智勇邓小昭张云王忠灿浙江省疾病预防控制中心浙江省肾综合征出血热疫苗研究重点实验室杭州310051 南京军区军事医学研究所

目的了解浙江省鼠类自然感染汉坦病毒(HV)情况和病毒型别,为肾综合征出血热(HFRS)防治提供科学依据。方法采集鼠类肺组织和血清标本,用间接免疫荧光试验检测鼠血清IgG抗体,直接免疫荧光试验检测鼠肺HV抗原。HV抗原阳性鼠肺接种Vero-E6... 详细信息

目的了解浙江省鼠类自然感染汉坦病毒(HV)情况和病毒型别,为肾综合征出血热(HFRS)防治提供科学依据。方法采集鼠类肺组织和血清标本,用间接免疫荧光试验检测鼠血清IgG抗体,直接免疫荧光试验检测鼠肺HV抗原。HV抗原阳性鼠肺接种Vero-E6细胞分离病毒,用HV单克隆荧光抗体鉴定分离株的型别。结果共捕获鼠形动物1129只,其中黑线姬鼠为优势种,鼠肺HV抗原阳性率为3.0%,鼠血标本IgG抗体阳性57份,阳性率8.0%。分离到6株汉滩(HTN)型病毒,其中来自黑线姬鼠5株,褐家鼠1株。结论浙江省存在以黑线姬鼠为主要传染源的HFRS疫源地,HV主要流行型别为HTN型。

关键词：啮齿动物汉坦病毒监测

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财务共享模式下企业财务信息安全研究

企业经济 2025年 153-160页

作者：周胤江西开放大学财务处

随着信息技术的飞速发展和企业管理现代化需求的增长，财务共享模式在企业中得到广泛应用。然而，这种模式在带来效率提升和成本降低等益处的同时，也给企业财务信息安全带来了严峻挑战。本研究聚焦财务共享模式下的企业财务信息安全问... 详细信息

随着信息技术的飞速发展和企业管理现代化需求的增长，财务共享模式在企业中得到广泛应用。然而，这种模式在带来效率提升和成本降低等益处的同时，也给企业财务信息安全带来了严峻挑战。本研究聚焦财务共享模式下的企业财务信息安全问题，梳理当前财务共享模式下财务信息安全现状，探讨在此模式下企业可能面临的诸如技术漏洞、管理缺陷、人员风险、法律合规问题等多方面的财务信息安全威胁，从技术防护、管理优化、法律遵循等多个维度提出构建全面有效的财务信息安全保障体系的建议，使企业在享受财务共享模式便利的同时，能够有效保障财务信息的安全性、完整性和可用性，降低企业经营风险，提升企业核心竞争力，促使企业实现可持续健康发展。

关键词：财务共享模式财务信息安全企业管理