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P2Y14基因敲除小鼠的构建及免疫功能初探

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现代免疫学 2022年第6期42卷 466-473页

作者：卢秉霖秦居亮车安然钱春梅岑玉蓉杜冰王秦安徽理工大学医学院淮南232001 华东师范大学生命科学学院上海200241 上海市奉贤区中心医院肾脏风湿科上海201406

为探讨嘌呤能受体P2Y, G蛋白偶联,14 (purinergic receptor P2Y, G-protein coupled, 14, P2Y14)在免疫和炎症反应中的作用,采用CRISPR/Cas9技术构建P2Y14基因敲除(P2Y14 knockout,P2Y14 KO)小鼠,采用PCR和测序方法鉴定子代小鼠的基因型,评估小鼠的生长发育状况;FACS检测小鼠胸腺和脾脏T、B细胞及其亚群的百分比;实时荧光定量PCR法和ELISA检测LPS作用下野生型(wild type, WT)组和P2Y14KO组小鼠腹腔渗出巨噬细胞(peritoneal exudative macrophage, PEM)炎症相关因子的mRNA和蛋白水平变化。结果显示,该方法成功构建得P2Y14 KO小鼠;与WT小鼠相比,P2Y14 KO小鼠的体质量以及肝、脾、肾脏质量和组织形态结构无明显差异,但胸腺质量显著增加(P<0.01),胸腺CD3~+、CD8~+T细胞百分比显著增加(P<0.05,P<0.01),脾脏淋巴细胞及其亚群无明显差异。LPS刺激条件下,P2Y14 KO小鼠PEM中炎性因子IL-6和趋化因子CCL2在mRNA和蛋白水平上与WT小鼠相比显著降低(有P<0.01,P<0.001)。以上结果表明,该研究成功构建了P2Y14KO小鼠并发现该基因缺失可促进胸腺中T细胞的分化和发育,同时显著减少PEM炎性因子的释放。

关键词：嘌呤能受体P2Y G蛋白偶联 14基因基因敲除 CRISPR/Cas9 免疫反应炎性因子

嘌呤类受体P2X7在阿尔兹海默症中的作用研究

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嘌呤类受体P2X7在阿尔兹海默症中的作用研究

第九届全国免疫学学术大会

作者：李金鞠秦居亮程大龙高良才杜冰钱旻华东师范大学生命科学学院

研究背景:阿尔茨海默症(AD)是一种中枢神经系统退行性疾病,其中10%左右患者属于家族性AD,而β-淀粉样前体蛋白基因(APP)以及早老素基因(Presenilin,Ps)的突变是导致家族性AD最主要的原因之一。早老素基因的表达失调被证明能在多种动物... 详细信息

研究背景:阿尔茨海默症(AD)是一种中枢神经系统退行性疾病,其中10%左右患者属于家族性AD,而β-淀粉样前体蛋白基因(APP)以及早老素基因(Presenilin,Ps)的突变是导致家族性AD最主要的原因之一。早老素基因的表达失调被证明能在多种动物模型中引起严重的神经退行性病变和全身性炎症等。但至今Ps基因与AD的关系及其作用的分子机理尚不清楚。目的:本研究着重探索嘌呤类受体P2X7参与的炎症反应在PS2相关AD中的作用。方法与结果:利用Aβ的毒性片段Aβ25-35、LPS以及两者联合注射小鼠(同窝出生的PS2基因敲除鼠和野生型基因鼠)双侧侧脑室的方式建立AD小鼠模型,以假手术和侧脑室注射脑脊液作为对照。采用水迷宫实验来评价小鼠空间学习记忆能力,实验发现三种注射方式的实验组小鼠与对照组相比其认知能力和记忆能力都出现下降,而PS2基因敲除鼠表现出来的损伤更为严重。脑切片尼氏染色结果显示,实验组小鼠海马部位的尼氏小体明显减少,说明其神经细胞出现损伤。脑切片的免疫组化结果显示,AD模型小鼠的皮层和海马出现小胶质细胞和星形胶质细胞增生现象。利用ELISA方法检测了小鼠脑匀浆蛋白和血清炎症因子,发现IL-1α,IL-1β,TNFα,IL-6较对照组都有明显升高,而PS2基因敲除鼠的炎症因子略高于野生型基因鼠。另外,采用免疫组化技术发现PS2基因敲除小鼠的皮层和海马中P2X7受体表达升高,并与神经细胞和小胶质细胞存在明显的共定位。分离小鼠的原代小胶质细胞,采用Aβ、LPS以及两者联合刺激下,PS2敲除鼠的原代小胶质细胞表达的IL-1α、IL-1β、CCL2、TNFα、IL-6等在转录水平和蛋白水平均高于野生型小鼠,并且此现象可以被P2X7受体的特异性抑制剂oATP抑制,说明P2X7参与了该过程的调控。于是本研究通过在小鼠侧脑室注射Aβ和LPS的同时注射P2X7受体的特异性抑制剂oATP或BBG。水迷宫实验结果表明,oATP和BBG能够减轻Aβ与LPS对小鼠空间学习记忆能力的损伤。结论:PS2基因缺失使小鼠在Aβ和LPS的刺激下表现出更弱的空间学习记忆能力,而该过程是通过PS2基因缺失上调嘌呤类受体P2X7而引起更加强烈的炎症引起的,抑制P2X7能够减弱AD症状。因此,本研究为治疗阿尔兹海默症提供了新的思路。

关键词： PS2基因阿尔茨海默症 P2X7 炎症反应

P2X7受体通过调控肿瘤微环境中的巨噬细胞促进肺癌的发生发展

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P2X7受体通过调控肿瘤微环境中的巨噬细胞促进肺癌的发生发展

