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鸭疫里默氏杆菌九型分泌系统(T9SS)分泌蛋白B739_0093的功能鉴定

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微生物学报 2024年第7期64卷 2407-2418页

作者：江茵罗睿心程安春刘马峰西南动物疫病防控技术教育部工程研究中心四川成都611130 四川省动物疫病防控国际联合研究中心四川成都611130 动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川成都611130 四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心四川成都611130

【目的】鸭疫里默氏杆菌是引起鸭浆膜炎的一种革兰氏阴性病原菌,该菌编码的九型分泌系统(type IX secretion system,T9SS)参与滑动、致病等过程。前期研究结果表明,鸭疫里默氏杆菌CH-1株B739_0093基因在限铁培养条件明显上调。序列分析... 详细信息

【目的】鸭疫里默氏杆菌是引起鸭浆膜炎的一种革兰氏阴性病原菌,该菌编码的九型分泌系统(type IX secretion system,T9SS)参与滑动、致病等过程。前期研究结果表明,鸭疫里默氏杆菌CH-1株B739_0093基因在限铁培养条件明显上调。序列分析表明,B739_0093编码蛋白含有一个T9SS分泌蛋白保守的C端结构域,然而其具体功能未知。本研究旨在鉴定该基因编码蛋白是否被T9SS分泌,以及在该菌致病中的作用。【方法】用荧光定量PCR检测B739_0093是否被铁离子和铁转运调节子(ferric uptake regulator,Fur)调控;用大肠杆菌表达重组B739_0093截短蛋白制备多克隆抗体,通过Western blotting检测是否由T9SS分泌;构建B739_0093基因缺失株,通过毒力和定殖试验鉴定B739_0093在鸭疫里默氏杆菌致病中的功能。【结果】荧光定量PCR结果表明,B739_0093基因在铁离子限制性培养基明显上调,此调控是由调控蛋白Fur介导的;Western blotting结果显示,B739_0093基因编码蛋白在亲本株RA CH-1主要定位在分泌物中,而在T9SS缺失株定位在菌体且不能在分泌物被检测到;与亲本株RA CH-1相比,RA CH-1ΔB739_0093对雏鸭的致病力减弱,在雏鸭各组织器官的定殖能力明显降低。【结论】B739_0093基因编码蛋白是由鸭疫里默氏杆菌T9SS分泌的,其表达受铁离子及Fur调控,并且参与了该菌的致病。

关键词：鸭疫里默氏杆菌九型分泌系统毒力

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鸭疫里默氏杆菌耐药基因传播方式的鉴定及分布

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微生物学报 2024年

作者：杨宇豪姚弈舟朱德康张相德程安春刘马峰西南动物疫病防控技术教育部工程研究中心四川省动物疫病防控国际联合研究中心动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心江苏益客食品集团股份有限公司

【目的】鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer， RA）是一种感染鸭、鹅等禽类的革兰氏阴性病原菌。该菌的临床分离株具有多重耐药性且具有逐年增加的趋势，然而耐药基因在该菌的传播方式未被明确鉴定。本研究旨在鉴定耐药基因在... 详细信息

【目的】鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer， RA）是一种感染鸭、鹅等禽类的革兰氏阴性病原菌。该菌的临床分离株具有多重耐药性且具有逐年增加的趋势，然而耐药基因在该菌的传播方式未被明确鉴定。本研究旨在鉴定耐药基因在鸭疫里默氏杆菌的传播方式，以及这些耐药基因在该菌临床分离株中的分布情况。【方法】测定参考菌株RA ATCC 11845、临床分离株RA CH-1、RA CH-2对10类28种药物的耐药表型；通过基因组分析和基因缺失株的构建鉴定耐药基因；自然转化实验鉴定其耐药基因传播方式；通过PCR检测这些耐药基因在不同临床菌株的分布情况。【结果】耐药检测结果表明，鸭疫里默氏杆菌RA CH-1株、RA CH-2株对β-内酰胺类、四环素类、大环内酯类、林可胺类及酰胺醇类等药物均具有耐药性，而RA ATCC 11845株对以上药物敏感；13个耐药基因分别缺失后对相关药物变的敏感，表明其参与耐药；以上耐药基因均可通过自然转化方式转移至敏感菌株RA ATCC11845；相关耐药基因在2017-2023年分离的100株临床株的检出率最低为3%，最高为89%。【结论】耐药基因在鸭疫里默氏杆菌可通过自然转化的形式进行传播，不同耐药基因在该菌临床分离株中的分布不同，其中tetX1耐药基因携带率最高，blaOXA2耐药基因携带率最低。

