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重组人促红素理化对照品的质量评价

药物分析杂志 2017年第6期37卷 1117-1126页

作者：李响陶磊韩春梅范文红秦玺周勇饶春明中国食品药品检定研究院北京100050

目的:建立重组人促红细胞生成素的理化对照品的质量标准,对8家企业的促红素理化对照品进行质量评价。方法:用正常小鼠网织红细胞计数法测定体内生物学活性,使用LC-MS绘制质量肽图谱。色谱条件:采用BEH300 C4色谱柱(2.1 mm×50 mm,3.5μ... 详细信息

目的:建立重组人促红细胞生成素的理化对照品的质量标准,对8家企业的促红素理化对照品进行质量评价。方法:用正常小鼠网织红细胞计数法测定体内生物学活性,使用LC-MS绘制质量肽图谱。色谱条件:采用BEH300 C4色谱柱(2.1 mm×50 mm,3.5μm),流动相为水(A)-乙腈(B)-1%甲酸水溶液(C),梯度洗脱(0~60 min,1%B→60%B,10%C;60~61 min,60%B→90%B,10%C;61~75 min,90%B→1%B,10%C),流速0.2 m L·min^(-1),柱温为40℃,样品保存温度为10℃,上样量5μL;质谱条件:MSE模式采集数据,毛细管电压3 000 V,Cone电压40 V,去溶剂气体温度350℃,源温120℃,去溶剂气体流速800 L·h-1,扫描范围m/z 50~2 000。确证一级结构,二硫键链接方式及糖基化位点;绘制N糖图谱,分析寡糖结构;用毛细管区带电泳分析异构体。采用压力进样3.45 k Pa;进样时间10 s,分离电压15.4 k V,分离时间80 min,检测波长214 nm。其余检测项目按中国药典2015年版三部方法进行。结果:建立的方法适合促红素理化对照品的检测,各样品的氨基酸序列均与理论一致;二硫键连接方式均为Cys7-Cys161、Cys29-Cys33;O-糖基化位点均为Ser126,N-糖基化位点均为Asn24、Asn38、Asn83;各样品的糖基修饰方式存在差异,不同糖型的相对比例不一致。等电聚焦结果为5~8条电荷异构体条带,不同样品的电荷异构体的组成比例有所差异,蛋白质含量、体内比活性、电泳纯度、液相纯度、等电聚焦、唾液酸含量、N端氨基酸序列、肽图结果均符合拟定的理化对照品质量标准。结论:建立了理化对照品的质量标准,不同企业的理化对照品质量总体稳定一致,但糖基化水平存在一定差异,分析比较了不同企业的促红素理化对照品在生物比活性,糖基化,异构体分布、电荷异质性等方面的差异。

关键词：重组人促红素理化对照品一级结构确证异构体分析质量标准质量评价

三氟乙酸及甲酸体系下重组人促红素液质肽图的比较

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中国生物制品学杂志 2018年第1期31卷 9-13页

作者：陶磊韩春梅李响秦玺周勇饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的探讨流动相中添加三氟乙酸(trifluoroacetic acid,TFA)或甲酸(formic acid,FA)时,重组人促红素(erythropoietin,EPO)液质肽图中各肽段的保留时间、峰面积及离子化效率的差异。方法将重组人EPO样品进行酶切,分别在含0.1%TFA及0.1%FA... 详细信息

目的探讨流动相中添加三氟乙酸(trifluoroacetic acid,TFA)或甲酸(formic acid,FA)时,重组人促红素(erythropoietin,EPO)液质肽图中各肽段的保留时间、峰面积及离子化效率的差异。方法将重组人EPO样品进行酶切,分别在含0.1%TFA及0.1%FA的流动相体系下测定液质肽图。通过分析质谱数据对各色谱峰进行定性,记录并计算各肽段的保留时间、峰面积及质谱信号强度。结果两种添加剂体系下,各肽段的保留时间存在差异,大部分肽段的保留时间变化在1 min左右,个别肽段超过2 min;TFA体系下各肽段的峰面积相对较小,约为FA体系下的84%;FA体系下各肽段离子化效率较高,信号强度一般为TFA体系的6倍,个别肽段高达10倍以上。结论两种体系下重组人EPO的液质肽图存在较大差异,应根据实验目的选择合适的流动相添加物。

