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鸭沙门菌rfaH基因缺失株的构建及其生物学特性研究

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农业生物技术学报 2025年第3期 642-649页

作者：宋亚雯高宇杰张晓荟王温馨葛同鑫翟瑞东宋厚辉程昌勇李爱云韩月浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江大学医学院附属妇产科医院

鸭沙门菌(Salmonella anatum)是引起鸭沙门菌病的主要病原微生物。rfaH是编码抗转录终止因子RfaH的基因，在细菌转录、感染等生物学特性中具有重要作用。为了研究rfaH基因对鸭沙门菌生长、运动、生物被膜和感染细胞等生物学特性的影响... 详细信息

鸭沙门菌(Salmonella anatum)是引起鸭沙门菌病的主要病原微生物。rfaH是编码抗转录终止因子RfaH的基因，在细菌转录、感染等生物学特性中具有重要作用。为了研究rfaH基因对鸭沙门菌生长、运动、生物被膜和感染细胞等生物学特性的影响，本研究通过Red同源重组技术，利用鸭沙门菌分离株SA01构建了rfaH基因缺失株ΔrfaH和回补株CΔrfaH。测序结果表明，SA01的rfbH基因缺失株ΔrfaH和回补株CΔrfaH构建成功。rfbH基因缺失后，SA01生长速率不变，但O抗原合成受损，细菌运动能力显著降低，生物被膜形成能力增强，对鸡胚成纤维细胞DF-1细胞的黏附和侵袭能力增强，在小鼠单核巨噬细胞RAW264.7中的增殖能力减弱。研究结果表明，rfbH基因参与沙门菌的运动、生物被膜形成和感染细胞等生物学过程。本研究初步阐明了SA01的rfaH基因的生物学功能，为开发基于鸭沙门菌的递呈载体疫苗提供了理论依据。

关键词：鸭沙门菌 rfaH基因生物学特性

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虾仁中副溶血弧菌灭活动力学模型的建立

微生物学报 2013年第1期53卷 31-37页

作者：刘媛方春程昌勇方维焕浙江大学动物预防医学研究所浙江省动物医学重点实验室杭州310058

【目的】建立醋酸、乳酸和柠檬酸对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)在生理盐水和虾仁中的灭活动力学模型,指导有机酸应用于虾仁加工过程中的抑菌保鲜。【方法】测定副溶血弧菌在生理盐水和新鲜虾仁中经不同浓度有机酸溶液浸泡处理1... 详细信息

【目的】建立醋酸、乳酸和柠檬酸对副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)在生理盐水和虾仁中的灭活动力学模型,指导有机酸应用于虾仁加工过程中的抑菌保鲜。【方法】测定副溶血弧菌在生理盐水和新鲜虾仁中经不同浓度有机酸溶液浸泡处理10min后的存活率P,虾仁中的细菌存活率与有机酸浓度呈良好的线性关系;生理盐水中的存活率通过ln[P/(1-P)]转换成logit(P),与有机酸浓度之间的线性拟合度显著提高。通过拟合方程计算有机酸的50%和90%有效抑菌浓度(EC50和EC90),比较不同有机酸的抑菌能力以及在不同基质中的作用差异。【结果】副溶血弧菌在生理盐水中对有机酸较为敏感,在虾仁中的杀菌效果相对较差,虾仁中乳酸与柠檬酸的有效抑菌浓度(EC50或EC90)是生理盐水中浓度的160-200倍,醋酸的浓度比其在生理盐水中的浓度高出70倍以上,表明食品基质对有机酸的抑菌作用有显著影响,但采用的有机酸在虾仁中的EC90并未超过美国农业部规定的2.5%上限。以有机酸的总摩尔浓度比较,柠檬酸的抑菌能力最强,乳酸次之,醋酸最弱。【结论】抑菌剂效应呈非线性时,细菌存活率进行对数转换,可显著提高线性拟合度R2;食品基质对有机酸的抑菌作用有明显影响;应用浓度为2%的3种有机酸可以有效降低水产品中弧菌的污染量,提高产品的卫生质量。