关键词：鸭疫里默氏杆菌耐药基因传播方式自然转化

鸭疫里氏杆菌hemH基因功能初步鉴定及其缺失株的转录组学分析

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微生物学报 2023年第8期63卷 3083-3095页

作者：王梦莹刘马峰程安春四川农业大学动物医学院预防兽医研究所四川成都611130 四川农业大学动物医学院禽病防治中心四川成都611130 四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川成都611130

血红素是绝大多数细菌生长繁殖所必需的一种营养物质,其参与了细菌多种重要的生理过程。细菌可以通过自身合成和从外界摄取2种方式获得血红素。然而过多的血红素对细菌是有毒性的,细菌则会利用外排、螯合和降解等多种方式减轻血红素毒... 详细信息

血红素是绝大多数细菌生长繁殖所必需的一种营养物质,其参与了细菌多种重要的生理过程。细菌可以通过自身合成和从外界摄取2种方式获得血红素。然而过多的血红素对细菌是有毒性的,细菌则会利用外排、螯合和降解等多种方式减轻血红素毒性。鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)是一种感染禽类的革兰氏阴性菌,前期研究表明该菌可通过转运的方式从外界环境摄取血红素。然而,是否该菌也可以自身合成血红素未知。基因组分析发现鸭疫里氏杆菌ATCC11845菌株中的基因RA0C_RS08070编码铁螯合酶(ferrochelatase)HemH,是参与将铁插入卟啉中心,形成血红素的关键酶。hem H缺失后会导致铁离子和卟啉的积累,对细菌造成毒性。【目的】为鉴定Hem H在合成血红素中的功能及查找参与鸭疫里氏杆菌铁离子和卟啉解毒相关基因。【方法】本研究构建了RAATCC11845Δhem H缺失株,并检测亲本株和hem H缺失株在GCB以及GCB添加血红蛋白液体培养基中的生长情况;随后对亲本株和hem H缺失株进行转录组测序并进行比较分析。【结果】RAATCC11845Δhem H缺失株不能在GCB培养基中生长,而在GCB培养基补充血红蛋白后生长良好。转录组测序及比较分析发现,与亲本株相比,hem H缺失株中有354个显著差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)。基因本体论(gene ontology,GO)功能富集分析发现差异表达基因主要富集在催化活性、生物调节和代谢过程等途径,京都基因和基因组百科全书(Kyotoencyclopediaofgenesandgenomes,KEGG)通路富集分析发现差异表达基因主要富集在氨基酸代谢、氧化磷酸化和三羧酸循环(tricarboxylic acid cycle,TCA cycle)等途径。【结论】Hem H参与了血红素的合成,hem H缺失后导致大量的基因表达改变来适应代谢的改变,为进一步研究鸭疫里氏杆菌的Hem H的功能奠定基础。

关键词：鸭疫里氏杆菌血红素 hemH

鸭疫里氏杆菌B739_RS00825基因缺失株抗血红素毒性和氧化应激损伤以及定殖能力分析

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微生物学报 2023年第3期63卷 1141-1151页

作者：郭方邱媛媛程安春刘马峰四川农业大学动物医学院预防兽医研究所四川成都611130 四川农业大学动物医学院禽病防治中心四川成都611130 动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川成都611130

【目的】血红素可作为细菌重要的铁离子来源,然而转运过多的血红素也会对细菌造成毒性。细菌通过调节、外排、螯合等多种方式减轻血红素毒性作用。鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)是一种感染鸭及其他禽类的革兰氏阴性病原菌... 详细信息