关键词：三氟乙酸甲酸重组人促红素液质肽图

CGE-LIF方法分析重组腺相关病毒(rAAV)衣壳蛋白的比例含量

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药物分析杂志 2023年第11期43卷 1833-1839页

作者：李响高铁史新昌陈泓序唐红梅秦玺周勇中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050 SCIEX中国北京100015

目的:建立毛细管凝胶电泳串联激光诱导荧光检测器(CGE-LIF)方法分析重组腺相关病毒(rAAV)衣壳蛋白VP1、VP2和VP3比例含量并进行方法学验证。方法:CGE-LIF分析rAAV衣壳蛋白方法为:rAAV样品加入4%SDS-150 mmol·L^(-1)NEM的溶液预变性(70... 详细信息

目的:建立毛细管凝胶电泳串联激光诱导荧光检测器(CGE-LIF)方法分析重组腺相关病毒(rAAV)衣壳蛋白VP1、VP2和VP3比例含量并进行方法学验证。方法:CGE-LIF分析rAAV衣壳蛋白方法为:rAAV样品加入4%SDS-150 mmol·L^(-1)NEM的溶液预变性(70℃,5 min);再加入P503染料标记(70℃,10 min);再加入1%SDS进行变性(70℃,5 min),然后混匀上机检测。方法验证包括准确性、精密度、线性、检测限、定量限,耐用性等。另外考察了P503、TAMRA、FQ 3种染料条件及rAAV不同血清型和部分批间一致性。结果:CGE-LIF分析不同血清型rAAV(包括2、5、8、9、10型)可将其衣壳蛋白VP1、VP2和VP3基线分离并且峰形尖锐。准确性显示衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的实测结果与预期结果的相关系数r>0.99;重复性结果显示每个衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的迁移时间RSD均<1.5%,校正峰面积百分比的RSD均<5%;中间精密度结果显示衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的迁移时间RSD均<1.5%,校正峰面积百分比RSD均<5%;线性结果显示在0.6×10^(12)~3.0×10^(12)vg·mL^(-1)范围内与衣壳蛋白校正峰面积线性关系良好;VP3检测限和定量限分别为7.2×10^(10)vg·mL^(-1)和2.2×10^(11)vg·mL^(-1)。用3种不同染料(P503、FQ和TAMRA)进行CGE-LIF检测,结果良好。该方法的批间稳定结果较为理想。结论:建立了rAAV衣壳蛋白CGE-LIF分析方法,所建方法可以对rAAV产品3种衣壳蛋白进行分离和相对定量。

关键词：毛细管凝胶电泳重组腺相关病毒(rAAV) 衣壳蛋白 LIF检测器比例含量

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重组人促红素的异构体比例及体内比活性分析

中国生物制品学杂志 2018年第8期31卷 841-845页

作者：李响史新昌范文红秦玺周勇饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的分析12家企业生产的重组人促红素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)的异构体比例及体内比活性。方法用全柱成像毛细管等电聚焦电泳检测12家企业的rhEPO原液的异构体,按《中国药典》三部(2015版)方法测定rhEPO原液的体内比活... 详细信息

目的分析12家企业生产的重组人促红素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)的异构体比例及体内比活性。方法用全柱成像毛细管等电聚焦电泳检测12家企业的rhEPO原液的异构体,按《中国药典》三部(2015版)方法测定rhEPO原液的体内比活性,同时采用多元回归及聚类分析等统计学方法分析各企业间rhEPO的相似性。结果按等电点区分并定义各异构体,在等电点3.6~5.1范围内,依次定义为异构体1~9。不同生产企业的rhEPO具有不同的异构体构成特征,主要异构体峰有5~8个,其中异构体4~7占比较高。各生产企业rhEPO原液的体内比活性相近,约为1.0×10~5 IU/mg。拟合获得九元多元回归线性方程S=0.00 P_1+3.18 P_2+1.71 P_3+1.21 P_4+0.98 P_5+0.93 P_6+1.16 P_7+0.66 P_8+0.00 P_9(S代表总体内比活性,S_i代表各类异构体体内比活性,P_i代表各类异构体的比例,体内比活性的单位为1.0×10~5 IU/mg),R^2=0.914 0。12个生产企业的rhEPO比较相近,其中厂家2和8最为相似。结论12个生产企业的rhEPO具有不同的异构体构成特征,体内比活性约为1.0×10~5 IU/mg,且各企业制品间比较相似。