关键词：虾仁副溶血弧菌有机酸灭活动力学

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单增李斯特菌氧化还原蛋白系统研究进展

微生物学报 2021年第2期61卷 346-356页

作者：韩月叶佳雯程昌勇宋厚辉浙江农林大学动物科技学院动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300

单增李斯特菌是重要的食源性病原微生物,抗氧化应激是李斯特菌生存和致病的关键机制之一。活性氧(reactive oxygen species,ROS)浓度升高会破坏氧化还原平衡,使机体处于氧化胁迫的应激状态,进而导致生物大分子如蛋白质的损伤。蛋白质中... 详细信息

单增李斯特菌是重要的食源性病原微生物,抗氧化应激是李斯特菌生存和致病的关键机制之一。活性氧(reactive oxygen species,ROS)浓度升高会破坏氧化还原平衡,使机体处于氧化胁迫的应激状态,进而导致生物大分子如蛋白质的损伤。蛋白质中半胱氨酸等含硫氨基酸对ROS尤其敏感,半胱氨酸残基脱氢氧化生成二硫键,可以稳定蛋白质空间构象,增加蛋白质的半衰期,进而使蛋白质免受损坏。抗氧化修复通常指的是对半胱氨酸残基的氧化还原过程,即二硫键的形成与打开。硫氧还蛋白家族包含硫氧还蛋白、谷氧还蛋白和Dsb-样蛋白系统,是生物体中常见的氧化还原修复系统。本文根据现有的文献报道,结合本课题组的研究进展,对单增李斯特菌硫氧还蛋白家族进行综述,以期为完善单增李斯特菌硫氧还蛋白调控系统提供参考。

关键词：单增李斯特菌硫氧还蛋白家族硫氧还蛋白谷氧还蛋白 Dsb-样蛋白

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单增李斯特菌耐药外排泵研究进展

微生物学报 2024年第5期64卷 1331-1347页

作者：夏菁罗亚如宋厚辉程昌勇浙江农林大学动物科技学院·动物医学院、浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室、动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心、浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地、中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

单增李斯特菌是一种重要的人兽共患食源性胞内致病菌,广泛存在于自然环境中且易污染动物性食品,人及动物感染后可引起严重的李斯特菌病,死亡率高达30%。单增李斯特菌通常对多种药物敏感,然而,因不合理使用抗菌药或消毒剂形成的选择压力... 详细信息

单增李斯特菌是一种重要的人兽共患食源性胞内致病菌,广泛存在于自然环境中且易污染动物性食品,人及动物感染后可引起严重的李斯特菌病,死亡率高达30%。单增李斯特菌通常对多种药物敏感,然而,因不合理使用抗菌药或消毒剂形成的选择压力导致李斯特菌多重耐药情况的报道日渐增多。外排泵蛋白是细菌中一类重要的蛋白,可参与机体多种生物学过程,包括影响细菌对抗生素敏感性、促进有毒化合物泵出、影响细菌毒力等。本文综述了近年来关于单增李斯特菌耐药外排泵的功能及调控机制的研究进展,为深入理解李斯特菌耐药等环境适应机制及有效控制该病原污染传播和筛选抗感染药物新靶点提供理论基础。

关键词：单增李斯特菌外排泵多重耐药毒力

病原细菌调控丝裂原激活蛋白激酶信号介导先天免疫的机制研究进展

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微生物学通报 2022年第12期49卷 5298-5310页

作者：张念琦何展程昌勇宋厚辉浙江农林大学动物科技学院动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

信号传导途径使细胞能够对复杂的外界环境刺激及时做出反应,从而针对不同病原菌感染产生生物学效应。丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)及其下游靶标作为将环境输入转化为大量细胞程序的最重要信号模块之一,... 详细信息

