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牛结节性皮肤病病毒的控制与预防

特产研究 2024年

作者：程悦宁王振军罗国良冯二凯易立王春霞商金源关继羽吉林大学动物医学学院中国农业科学院特产研究所

牛结节病病毒（Lumpy skin disease virus, LSDV）是一种高度传染性的病毒，主要感染牛和水牛。LSDV属于痘病毒科，是一种双链DNA病毒。LSDV通过蜱虫、蚊子和苍蝇等昆虫叮咬传播。牛被LSDV感染后，表皮和皮下组织出现结节和水肿等病变... 详细信息

牛结节病病毒（Lumpy skin disease virus, LSDV）是一种高度传染性的病毒，主要感染牛和水牛。LSDV属于痘病毒科，是一种双链DNA病毒。LSDV通过蜱虫、蚊子和苍蝇等昆虫叮咬传播。牛被LSDV感染后，表皮和皮下组织出现结节和水肿等病变，因此得名“牛结节病”。该病毒主要影响皮肤，导致皮肤出现结节、水肿、溃疡和溢液等症状。受感染的牛还可能出现发热、食欲减退和乳房炎等全身性症状，导致生产力下降和繁殖问题，对养牛业造成严重的经济损失。目前，已有多种不同类型的疫苗被研发，并显示出良好的免疫效果。疫苗类型包括活疫苗、灭活疫苗和亚单位疫苗等，每种疫苗类型都具有其优势和局限性。也有研究在疫苗递送系统和佐剂的优化方面进行了探索，以提高疫苗的免疫效力和持久性。

关键词：牛结节性皮肤病病毒诊断防控疫苗

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四株水貂肠炎病毒的分离鉴定及遗传进化分析

中国兽医科学 2024年第2期54卷 185-192页

作者：孟祥书陈汉郭杰姚梦凡和彦良陈超阳孙见李丽敏刘聚祥程悦宁王建科河北农业大学动物医学院河北省兽医生物技术创新中心河北保定071000 华威特(江苏)生物制药有限公司江苏泰州225300 中国农业科学院特产研究所吉林长春130112 威海海洋职业学院山东荣成264300

为了调查我国水貂肠炎病毒(mink enteritis virus,MEV)的流行情况,本研究以山东某水貂养殖场疑似发生水貂病毒性肠炎的病貂为材料,对其进行剖检以及病原检测。将PCR检测为MEV阳性的水貂肠道内容物处理后用F81细胞进行病毒分离培养,通过... 详细信息

为了调查我国水貂肠炎病毒(mink enteritis virus,MEV)的流行情况,本研究以山东某水貂养殖场疑似发生水貂病毒性肠炎的病貂为材料,对其进行剖检以及病原检测。将PCR检测为MEV阳性的水貂肠道内容物处理后用F81细胞进行病毒分离培养,通过电镜形态学观察、血清学、分子生物学等方法证实,分离出的4株病毒为MEV毒株,分别将其命名为MEV SD-1、MEV SD-4、MEV SD-5和MEV SD-6。完成了这4株病毒的近全基因组序列测定分析,对分离株之间以及与参考毒株的主要蛋白氨基酸序列进行了同源性比较。结果显示分离株之间VP2和NS1蛋白的氨基酸相似性分别为99.5%~99.7%和99%~99.9%,而分离株与GenBank的32株参考序列之间VP2和NS1蛋白的氨基酸相似性分别为96.5%~99.7%和98.4%~99.6%。本研究结果为进一步开展MEV的流行病学调查、疫苗研制以及诊断方法研究奠定了基础。

关键词：水貂肠炎病毒分离鉴定遗传进化分析

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水貂阿留申病毒核酸标准物质的研制

中国兽医科学 2024年第1期54卷 26-33页

作者：王春霞商金源吴顺闫曼平冯二凯罗国良易立叶京飞赵宗正高华程悦宁王振军中国农业科学院特产研究所吉林长春130122 军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所吉林长春130122 通辽市科尔沁区动物疫病预防控制中心内蒙古通辽028000