【目的】血红素可作为细菌重要的铁离子来源,然而转运过多的血红素也会对细菌造成毒性。细菌通过调节、外排、螯合等多种方式减轻血红素毒性作用。鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)是一种感染鸭及其他禽类的革兰氏阴性病原菌。前期研究表明,该菌编码血红素转运系统,且能够从血红蛋白获取血红素,然而该菌是否编码血红素解毒蛋白未知。本研究以编码一氧化氮合成酶的基因B739_RS00825为研究对象,分析其在抗血红素毒性和氧化应激损伤以及定殖能力中的功能。【方法】构建B739_RS00825缺失株,并通过测定生长曲线、细菌存活率、毒力及定殖等试验方法鉴定其在抗血红素毒性、抗氧化应激损伤、宿主致病中的功能。【结果】与RA CH-1相比,RA CH-1ΔB739_RS00825在添加过量血红素的培养基中生长不受影响;然而与RA CH-1Δfur相比,RA CH-1ΔfurΔB739_RS00825在含血红素培养基中的生长明显受到抑制且对H2O2的抵抗力降低;B739_RS00825基因在氧化应激条件下及fur缺失株中明显上调;与RA CH-1相比,RA CH-1ΔB739_RS00825在雏鸭的毒力和定殖能力无明显减弱。【结论】B739_RS00825基因参与了该菌抗血红素毒性和抗氧化应激反应的功能,且受铁摄取调节子(ferric uptake regulator,Fur)调控。然而,B739_RS00825基因并未参与该菌在宿主体内的定殖。

关键词：鸭疫里氏杆菌(RA) 血红素毒性氧化应激

甲型疱疹病毒亚科的疱疹病毒囊膜糖蛋白gC对病毒感染复制的影响

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畜牧兽医学报 2022年第9期53卷 2867-2876页

作者：丰鑫汪铭书程安春四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心成都611130 四川农业大学动物医学院预防兽医研究所成都611130 四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室成都611130

甲型疱疹病毒亚科的疱疹病毒宿主广泛,能感染哺乳类、两栖类和禽类,主要侵害宿主的皮肤、黏膜和神经组织,病毒还会在宿主神经组织潜伏感染,一经感染,难以清除。gC是甲型疱疹病毒亚科的病毒囊膜糖蛋白之一,在病毒感染复制过程中发挥了重... 详细信息

甲型疱疹病毒亚科的疱疹病毒宿主广泛,能感染哺乳类、两栖类和禽类,主要侵害宿主的皮肤、黏膜和神经组织,病毒还会在宿主神经组织潜伏感染,一经感染,难以清除。gC是甲型疱疹病毒亚科的病毒囊膜糖蛋白之一,在病毒感染复制过程中发挥了重要作用。gC与细胞上受体结合帮助病毒吸附至宿主细胞表面、介导低pH条件下病毒入侵上皮细胞、影响病毒基因组的复制。此外,gC帮助病毒逃避补体和抗体的中和,促进病毒的吸附入侵。本文就gC影响病毒感染复制的相关功能进行综述,旨在为研究gC和深入了解甲型疱疹病毒亚科病毒的生命周期,以及gC亚单位疫苗和mRNA疫苗的研究提供参考。

关键词：甲型疱疹病毒亚科 gC 吸附水平传播免疫逃避

革兰氏阴性菌TonB依赖性受体的功能与结构研究进展

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中国生物工程杂志 2022年第4期42卷 93-101页

作者：王娅玲程安春刘马峰四川农业大学动物医学院预防兽医研究所成都611130 四川农业大学动物医学院禽病防治中心成都611130 动物疫病与人类健康四川省重点实验室成都611130

为维持生长所需,革兰氏阴性菌需要从外界摄取多种营养物质。分子量小于600 Da的分子可以通过自由扩散的方式通过革兰氏阴性菌的外膜,而大分子物质则需要特殊的转运系统才能将其转运至革兰氏阴性菌的胞内。革兰氏阴性菌对大分子营养物质... 详细信息

为维持生长所需,革兰氏阴性菌需要从外界摄取多种营养物质。分子量小于600 Da的分子可以通过自由扩散的方式通过革兰氏阴性菌的外膜,而大分子物质则需要特殊的转运系统才能将其转运至革兰氏阴性菌的胞内。革兰氏阴性菌对大分子营养物质的识别和转运主要由TonB依赖性受体负责完成。所有革兰氏阴性菌中均有TonB依赖性受体的存在,然而不同种类的革兰氏阴性菌拥有TonB依赖性受体的数量不同且功能各异。最近研究表明,TonB依赖性受体不仅参与了铁、血红素、锰、锌、镍、维生素、碳水化合物等多种营养物质的摄取,而且参与了蛋白酶的分泌。为对TonB依赖性受体提供更为深入和系统的理解,详细介绍了目前已知的TonB依赖性受体的功能及结构,以期为更进一步探知TonB依赖性受体未知功能提供可参考依据。

