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柔嫩艾美耳球虫λMzp5-7基因在原核和真核细胞中的表达及其免疫保护性研究

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柔嫩艾美耳球虫λMzp5-7基因在原核和真核细胞中的表达及其免疫保...

作者：秦睿玲中国人民解放军军需大学

学位级别：硕士

鸡球虫病是严重危害养禽业发展的重要疾病之一，而柔嫩艾美耳球虫(***)是其中主要的病原，目前对该病的控制还存在许多问题。λMzp5-7的编码蛋白是艾美耳球虫主要的表面抗原，是人们研究球虫新型疫苗和建立球虫血清学检测方法的侯选抗... 详细信息

鸡球虫病是严重危害养禽业发展的重要疾病之一，而柔嫩艾美耳球虫(***)是其中主要的病原，目前对该病的控制还存在许多问题。λMzp5-7的编码蛋白是艾美耳球虫主要的表面抗原，是人们研究球虫新型疫苗和建立球虫血清学检测方法的侯选抗原之一。本研究应用DNA重组技术将该基因分别克隆入原核和真核表达载体并表达，利用原核表达的融合蛋白为包被抗原建立了检测柔嫩艾美耳球虫的间接ELISA方法，并用重组抗原和真核重组DNA质粒分别免疫动物，观察其诱导产生的特异性免疫应答反应，以及对***攻击的保护作用。λMzp5-7抗原基因的克隆和序列分析根据GENBANK上发表的序列设计上下游引物，从***孢子化10h卵囊中提取RNA，通过RT-PCR技术扩增出编码该保护性抗原基因的cDNA片段，插入到pMD18-T载体中，构建成克隆质粒：pMD-Mzp5-7，转化克隆后进行核苷酸序列测定，并用DNAsis、PROsis软件对序列进行分析。结果为：λMzp5-7基因长度为936bp，为一完整的开放阅读框，编码312个氨基酸，与国外报道的柔嫩艾美耳球虫表面抗原基因λMzp5-7的同源性为98％，氨基酸的同源性为95.6％。λMzp5-7基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达将扩增出的基因片段定向克隆到pET-28b(+)载体上构建成原核表达载体：pET-Mzp5-7，经酶切鉴定后在宿主菌BI＿21(DE3)中表达。结果在1mmol／L IPTG诱导4h后，得到高效表达，产物主要以包涵体形式存在，其表达量占菌体蛋白总量的18％。免疫印迹表明所表达的蛋白能与抗柔嫩艾美耳球虫的多克隆抗体反应。以λMzp5-7基因在***中的表达产物为抗原的间接ELISA检测方法的建立以在***中表达的融合蛋白为包被抗原，以辣根过氧化物酶(HRP)标记的鼠抗鸡IgG为二抗，建立了检测柔嫩艾美耳球虫抗体的间接ELISA方法。最佳反应条件为：1μg／孔纯化的***表达的重组蛋白包被酶标板，用10％胎牛血清进行封闭，以正常***裂解上清液稀释待检血清。结果表明融合蛋白可以作为包被抗原检测柔嫩艾美耳球虫抗体的产生。该法快速，抗原易纯化且成本低。pET-Mzp5-7重组蛋白对鸡柔嫩艾美耳球虫攻击的免疫保护性用柔嫩艾美耳球虫λ MZps－7的重组融合蛋白经不同免疫途径接种免疫雏鸡，观察其诱导的免疫应答反应，以及对球虫的攻击的保护作用。结果是口服工程活菌组可诱导机体的体液免疫和细胞免疫反应，对鸡的增重、盲肠病变记分以及OPG值均有一定的改善（P＜0．05），保护率可达36％。 A MZps－7基因真核表达载体的构建及其在 Hela细胞中的表达将入 Mzps－7基因亚克隆到pVAXI中，构建成真核表达载体。pVAXI－Mzps－7。该重组质粒转染Hela细胞后， RI”－PCR检测到M印5－7基因在Hela细胞内进行了转录，免疫印迹法检测到特异蛋白。 pVAX IMZps－7重组质粒对鸡柔嫩艾美耳球虫的免疫保护性作用将 pVAX IMZps－7 质粒分别经滴鼻和肌注接种鸡并进行攻虫试验，首次对其诱导的系统免疫进行了检测。结果表明重组质粒免疫雏鸡，均能诱导有效的细胞免疫和体液免疫反应。CD4＋／CDS十比率、特异性抗体滴度等免疫指标均显著高于对照组（P＜0刀5）。且能够诱导鸡体对抗中等剂量的球虫的攻击，试验组和对照组相比，攻虫后卵囊排出量和排出时间缩短，体重增长较快，盲肠病变较小（P＜005），保护率均高达80％以上。其中以肌注100 p g组保护效果最好。

关键词：柔嫩艾美耳球虫 λ Mzp5-7基因原核及真核表达免疫

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中西医结合治疗奶牛真胃右方变位

畜牧与兽医 2006年第12期38卷 63-64页

作者：徐占云秦睿玲河北北方学院动科院河北宣化075131

随着奶牛饲养数量的不断增长,真胃右方变位的发病率也在增加,该病的治疗比较困难.本文仅就近几年我们采用中西结合治疗奶牛真胃右方变位的情况介绍如下.