为研制均匀、稳定的水貂阿留申病毒(AMDV)核酸标准物质,选择水貂阿留申病毒AMDV-G株接种CRFK细胞进行病毒繁殖,经灭活后,制备水貂阿留申病毒核酸检测标准物质。利用微滴式数字PCR方法对制备的核酸标准物质进行均匀性检验、稳定性评估及... 详细信息

为研制均匀、稳定的水貂阿留申病毒(AMDV)核酸标准物质,选择水貂阿留申病毒AMDV-G株接种CRFK细胞进行病毒繁殖,经灭活后,制备水貂阿留申病毒核酸检测标准物质。利用微滴式数字PCR方法对制备的核酸标准物质进行均匀性检验、稳定性评估及联合8家实验室进行合作定值。均匀性检验结果:F=1.56

关键词：水貂阿留申病毒核酸标准物质微滴式数字PCR

非洲猪瘟病毒p30基因纳米PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2022年第5期52卷 547-553页

作者：魏宇王海璐孙飞雁王楠孙亮程悦宁郭利中国农业科学院特产研究所农业农村部经济动物疫病重点实验室吉林长春130112 吉林农业大学中药材学院吉林长春130118 吉林省动物疫病预防控制中心吉林长春130000

为了建立准确、敏感的早期快速检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的分子生物学方法,根据ASFV中p30蛋白在感染机体中早期表达的特点,设计出1对ASFV中p30基因保守序列的特异性引物,应用纳米PCR建立一种适用于早期检测ASFV的方法,并对其敏感性、特异... 详细信息

为了建立准确、敏感的早期快速检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的分子生物学方法,根据ASFV中p30蛋白在感染机体中早期表达的特点,设计出1对ASFV中p30基因保守序列的特异性引物,应用纳米PCR建立一种适用于早期检测ASFV的方法,并对其敏感性、特异性和临床样品检测进行研究和分析。结果显示:该纳米PCR的最低检出限为2.47×10^(3)copies/μL,而普通PCR的最低检出限为2.47×10^(4)copies/μL,表明纳米PCR的敏感性是普通PCR的10倍;同时,与猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒均未发生交叉反应。此外,分别应用所建立的ASFV p30基因纳米PCR和普通PCR对18份临床样品进行检测,纳米PCR的阳性率为33.33%,普通PCR的阳性率为22.22%。上述结果表明,建立的纳米PCR检测方法可以对早期感染ASFV的病猪进行快速临床检测,具有良好的敏感性和特异性,为非洲猪瘟的诊断和防控提供了一定的技术保障。

关键词：非洲猪瘟病毒 p30基因纳米PCR检测技术早期检测

犬瘟热病毒SY-12株的分离鉴定及其全基因组序列测定与分析

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犬瘟热病毒SY-12株的分离鉴定及其全基因组序列测定与分析

作者：程悦宁吉林农业大学

学位级别：硕士

犬瘟热（Canine distemper, CD）是由犬瘟热病毒（Canine distemper virus, CDV）感染引起的烈性传染病，其高致病性、高死亡率，严重危害我国犬业、毛皮动物养殖业与野生动物保护业。虽然已有犬瘟热的疫苗问世，但是犬瘟热病毒具有易... 详细信息