关键词：革兰氏阴性菌 TonB依赖性受体功能

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鸭疫里默氏杆菌铁离子代谢机制研究进展

微生物学通报 2022年第12期49卷 5359-5366页

作者：杨宇豪程安春刘马峰四川农业大学动物医学院禽病防治中心四川成都611130 四川农业大学动物医学院预防兽医研究所四川成都611130 动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川成都611130

铁离子是大多数细菌生存所必需的一种营养物质,但过多的铁离子会通过芬顿反应产生的活性氧对细菌造成损伤。因此,细菌通过摄取、调控、螯合、外排等机制维持体内铁离子的稳态。鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer)是一种最新被归... 详细信息

铁离子是大多数细菌生存所必需的一种营养物质,但过多的铁离子会通过芬顿反应产生的活性氧对细菌造成损伤。因此,细菌通过摄取、调控、螯合、外排等机制维持体内铁离子的稳态。鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer)是一种最新被归类于威克斯菌科里氏杆菌属的革兰氏阴性菌。该菌主要感染禽类,参与该菌的铁离子代谢基因具有特别之处。本文对鸭疫里默氏杆菌铁离子代谢机制研究进展进行了系统总结和阐述,包括该菌的TonB系统、TonB依赖性受体、Fur蛋白及Dps蛋白等在铁离子转运、调控、螯合中的功能,以及以上蛋白在鸭疫里默氏杆菌致病中的作用,以期更全面地理解鸭疫里默氏杆菌铁代谢机制,并为进一步深入研究该菌铁离子代谢提供理论依据和参考。

关键词：鸭疫里默氏杆菌铁代谢调控

HSV-1 UL6基因编码门蛋白的结构及功能

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病毒学报 2022年第2期38卷 448-455页

作者：宋迪杨乔汪铭书程安春四川农业大学预防兽医研究所成都611130 四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心成都611130 动物疫病与人类健康四川省重点实验室成都611130

门蛋白在单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的衣壳装配和基因组包装过程中扮演重要角色,对病毒的复制有重要作用。本文就HSV-1 UL6基因编码的门蛋白进行阐述,具体介绍形成门蛋白多聚体的影响因素,门蛋白及其周边蛋白的结构及功能,以及其靶点药物... 详细信息

门蛋白在单纯疱疹病毒1型(HSV-1)的衣壳装配和基因组包装过程中扮演重要角色,对病毒的复制有重要作用。本文就HSV-1 UL6基因编码的门蛋白进行阐述,具体介绍形成门蛋白多聚体的影响因素,门蛋白及其周边蛋白的结构及功能,以及其靶点药物的研究现状等,以期为研究门蛋白在疱疹病毒感染和复制过程中的作用提供一定参考。

关键词： HSV-1 UL6基因门蛋白门蛋白多聚体结构与功能靶向药物

单纯疱疹病毒1型单链结合蛋白ICP8研究进展

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病毒学报 2023年第4期39卷 1172-1180页

作者：张珊珊汪铭书程安春吴英四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心成都611130 四川农业大学预防兽医研究所成都611130 四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室成都611130

在单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus 1,HSV⁃1)中,感染细胞蛋白8(Infected cell protein 8,ICP8)是由UL29基因编码的一种单链DNA结合蛋白(Single strand DNA⁃binding protein,SSBP),该蛋白在病毒复制中必不可缺,具有维持单链DNA的稳定性,并与其他病毒蛋白相互结合,促进病毒复制室的形成,介导晚期基因的表达。除此之外,ICP8还具有促进UL9编码的起源结合蛋白(Origin binding protein,OBP)和UL5/UL8/UL52蛋白的酶活性,与UL12蛋白共同介导链交换等功能。本文就上述目前国内外对HSV⁃1 ICP8的研究进展作一综述,以期为后续研究ICP8的作用机制提供参考。

关键词：单纯疱疹病毒1型(HSV⁃1) ICP8 单链结合蛋白(SSBP)