信号传导途径使细胞能够对复杂的外界环境刺激及时做出反应,从而针对不同病原菌感染产生生物学效应。丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)及其下游靶标作为将环境输入转化为大量细胞程序的最重要信号模块之一,在哺乳动物细胞中最为常见,几乎参与绝大多数细胞的生理和病理反应。MAPK响应各种环境压力刺激,包括细菌感染和炎症,以此调节宿主的免疫反应。近期研究表明,病原菌在感染期间会释放特定效应物或毒素来劫持MAPK通路,劫持方式分为两种,一种是通过降解关键蛋白影响信号传导,更主要的一种是影响宿主细胞翻译后修饰,如磷酸化、泛素化等来调节诸多细胞进程。本文讨论了MAPK在先天免疫中的调节激活过程,并研究病原细菌如何进化出复杂机制来操纵MAPK激活以增强自身感染,以及作为新型抗病原感染和肿瘤免疫治疗靶点的潜在作用。

关键词：丝裂原激活蛋白激酶先天免疫病原感染药物靶点

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细菌金属离子外排系统及金属稳态调控

微生物学报 2024年第3期64卷 672-686页

作者：董欣楠邓思敏宋厚辉徐加利程昌勇浙江农林大学动物科技学院·动物医学院动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

铁、铜、锌、锰等金属离子是各类生物体生存和增殖所必需的微量元素,可影响生物体内蛋白酶活性、免疫反应、生理过程和抗感染机制。细菌感染过程中,宿主可通过限制或提高体内环境中金属离子的浓度来抑制细菌增殖,与此同时,细菌进化出各... 详细信息

铁、铜、锌、锰等金属离子是各类生物体生存和增殖所必需的微量元素,可影响生物体内蛋白酶活性、免疫反应、生理过程和抗感染机制。细菌感染过程中,宿主可通过限制或提高体内环境中金属离子的浓度来抑制细菌增殖,与此同时,细菌进化出各种转运系统以适应宿主体内金属离子水平的变化。由于不同细菌的金属离子外排系统在结构和生化特性上存在变异,它们呈现出独特的金属离子外排模式。本文根据现有文献报道及本团队研究结果,对铁、铜、锌和锰离子的细菌外排系统进行讨论和总结,旨在综述目前对细菌金属离子稳态调控机制研究进展的认识,为深入理解细菌金属稳态调控相关机制提供参考。

关键词：金属离子外排系统细菌感染金属离子稳态调控机制

滋阴益气活血组方对STZ糖尿病模型大鼠糖代谢的影响

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动物医学进展 2010年第11期31卷 47-50页

作者：李静刘德义程昌勇安徽科技学院动物科学学院安徽凤阳233100

为探讨滋阴益气活血组方对链脲佐菌素(STZ)糖尿病大鼠糖代谢的影响,用STZ尾静脉注射45 mg/kg诱导建立糖尿病大鼠模型,将符合糖尿病诊断标准的大鼠,随机分为模型对照组(n=15)和组方治疗组(n=15)。同时设立正常对照组(n=20)。组方治疗组... 详细信息

为探讨滋阴益气活血组方对链脲佐菌素(STZ)糖尿病大鼠糖代谢的影响,用STZ尾静脉注射45 mg/kg诱导建立糖尿病大鼠模型,将符合糖尿病诊断标准的大鼠,随机分为模型对照组(n=15)和组方治疗组(n=15)。同时设立正常对照组(n=20)。组方治疗组灌胃滋阴益气活血组方水煎液10 mL/kg.d,模型对照组和正常对照组灌胃相当剂量的生理盐水,灌胃期为56 d。灌胃第14、28、42、56天眶后静脉丛采血,离心制备血清以测血糖(GLU),第56天测血清糖化血清蛋白(GSP),处死大鼠取肝脏测肝糖原的含量。用组方治疗组水煎液连续灌胃8周后,该组大鼠的体重相对于模型对照组处于上升趋势;第56天时,血糖极显著低于模型对照组(P<0.01),基本接近正常水平;糖化血清蛋白含量极显著低于模型对照组(P<0.01),肝糖原含量极显著高于模型对照组(P<0.01)。滋阴益气活血组方能够改善和纠正糖尿病大鼠糖代谢的异常,对临床研究中药治疗糖尿病具有指导意义。