关键词：右方变位真胃奶牛饲养病牛振水音中西医结合冷痛胃俞穴助消化药复合维生素

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鸡球虫病疫苗研究进展

养禽与禽病防治 2005年第10期 10-11页

作者：徐占云秦睿玲河北北方学院动医系宣化沙岭子075131

鸡球虫病是由艾美耳属(Eimeria)的原虫引起的严重危害养禽业发展的重要疾病之一,遍及世界各地.据报道,全世界每年由鸡球虫病造成的经济损失高达20亿美元.而我国是养鸡大国,占世界总养鸡量的1/10,每年由鸡球虫病造成的直接和间接经济损... 详细信息

鸡球虫病是由艾美耳属(Eimeria)的原虫引起的严重危害养禽业发展的重要疾病之一,遍及世界各地.据报道,全世界每年由鸡球虫病造成的经济损失高达20亿美元.而我国是养鸡大国,占世界总养鸡量的1/10,每年由鸡球虫病造成的直接和间接经济损失难以估算.随着球虫耐药性的继续增加以及研究新药费用的巨大,使得药物防治鸡球虫病举步维艰,同时药物残留问题也日益引起人们的重视,这些都迫使人们将目光转向免疫预防.

关键词：鸡球虫病间接经济损失疫苗药物防治免疫预防艾美耳属残留问题养禽业世界

张家口地区奶牛美丽筒线虫流行病学调查、防治与形态学研究

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黑龙江畜牧兽医 2013年第3期 103-105,169页

作者：徐占云秦睿玲马淑娟河北北方学院动物科技学院河北张家口075131

为了找到有效的防治美丽筒线虫的方法,试验采用粪便虫卵检查法以及宰后牛体虫体检查法确定张家口地区奶牛美丽筒线虫的感染情况,并对几种防治方法进行了筛选。结果表明:张家口地区奶牛美丽筒线虫的感染率为29.8%,8月份感染率最高;金伊... 详细信息

为了找到有效的防治美丽筒线虫的方法,试验采用粪便虫卵检查法以及宰后牛体虫体检查法确定张家口地区奶牛美丽筒线虫的感染情况,并对几种防治方法进行了筛选。结果表明:张家口地区奶牛美丽筒线虫的感染率为29.8%,8月份感染率最高;金伊维脉冲式给药可有效地治疗奶牛美丽筒线虫病。

关键词：奶牛美丽筒线虫流行病学调查形态学防治

荷斯坦奶牛产后高发真胃变位与血浆孕酮及电解质水平的关系

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畜牧与兽医 2010年第5期42卷 80-82页

作者：秦睿玲徐占云张煜河北北方学院动物医学系河北张家口075131

通过对真胃变位及产前产后奶牛血浆孕酮、电解质水平的变化研究,探讨此病产后高发可能的病因和发病机理。结果表明:真胃变位奶牛产后发病率较高可能与分娩造成产后血清孕酮水平突然降低,使得分娩后奶牛出现低血钾的现象有直接关系。

关键词：奶牛真胃变位血浆孕酮电解质

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不同免疫策略对鸡球虫病的免疫效果

中国兽医杂志 2008年第4期44卷 36-37页

作者：秦睿玲徐占云张西臣吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 河北北方学院动物医学系河北宣化075131

球虫病(Coccidiosis)是由艾美耳属(Eimeria)的单细胞寄生原虫引起的严重危害养禽业发展的重要疾病之一,遍及世界各地,其中柔嫩艾美耳球虫(***)是最常见的病原.据报道(1992),全世界每年由鸡球虫病造成的经济损失高达20亿美元.但药物防治... 详细信息

球虫病(Coccidiosis)是由艾美耳属(Eimeria)的单细胞寄生原虫引起的严重危害养禽业发展的重要疾病之一,遍及世界各地,其中柔嫩艾美耳球虫(***)是最常见的病原.据报道(1992),全世界每年由鸡球虫病造成的经济损失高达20亿美元.但药物防治和球虫活苗的使用又存在诸多问题,迫使人们寻找新的免疫预防方法.本研究应用DNA重组技术克隆了λMzp5-7基因,同时构建原核和真核表达载体并表达,利用原核表达的融合蛋白和真核重组质粒免疫动物,观察不同的免疫策略诱导的免疫反应,为球虫病的防治研究奠定基础.