关键词：重组人促红素异构体比活性多元回归

人参不定根调节NLRP3炎症小体通路改善心肌缺血损伤作用

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中草药 2024年第12期55卷 4065-4074页

作者：王秦玺曲雪峰谢泽眯陈一豪卓胜男吴月金王茵杭州医学院药学院(食品科学与工程学院) 浙江杭州310013

目的探讨人参不定根对心肌缺血(myocardial ischemia,MI)诱导的心肌细胞凋亡和心肌纤维化的影响及作用机制。方法采用高效液相色谱法和电感耦合等离子体质谱法检测人参不定根的主要成分。雄性C57BL/6小鼠sc异丙肾上腺素建立心肌缺血模型... 详细信息

目的探讨人参不定根对心肌缺血(myocardial ischemia,MI)诱导的心肌细胞凋亡和心肌纤维化的影响及作用机制。方法采用高效液相色谱法和电感耦合等离子体质谱法检测人参不定根的主要成分。雄性C57BL/6小鼠sc异丙肾上腺素建立心肌缺血模型,心电图用于心肌缺血的诊断;采用苏木素-伊红(HE)染色和Masson染色评估心脏组织病理变化;ELISA检测血清中炎症因子水平;qRT-PCR和Western blotting检测心脏组织凋亡、纤维化和核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor pyrin domain containing 3,NLRP3)炎症小体、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)相关因子表达。结果人参不定根能明显缓解心肌缺血导致的心肌形态的病理变化,减少心肌纤维化面积,改善ST段抬高,抑制过度炎症。此外,人参不定根能明显抑制转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、NF-κB和NLRP3炎症小体通路相关蛋白的表达水平(P<0.05、0.01、0.001)。结论人参不定根可通过抑制TGF-β1、NF-κB通路和NLRP3炎症小体的激活,缓解心肌缺血诱发的损伤。人参不定根具有缓解心肌缺血损伤的潜力。

关键词：心肌缺血人参不定根核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 核因子-κB 转化生长因子-β1 凋亡纤维化

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重组人C1酯酶抑制剂中聚合物含量的测定

药物分析杂志 2018年第11期38卷 1917-1921页

作者：韩春梅姚文荣丁有学于雷陶磊秦玺饶春明中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定及其标准化重点实验室北京100050

目的:建立分析重组人C1酯酶抑制剂(rh C1INH)中聚合物含量的分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)方法。方法:rh C1INH稀释后,采用TSK GEL3000SW色谱柱,214 nm检测波长对其聚合物进行检测,以250 mmol·L^(-1)磷酸缓冲液(p H 6.8)为流动相,流... 详细信息

目的:建立分析重组人C1酯酶抑制剂(rh C1INH)中聚合物含量的分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)方法。方法:rh C1INH稀释后,采用TSK GEL3000SW色谱柱,214 nm检测波长对其聚合物进行检测,以250 mmol·L^(-1)磷酸缓冲液(p H 6.8)为流动相,流速0.5 mL·min^(-1)进行洗脱。结果:在25.0～85.0μg·m L^(-1)浓度范围内,rh C1INH标准品的峰面积与浓度的线性关系良好(R^2平均值为0.997)。rh C1INH样品中分离到3个聚合物峰,采用面积归一法计算6次进样的聚合物的平均含量分别为0.11%、0.15%和0.60%,RSD分别为10.7%、9.0%和3.9%。4批次rh C1INH样品中总聚合物的含量分别为0.82%、1.01%、0.97%和0.92%。结论:SEC-HPLC方法适用于rh C1INH中聚合物的检测,为其聚合物质量标准的建立和产品评价奠定了基础。

关键词：重组人C1酯酶抑制剂(rhC1INH) 分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC) 聚合物含量质量控制生物技术药物

重组人表皮生长因子与其衍生物功能和结构对比分析

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中国生物制品学杂志 2018年第7期31卷 732-736页

