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人松弛素H2前体类似物在毕赤酵母中的高效表达

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人松弛素H2前体类似物在毕赤酵母中的高效表达

作者：韩佳汕黑龙江八一农垦大学

学位级别：硕士

松弛素属胰岛素家族,是由两条短肽链构成的生殖激素,对生殖系统和心血管具有重要的生理作用。人类的松弛素基因有H1、H2、H3等3种不同的序列,人体内松弛素H2是最主要的存在形式。松弛素以激素原的状态分泌,其一级结构按B链、C肽、A链的... 详细信息

松弛素属胰岛素家族,是由两条短肽链构成的生殖激素,对生殖系统和心血管具有重要的生理作用。人类的松弛素基因有H1、H2、H3等3种不同的序列,人体内松弛素H2是最主要的存在形式。松弛素以激素原的状态分泌,其一级结构按B链、C肽、A链的顺序排列,组织中的转化酶将C肽切除后,形成成熟的松弛素。人体内松弛素组织来源很困难,因此国内外很多研究者致力于松弛素制备方法的研究。最为常见的制备方式是化学合成A和B肽链,再进行体外折叠,因二硫键经常错配而造成产率较低。国外也有用哺乳动物细胞、大肠杆菌、酵母等重组表达其前体的报道,但其表达量较低或生物活性不高。根据人松弛素H2的氨基酸一级结构,本文设计带有人工C肽的松弛素H2的前体结构,即人松弛素H2前体类似物(RH2),利用酵母菌的偏爱密码子,反向编码,人工合成RH2的基因,采用pPICZaA和pGAPZaA表达载体,GS115和SMD1168毕赤酵母为宿主,成功构建了高效分泌RH2的重组毕赤酵母,在毕赤酵母中实现了RH2的高效分泌表达,再经表达产物的提取、人工C肽的切除,获得具有生物活性的重组松弛素。1.根据人松弛素H2的氨基酸一级结构,设计带有NGFNG人工C肽的松弛素H2的前体结构,利用Jcat软件优化RH2基因并人工合成;将RH2基因插入到pPICZaA和pGAPZaA表达载体Kex2信号肽切除位点的后面,构建pPICZaA-RH2、pGAPZaA-RH2表达载体,经过酶切、PCR和测序鉴定后,结果表明pPICZaA-RH2、p GAPZaA-RH2酵母表达载体构建成功。2.将重组质粒pPICZaA-RH2、pGAPZaA-RH2分别经限制性内切酶SacI、AvrⅡ线性化,将质粒pPICZaA-RH2电转导入毕赤酵母GS115中,pGAPZaA-RH2电转导入毕赤酵母GS115及SMD1168中。用高浓度的zeocin抗性筛选高效表达菌株,经PCR、Tricine-SDS-PAGE和Western Blot鉴定分析,成功的获得了高效分泌表达RH2的重组菌株,三株菌分别命名为pPICZaA-RH2-GS115、pGAPZaA-RH2-GS115、pGAPZaA-RH2-SMD1168。3.将重组菌pPICZaA-RH2-GS115接种于BMMY培养基中经甲醇诱导表达后,对不同时间段的表达产物进行Tricine-SDS-PAGE分析表明,36 h后目的蛋白表达量最大,经薄层扫描分析,表达的重组蛋白表达量占菌体总蛋白的47.6%,Western Blot分析显示,该蛋白具有良好的反应原性,表达量约为451μg/mL。4.将重组菌pGAPZaA-RH2-GS115置于YPD培养基诱导表达,36 h后目的蛋白表达量最大,达244μg/mL。将重组质粒pGAPZaA-RH2-SMD1168于YPD培养基诱导表达,12 h到72 h诱导目的蛋白表达量几乎没有变化,表达量达470μg/mL,纯化的重组蛋白纯度达96%,C肽切除的重组松弛素经检测具有生物活性。综上所述,我们成功地设计了松弛素前体类似物并成功在毕赤酵母中获得高效表达;经羟氨切除人工C肽后,获得具诱导THP-1细胞cAMP增加的松弛素,为其进一步研究奠定了基础。

关键词：重组人松弛素H2 毕赤酵母表达生物活性

美国商学院MBA人才培养模式的特色分析及国际借鉴

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当代教育科学 2014年第5期 51-55页

作者：赵汕北京广播电视大学

中国工商管理专业高等教育经过十几年的发展,但整体水平在世界上还处于相对落后的地位,因此有必要分析并借鉴美国商学院MBA教育的经验,以提升我国工商管理专业高等教育的办学水平,提高教学质量,真正培养出能够为工商企业所用的实用性人... 详细信息