犬瘟热（Canine distemper, CD）是由犬瘟热病毒（Canine distemper virus, CDV）感染引起的烈性传染病，其高致病性、高死亡率，严重危害我国犬业、毛皮动物养殖业与野生动物保护业。虽然已有犬瘟热的疫苗问世，但是犬瘟热病毒具有易变异的特点，现有的疫苗很难控制犬瘟热的发生，因此开展对新出现的犬瘟热病毒进行遗传变异规律等相关研究对于该病的防治具有十分重要的意义。本研究包括两部分内容：貉源犬瘟热病毒的分离鉴定和该病毒全基因组序列测定与分析。本研究选取来自吉林省松原市某养殖场疑似发生犬瘟热病的貉子的肺脏、肝脏等组织病料，研磨上清接种非洲绿猴肾细胞（Vero）进行病毒的分离。对分离毒株进行了形态学、血清学、动物回归试验鉴定，并用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测发病动物体内组织和感染细胞中的病毒核酸。分离得到的病毒在Vero细胞上可产生明显的细胞病变（CPE），病毒形态学、血清学、动物回归试验、RT-PCR鉴定均为阳性，确定所分离的病毒为犬瘟热病毒，命名为CDV SY-12株。本病毒的分离鉴定有助于我们更深入的了解犬瘟热病毒在貉群体内的流行情况。对貉源CDV SY-12株进行全基因组序列测定与分析，以阐明该毒株的基因遗传变异特征。将SY-12株全基因组分9段，以RT-PCR进行扩增、连接转化并测序，拼接得到CDV SY-12株的全基因组cDNA。用相应生物学软件对SY-12株全基因组序列与其他CDV全基因组序列进行比较，同时以H基因构建系统发育树。结果显示，SY-12株全基因组序列的长度为15690nt，提至GenBank其登录号为KJ466106。与其他毒株进行同源性比较分析，CDV SY-12株基因组与其他毒株的相似性在92.3%～98.8%之间，与CDV PS分离株基因序列同源性最高，相似性高达98.8%，与Onderstepoort疫苗株的同源性最低，相似性为92.3%。基于CDV H基因及H蛋白序列分析结果与全基因分析的结果是一致的。系统发育树表明，所有CDV分离株分为疫苗株和野毒株两簇，CDV SY-12株和CDV PS及MKY-KM08位于同一支，属于亚洲1型。本研究表明基于CDV全基因序列或者CDV H基因序列亦或者是H蛋白氨基酸序列构建的系统发育树结果一致，都能反应出CDV的进化关系。

关键词：貉子犬瘟热病毒分离鉴定基因组测序遗传进化分析

牛病毒性腹泻病毒和牛冠状病毒双重纳米RT-PCR检测方法的建立及应用

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畜牧与兽医 2022年第3期54卷 101-105页

作者：魏宇王海璐孙飞雁郭利程悦宁王全凯吉林农业大学中药材学院吉林长春130112 中国农业科学院特产研究所吉林长春130112

本文建立了一种同时检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛冠状病毒(BCoV)2种病原的双重纳米RT-PCR方法。采用BVDV 5′-UTR基因序列(GenBank登录号:AB040132.1)和BCoV的N基因保守序列(GenBank登录号:KX982264.1)设计出一对BVDV特异性引物和一... 详细信息

本文建立了一种同时检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛冠状病毒(BCoV)2种病原的双重纳米RT-PCR方法。采用BVDV 5′-UTR基因序列(GenBank登录号:AB040132.1)和BCoV的N基因保守序列(GenBank登录号:KX982264.1)设计出一对BVDV特异性引物和一对BCoV的特异性引物,结果表明此方法对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)和牛轮状病毒(BRV)均无交叉反应,特异性良好。同时,应用此方法检测33份腹泻牛的临床样品和25份腹泻鹿的临床样品,结果得出BVDV、BCoV和2种病原混合感染的牛样品阳性率分别为15.15%、36.36%和6.06%。鹿样品感染BVDV、BCoV和2种病原混合感染的阳性率分别为28%、8%和8%。此外,敏感性试验结果为常规RT-PCR敏感性的10倍,最低检出限为1 fg。研究表明,本文建立的该方法快速、灵敏、简捷,具有较强的特异性、敏感性,可适用于大批量临床样品检测,为反刍动物相关病毒性腹泻的诊断和防控提供一定技术支撑。

关键词：牛病毒腹泻病毒牛冠状病毒双重纳米RT-PCR

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北极狐能量代谢的研究进展

特产研究 2023年第2期45卷 149-153页

作者：刘倩钟伟罗国良程悦宁中国农业科学院特产研究所吉林长春130112

本文综述了北极狐消化生理特性,针对其不同生物学时期生长发育规律和代谢能需要量进行归纳总结,同时对影响其能量代谢的主要因素进行分析,旨在为我国北极狐的精细化饲养与饲料配方的精准配制提供理论参考依据。