关键词：糖尿病滋阴益气活血链脲佐菌素血糖肝糖原糖化血清蛋白

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单增李斯特菌内化素家族蛋白的研究进展

中国兽医学报 2021年第6期41卷 1219-1228页

作者：蓝莹陈绵绵程昌勇宋厚辉浙江农林大学动物科技学院动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室浙江杭州311300

单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种革兰阳性病原菌,是食源性李斯特菌病的病原体,在免疫力低下的人和动物中能够引起高死亡率。该菌致病的关键是其能在非吞噬细胞发生内化作用并在其中存活。内化素家族蛋白(internal... 详细信息

单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)是一种革兰阳性病原菌,是食源性李斯特菌病的病原体,在免疫力低下的人和动物中能够引起高死亡率。该菌致病的关键是其能在非吞噬细胞发生内化作用并在其中存活。内化素家族蛋白(internalins)在单增李斯特菌感染过程中起着至关重要的作用,该族蛋白是一组以N端有保守亮氨酸重复区(LRR)和信号肽为特征的蛋白。过去几十年里,内化素家族蛋白促进单增李斯特菌细胞侵袭和感染的分子基础已逐步阐明:细胞壁锚定内化素,如InlA和InlB,决定了单增李斯特菌黏附侵袭的建立;而分泌型内化素,如InlC,能够帮助单增李斯特菌在细胞间迁移,并逃避宿主的先天免疫。本综述中,总结了内化素蛋白促进单增李斯特菌感染的结构基础和生物学功能,这将有利于我们更好地理解食源性细菌胞内感染时内化素家族蛋白致病性的深层机制。

关键词：单增李斯特菌内化素家族蛋白黏附侵袭细胞迁移免疫逃逸胞内感染

斑马鱼胚胎的简易无菌培养体系及单增李斯特菌感染试验

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微生物学报 2016年第11期56卷 1766-1775页

作者：单颖张亦凯程昌勇方春彭金荣方维焕浙江大学动物科学学院浙江大学动物预防医学研究所浙江杭州310058

【目的】斑马鱼的生活环境中微生物众多,会激活其先天免疫系统,从而影响相关试验结果,因此需建立适合于感染与免疫研究的斑马鱼无菌培养体系。【方法】建立了基于受精卵短时消毒和温控正压无菌隔离器的培养流程;根据无菌动物标准对斑马... 详细信息

【目的】斑马鱼的生活环境中微生物众多,会激活其先天免疫系统,从而影响相关试验结果,因此需建立适合于感染与免疫研究的斑马鱼无菌培养体系。【方法】建立了基于受精卵短时消毒和温控正压无菌隔离器的培养流程;根据无菌动物标准对斑马鱼胚胎及其生活环境进行微生物检测;并通过定量PCR检测无菌斑马鱼先天免疫相关基因(TLRs)表达水平;利用无菌斑马鱼胚胎模型进行了单增李斯特菌感染试验。【结果】本研究成功建立了斑马鱼培育的无菌操作系统,无菌检验结果显示其生活环境及体内不含病原微生物,先天免疫分子TLRs表达量较低或不表达,而常规培养斑马鱼以及浸泡感染单增李斯特菌的无菌斑马鱼中这些基因转录水平较高。无菌斑马鱼对单增李斯特菌强毒株EGDe静脉注射感染很敏感,100 CFU感染量能导致鱼在1周内全部死亡,而其mpl或plc B基因缺失株感染后致死率显著下降(分别为70%和40%)。巨噬细胞在亲本株EGDe浸泡感染的鱼肠道周围聚集,而mpl或plc B基因缺失株感染的鱼中几乎观察不到这一聚集现象。【结论】通过简易培养体系获得的无菌斑马鱼胚胎可用于先天免疫和病原感染机制等研究。

关键词：无菌斑马鱼胚胎先天免疫单核细胞增生李斯特菌