中国工商管理专业高等教育经过十几年的发展,但整体水平在世界上还处于相对落后的地位,因此有必要分析并借鉴美国商学院MBA教育的经验,以提升我国工商管理专业高等教育的办学水平,提高教学质量,真正培养出能够为工商企业所用的实用性人才。论文有针对性地选择并分析了哈佛商学院、宾西法尼亚大学沃顿商学院、纽约大学斯特恩商学院等美国著名商学院在MBA人才培养目标、课程设置、教学过程与评价等方面的特色,并形成了MBA人才培养模式的国际经验借鉴,以期为我国的工商管理专业高等教育献计献策。

关键词：美国商学院 MBA 培养目标课程设置教学评价

基于夜间灯光数据的京津冀城市群协同发展研究

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基于夜间灯光数据的京津冀城市群协同发展研究

作者：钟林汕北华航天工业学院

学位级别：硕士

夜间灯光数据的主要来源是城市区域人为活动产生的稳定灯光,灯光强度变化可以更直观的反映夜间人类活动的差异,人类活动是影响城市群的重要因素之一,因此夜间灯光数据常用于城市群发展研究当中。目前,基于夜间灯光数据的应用研究成果较... 详细信息

夜间灯光数据的主要来源是城市区域人为活动产生的稳定灯光,灯光强度变化可以更直观的反映夜间人类活动的差异,人类活动是影响城市群的重要因素之一,因此夜间灯光数据常用于城市群发展研究当中。目前,基于夜间灯光数据的应用研究成果较为丰富,但基于夜间灯光数据对城市群协同发展研究的应用体系相对较少,本研究采用以夜间灯光数据为主,结合多源数据展开对京津冀城市群协同发展研究分析。京津冀城市群是我国以首都为核心的城市群,其对于我国区域发展格局具有重要的战略地位。针对京津冀地区发展不均衡,各城市之间发展差异明显等问题,京津冀城市群协同发展研究具备实际意义。根据《京津冀协同发展规划纲要》中提出,京津冀城市群协同发展近期目标是推进交通、生态环境、产业三个重点领域率先突破。以京津冀协同发展近期目标为导向,京津冀协同发展为目标,结合夜间灯光数据的特性选取交通协同、城乡协同和环境协同三个方面展开研究。本研究以NPP-VIIRS夜间灯光数据为基础,分析京津冀城市群灯光的空间变化,建立热点分析指数,空间关联强度指数,物流增长率指数反映交通协同状况;分析京津冀城市群灯光数据空间特性界定城镇和乡村区域,提取的城镇面积数据建立城市化指数,采用综合灯光指数计算建立经济增长率指数,采用基尼系数计算京津冀城市群城乡差异性指数反映城乡协同状况;采用夜间灯光总值建立细颗粒物(PM和PM)和二氧化碳的拟合回归关系表观京津冀城市群的环境协同。研究得出结论:京津冀交通协同极大程度上带动了北京周边城市发展,如廊坊、保定等地。从城乡协同的角度上分析,京津冀城市化指数在逐步上升、城乡差异性得到缓和,京津冀经济发展加快。以空气环境分析,京津冀细颗粒物(PM和PM)等大气主要污染物治理效果显著。最后,根据系统耦合协调度模型和协调发展的分类体系对京津冀城市群协同发展进行综合评价,结果显示,京津冀城市群已经从中度失调发展成为轻度失调,京津冀协同发展初见成效。

关键词：夜间灯光数据京津冀城市群协同发展

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摄影小说集

摄影小说集

1987年

作者：紫汕王昀选编

来源：汇雅图书（南通市图书馆... 评论

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福州“五四”游泳馆地基基础加固

施工技术 1995年第9期24卷 29-30页

作者：李玉汕福建省轻纺工业设计院

福州“五四”游泳馆地基基础加固李玉汕１工程概况福州“五四”游泳馆座落在五四路中段，是７０年代初期在原露天游泳池的基础上，增加屋盖建成的。该馆为单层钢筋混凝土排架结构，平面尺寸５８．９８ｍ×２３．９４ｍ，建筑面积１４１... 详细信息

福州“五四”游泳馆地基基础加固李玉汕１工程概况福州“五四”游泳馆座落在五四路中段，是７０年代初期在原露天游泳池的基础上，增加屋盖建成的。该馆为单层钢筋混凝土排架结构，平面尺寸５８．９８ｍ×２３．９４ｍ，建筑面积１４１２ｍ２，内设有１６．８ｍ×５０ｍ、...

关键词：游泳馆地基基础处理沉降

领导干部自然资源资产离任审计研究 ——以W县为例

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领导干部自然资源资产离任审计研究 —...