关键词：北极狐能量调节代谢调控

猫泛白细胞减少症病毒纳米PCR检测方法的建立与初步应用

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中国兽医科学 2022年第8期52卷 946-951页

作者：叶京飞孙飞雁魏宇冯二凯王子贤程悦宁郭利中国农业科学院特产研究所农业部经济动物疫病重点实验室吉林长春130112 吉林农业科技学院吉林吉林132109 吉林农业大学吉林长春130118

为建立一种灵敏且快速检测猫泛白细胞减少症病毒(FPV)的分子检测方法,本研究采用纳米颗粒与普通PCR技术相结合,通过使用Oligo 7设计FPV的特异性引物,建立FPV Nano-PCR分子检测方法,并与普通PCR方法进行对比分析。结果显示,所建立的Nano-... 详细信息

为建立一种灵敏且快速检测猫泛白细胞减少症病毒(FPV)的分子检测方法,本研究采用纳米颗粒与普通PCR技术相结合,通过使用Oligo 7设计FPV的特异性引物,建立FPV Nano-PCR分子检测方法,并与普通PCR方法进行对比分析。结果显示,所建立的Nano-PCR的敏感度是普通PCR的10倍(10 fg/μL);特异性试验表明,Nano-PCR只检测猫泛白细胞减少症病毒时呈阳性反应,而检测猫杯状病毒(FCV)、猫疱疹病毒(FHV)以及F81细胞cDNA/DNA时呈阴性反应。利用两种方法对采集的26份临床病料进行平行检测,发现Nano-PCR与普通PCR阳性率分别为53.84%和42.31%。上述结果表明,所建方法具有敏感性好、特异强、简捷快速等优点,可应用于临床样品的快速检测和鉴定,为猫泛白细胞减少症的早期诊断和防控提供了一定技术保障。

关键词：猫泛白细胞减少症 Nano-PCR 快速检测

牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒及牛支原体三重Nano-PCR方法的建立与初步应用

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中国兽医科学 2022年第12期52卷 1503-1509页

作者：叶京飞孙飞雁赵立峰薛力刚伞智豪郭利程悦宁中国农业科学院特产研究所农业部经济动物疫病重点实验室吉林长春130112 吉林农业科技学院吉林吉林132109

为了同时检测临床上牛常见的三种呼吸道重要病原体,本研究针对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛支原体(MB)保守基因进行引物设计,并成功构建标准阳性质粒。使用纳米金颗粒将普通PCR方法优化,建立了三重Nano-PCR... 详细信息

为了同时检测临床上牛常见的三种呼吸道重要病原体,本研究针对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛支原体(MB)保守基因进行引物设计,并成功构建标准阳性质粒。使用纳米金颗粒将普通PCR方法优化,建立了三重Nano-PCR检测方法。结果显示,三重Nano-PCR检测方法可同时检测出BVDV、IBRV和MB的阳性质粒(1μL)最低检测分别为1 fg、100 ag、10 fg,灵敏度分别为常规PCR的10、10、100倍。临床结果显示,30份采集于临床呼吸道病牛样品中,BVDV、IBRV和MB的Nano-PCR的检测阳性率分别为33.33%、36.67%、33.33%,而普通PCR的检测阳性率分别为26.67%、30%、20%,提示BVDV和IBRV混合感染最多,阳性率可达26.67%。三重Nano-PCR方法特异性良好,检测其他牛呼吸道相关病原体BCV、BPIV3和BRV时结果均呈阴性。本研究建立的快速灵敏且特异良好的三重Nano-PCR检测方法可广泛应用于临床诊断和流行病学筛查。

关键词： Nano-PCR 牛病毒性腹泻病毒牛传染性鼻气管炎病毒牛支原体快速检测