关键词：鸡球虫病免疫效果免疫策略真核表达载体柔嫩艾美耳球虫 DNA重组技术药物防治原核表达

兽医专业学位研究生教学案例建设及设计——以奶牛流产病防治案例为例

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河北北方学院学报（社会科学版） 2022年第4期38卷 74-76页

作者：徐占云秦睿玲杜冬华王鹏河北北方学院动物科技学院河北张家口075000

案例建设及案例教学是教育教学改革的趋势。以奶牛流产病防治案例的建设为例,对其建设的价值及意义、建设设计原则、案例的撰写、案例具体呈现方式及使用进行了探索及实践,取得了良好效果。该案例的建设可以为相关课程提供有益借鉴。

关键词：兽医专业学位研究生教学案例建设设计奶牛流产病

柔嫩艾美球虫重组质粒pVAX1-Mzp57的免疫保护性试验

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2004年第6期22卷 334-337页

作者：秦睿玲张西臣李建华徐占云尹继刚杨举解放军军需大学军事兽医系军事预防兽医学教研室长春130062 河北北方学院动物医学系宣化075131

目的　用柔嫩艾美球虫 (Eimeriatenella ,E .t)子孢子表面蛋白基因构建的DNA重组质粒免疫海兰小公雏 ,观察其诱导鸡产生的免疫应答反应和对球虫攻击的保护作用。　方法　重组质粒经肌肉和鼻黏膜分别于 7、14、2 8日龄3次接种小公雏 ,用... 详细信息

目的　用柔嫩艾美球虫 (Eimeriatenella ,E .t)子孢子表面蛋白基因构建的DNA重组质粒免疫海兰小公雏 ,观察其诱导鸡产生的免疫应答反应和对球虫攻击的保护作用。　方法　重组质粒经肌肉和鼻黏膜分别于 7、14、2 8日龄3次接种小公雏 ,用间接ELISA、流式细胞仪检测免疫反应。最后一次免疫后 2周经口接种新鲜的E .t孢子化卵囊 ,确定其保护力的大小。　结果　构建的柔嫩艾美球虫重组质粒免疫雏鸡后能诱导有效的细胞免疫和体液免疫 ,表现为CD4+ /CD8+ T细胞比率、特异性抗体滴度明显高于对照组 (P <0 .0 5 )。可对抗中等剂量球虫的攻击 ,试验组和对照组相比 ,攻虫后卵囊排出量显著减少 ,体重增长快 ,盲肠病变较小 ,保护率达 80 %以上。肌注 10 0 μg重组质粒组综合免疫保护效果最好。　结论　构建的重组质粒对鸡柔嫩艾美球虫的攻击有较好的免疫保护作用。

关键词：重组质粒对照组诱导免疫保护性 CD4^+/CD8^+ 免疫后中等剂量柔嫩艾美球虫公雏卵囊

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犊牛重症中暑的诊断与治疗

黑龙江畜牧兽医 2006年第9期 88-89页

作者：徐占云秦睿玲张兆琴河北北方学院动物科技学院河北宣化075131

中暑是日射病、热射病及热痉挛的统称.日射病是由于在炎热季节,牛的头部受到强烈日光的直接照射时,引起脑及脑膜充血和脑实质的急性病变,导致中枢神经系统机能严重障碍.热射病是由于在炎热季节潮湿闷热的环境中,机体产热多,散热少,体内... 详细信息

中暑是日射病、热射病及热痉挛的统称.日射病是由于在炎热季节,牛的头部受到强烈日光的直接照射时,引起脑及脑膜充血和脑实质的急性病变,导致中枢神经系统机能严重障碍.热射病是由于在炎热季节潮湿闷热的环境中,机体产热多,散热少,体内积热,引起严重的中枢神经系统的功能紊乱现象;有的病例水盐损失过多,可引起肌肉痉挛性收缩叫热痉挛.炎热夏季,持续高温,犊牛极易中暑,死亡率也较高.2005年,河北北方学院动物科技学院动物医院共收治中暑重症犊牛16例,现将诊治情况报道如下.

关键词：中暑犊牛中枢神经系统动物科技学院治疗诊断肌肉痉挛炎热季节