作者：刘兰韩春梅于雷秦玺史新昌饶春明中国食品药品检定研究院重组药物室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室北京100050

目的对比分析重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rh EGF)与重组人表皮生长因子衍生物(rhEGF derivative,rhEGFd)的比活性和结构。方法采用《中国药典》三部(2015版)通则中3T3细胞/MTT显色法检测rhEGF和rhEGFd的生物学活性,新建的凝胶色谱法检测成品中主药蛋白质含量。计算比活性并分析结构与功能的关系。结果 rhEGFd的比活性明显高于rhEGF(P<0.05),约为rhEGF的1.48倍。结论对比分析了rhEGF和rhEGFd的比活性和结构,为其质量标准的完善提供了支持。

关键词：重组人表皮生长因子重组人表皮生长因子衍生物生物学活性蛋白质含量比活性分子结构

浅谈规范化的科研档案管理在医院科研管理中的作用

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中华医学科研管理杂志 2017年第6期30卷 464-466页

作者：王晓倩汤庆丰秦玺张烨殷佩浩上海市普陀区中心医院科研科 200062

目的通过了解科研档案管理在医院科研管理中的作用，进而促进医院管理研究的发展，同时提高科研水平的质量。方法文献研究法和经验法相结合。结果科研档案作为科研活动的过程性资料，记载了科研活动的进程发展和成果产出。规范和完善的... 详细信息

目的通过了解科研档案管理在医院科研管理中的作用，进而促进医院管理研究的发展，同时提高科研水平的质量。方法文献研究法和经验法相结合。结果科研档案作为科研活动的过程性资料，记载了科研活动的进程发展和成果产出。规范和完善的科研管理档案可以使科研工作更具有科学性，并且可以提高科研工作的效率、了解科室科研情况、并使科研成果转化等工作顺利进行。结论科研实力是衡量一个医院核心竞争力的重要指标之一，也是医院持续发展的动力。医院科研管理中科研档案管理是不可或缺的重要组成部分，记录了医院科研活动的过程、成果等信息。

关键词：科研档案管理作用

柱前衍生反相高效液相色谱法测定猴免疫缺陷病毒基因治疗产品中盐酸组氨酸含量

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中国生物制品学杂志 2014年第9期27卷 1202-1206页

作者：秦玺李响杨琦于雷付志浩李永红饶春明中国食品药品检定研究院北京100050

目的建立柱前衍生反相高效液相色谱法（reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC）测定猴免疫缺陷病毒（simian immunodeficiency virus,SIV）基因治疗产品中盐酸组氨酸含量的方法。方法以正亮氨酸为内标,异硫氰... 详细信息

目的建立柱前衍生反相高效液相色谱法（reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC）测定猴免疫缺陷病毒（simian immunodeficiency virus,SIV）基因治疗产品中盐酸组氨酸含量的方法。方法以正亮氨酸为内标,异硫氰酸苯酯（phenyl isothiocyanate,PITC）为柱前衍生化试剂,采用ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,以醋酸钠缓冲液（pH 6.5）和80%乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长254 nm,进样量10μl,流速1.0 ml/min。用建立的方法检测样品中盐酸组氨酸含量,绘制标准曲线,并验证该方法的精密度、稳定性、专属性和准确性。结果盐酸组氨酸在12.54-31.35μg范围内,进样量与峰面积呈良好的线性关系（r2=0.999 9）;3份供试品溶液,每份连续进样5次,盐酸组氨酸峰面积平均RSD值为1.77%;同1份供试品溶液0、3、6、12 h进样,盐酸组氨酸峰面积平均RSD值为1.03%;该方法可将甘氨酸、精氨酸和丝氨酸对照品有效分离;高、中、低浓度样品的平均回收率分别为103.37%、102.28%和102.91%。SIV基因治疗产品中盐酸组氨酸3次检测的平均含量为9.66 mg/ml。结论建立了柱前衍生RP-HPLC检测SIV基因治疗产品中盐酸组氨酸含量的方法,该方法重现性好,专属性强,精密度及准确度高,可对基因治疗产品中的盐酸组氨酸进行质量控制。

关键词：柱前衍生化反相高效液相层析组氨酸盐酸盐