作者：孟春汕首都经济贸易大学

学位级别：硕士

领导干部自然资源资产离任审计作为一项新兴的审计领域,虽然已在全国各地全面铺开,但是理论上仍存在很多尚未解决的问题,实务工作也缺乏完整全面的工作体系,总体上还处在初期探索阶段。本文的研究目的,是通过对自然资源资产离任审计的研... 详细信息

领导干部自然资源资产离任审计作为一项新兴的审计领域,虽然已在全国各地全面铺开,但是理论上仍存在很多尚未解决的问题,实务工作也缺乏完整全面的工作体系,总体上还处在初期探索阶段。本文的研究目的,是通过对自然资源资产离任审计的研究,分析现行自然资源资产离任审计存在的问题,分析解决方案。本文通过文献研究、实地调研、案例分析等方法,整理归纳现有文献,结合已开展项目,重点关注基层领导干部自然资源资产审计试点工作情况,目前我国已开展的领导干部自然资源资产离任审计研究中,大多是对地市级开展的自然资源资产离任审计的研究,而对县区级领导干部关注度较少,本文选择以县级领导干部为研究对象,为县级领导干部自然资源资产离任审计的深入开展提供借鉴。以W县领导干部自然资源资产离任审计具体情况为例,通过对审计案例的深度剖析,分析了在资源资产审计过程中存在的思想意识层面、审计实施中、审计评价、责任界定、结果运用及审计部门自身不足等问题,提出有针对性的意见建议,进一步充实相关理论,对今后全面系统地实行与推广领导干部自然资源资产离任审计提供理论基础,更好的指导审计实践。

关键词：自然资源资产离任审计领导干部

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激光刻蚀抛光石英玻璃工艺研究

激光刻蚀抛光石英玻璃工艺研究

作者：王汕华中科技大学

学位级别：硕士

石英玻璃由于对近红外到紫外波段透射率高、高硬度、热性能好、耐酸碱和高绝缘性以及良好的化学稳定性等一系列优异的物化性能，成为光电子、微电子、光学以及光纤技术行业的重要材料，在国防、汽车工业、航空航天、光学以及电子领域、... 详细信息

石英玻璃由于对近红外到紫外波段透射率高、高硬度、热性能好、耐酸碱和高绝缘性以及良好的化学稳定性等一系列优异的物化性能，成为光电子、微电子、光学以及光纤技术行业的重要材料，在国防、汽车工业、航空航天、光学以及电子领域、民用和生物医学等方面有着广泛的应用。但是由于石英材料属于硬脆性材料，具有脆性高、断裂韧性低、材料的弹性极限和强度非常接近等特性。到目前为止，该材料的加工仍然是一件困难的事情。本论文采用波长为355nm的脉冲紫外激光作为光源，并分别设置激光直接刻蚀、激光诱导等离子体刻蚀和激光背部湿刻蚀等不同的实验方法对石英玻璃进行了一系列刻蚀实验研究。研究了激光脉冲能量密度、激光重复频率、刻蚀次数、扫描速度、离焦量以及填充间距对石英玻璃刻蚀阈值、刻蚀深度、刻蚀底部粗糙度和刻蚀边缘质量的影响规律，从理论上分析和讨论了不同刻蚀方法与石英玻璃作用机制和相互作用机理。试验结果和机理分析指出激光直接刻蚀和激光背部湿刻蚀方法均能获得较深的刻蚀深度，但刻蚀边缘脆裂崩边现象无法避免，刻蚀底面粗糙度较高。尤其是激光背部湿刻蚀方法的重复性、一致性和稳定性极差。而激光诱导等离子体刻蚀方法可获得无脆裂崩边、整齐的刻蚀边缘，刻蚀底部粗糙度可达1μm以下的良好刻蚀质量，且具有很好的重复性、一致性和稳定性，并且能实现在石英玻璃表面进行复杂图形的刻蚀工作,但刻蚀深度受到一定限制。本实验中的激光诱导等离子体刻蚀方法最大刻蚀深度为22μm。为了进一步提高激光刻蚀面光洁度，本论文提出了CO2激光抛光石英玻璃刻蚀面的创新方法来提高激光诱导等离子体刻蚀面的光洁度，并对其实验和机理进行分析研究。研究结果证明该方法在厚度为0.6mm厚的石英片的深度为15μm刻蚀面粗糙度进行激光抛光，可有效地使粗糙度进一步下降到85nm，且刻蚀边缘没有出现崩边碎裂现象。

关键词：激光刻蚀激光抛光石英玻璃