第十二届全国免疫学学术大会

作者：秦居亮张晓雨张振谭炳合任华杜冰钱旻华东师范大学生命科学学院华东师范大学生命医学研究所

巨噬细胞是肿瘤微环境中浸润最丰富的免疫细胞,而肿瘤相关巨噬细胞(TAM)在促进肿瘤的发生发展以及转移方面扮演着重要的角色。然而在肺癌中,启动巨噬细胞极化以及产生免疫抑制作用的机制并不十分清楚。我们通过Q-PCR、流式细胞术技术等... 详细信息

巨噬细胞是肿瘤微环境中浸润最丰富的免疫细胞,而肿瘤相关巨噬细胞(TAM)在促进肿瘤的发生发展以及转移方面扮演着重要的角色。然而在肺癌中,启动巨噬细胞极化以及产生免疫抑制作用的机制并不十分清楚。我们通过Q-PCR、流式细胞术技术等对巨噬细胞的极化进行检测,以探讨离子通道受体P2X7在启动巨噬细胞极化以及对肿瘤微环境的调节作用。结果表明P2X7受体在TAM中呈现高表达现象,而敲除P2X7受体可以显著降低巨噬细胞向M2型的极化。在动物水平上,敲除或者抑制P2X7受体可以明显抑制小鼠皮下肿瘤的大小以及乌拉坦诱导的肺癌模型。进一步的,我们使用P2X7受体抑制剂O-ATP和化疗药物联用,发现可以更显著的抑制肿瘤的生长。这些实验研究揭示巨噬细胞中的P2X7受体可以作为一个新的治疗靶点用于肺癌的免疫治疗。

关键词：肿瘤相关巨噬细胞 P2X7 肺癌肿瘤微环境

P2X7对巨噬细胞介导的肿瘤免疫微环境的调控研究

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P2X7对巨噬细胞介导的肿瘤免疫微环境的调控研究

第十三届全国免疫学学术大会

作者：秦居亮张苏张晓雨张振谭炳合任华钱旻杜冰华东师范大学生命科学学院上海市调控生物学重点实验室华东师范大学-奉贤区中心医院转化医学联合研究中心

背景:肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)是肿瘤组织中浸润最为丰富的一类免疫细胞,其在促进肿瘤的生长、转移方面扮演着重要的角色,因此开展对于TAMs功能调控的研究具有十分重要的意义。ATP作为胞外危险信号核苷酸家族中最重要的成员在抗菌、抗病... 详细信息

背景:肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)是肿瘤组织中浸润最为丰富的一类免疫细胞,其在促进肿瘤的生长、转移方面扮演着重要的角色,因此开展对于TAMs功能调控的研究具有十分重要的意义。ATP作为胞外危险信号核苷酸家族中最重要的成员在抗菌、抗病毒感染等疾病中发挥着重要作用,已有的研究发现损伤或者凋亡的肿瘤细胞会大量分泌胞外ATP作为"Find me"信号分子,但对于ATP对肿瘤免疫微环境尤其是TAMs的调控功能和机制却鲜有报道。目的 :探讨肿瘤免疫微环境中胞外ATP通过其受体P2X7调控TAMs的功能及分子机制,并探讨其作为肿瘤免疫治疗靶标的潜在价值。方法 :首先结合肺腺癌组织芯片和肿瘤数据库的分析,利用免疫荧光、Q-PCR检测P2X7在肿瘤组织及TAMs中的表达。然后提取野生型及P2X7基因敲除小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMMs),并利用LPS、IFN-γ、IL-4和肿瘤细胞上清对其进行诱导,通过Q-PCR和流式细胞术对BMMs极化的标志性基因进行检测和评价。同时构建皮下移植瘤、原位和自发性肺癌小鼠模型,并对体内的肿瘤和TAMs进行分析和功能检测。最后利用Western blot对P2X7参与调控巨噬细胞极化的分子机制进行研究,并利用其抑制剂O-ATP以及联合临床化疗药物对肺癌小鼠进行治疗。结果 :实验显示P2X7高表达于人和小鼠的TAMs,将其敲除或者抑制显著下调Arg1、CD206等M2型巨噬细胞标志基因的表达,抑制巨噬细胞向M2型极化;在P2X7敲除小鼠体内,乌拉坦诱导的肺癌和皮下移植肿瘤受到明显抑制,并且M2型巨噬细胞比例显著减少;P2X7的缺失减弱TAMs对肿瘤细胞增殖、血管生成的促进,并同时提高CD8+T细胞的抗肿瘤活性;Westernblot显示P2X7的缺失通过下调Stat6的磷酸化水平和IRF4的表达水平而抑制巨噬细胞向M2型极化;治疗实验表明O-ATP可以协同促进化疗药物抗肿瘤作用,获得更显著的治疗效果。结论 :高表达于TAMs的P2X7能够显著提高TAMs向促肿瘤的M2型巨噬细胞极化,对P2X7信号通路的阻断可以显著抑制肺癌的发生、发展,有望发展成为重要的肿瘤免疫治疗药物靶标。

关键词： P2X7 TAMs 肿瘤微环境肺癌免疫治疗

胞外ADP及其受体对巨噬细胞介导的抗菌免疫功能的调控作用和机制研究

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第十届全国免疫学学术大会

作者：张晓雨邹军燕钱雅敏秦居亮任华杜冰钱旻, 华东师范大学生命科学学院

背景:近年来的研究发现,核苷酸作为一种危险信号分子对激活巨噬细胞、调节炎症具有十分重要的作用。而对胞外核苷酸ADP在细菌感染过程中的功能及作用机制尚未有详细报道。方法 :为此本课题首先建立了小鼠体内、外的细菌感染模型,并对细... 详细信息

背景:近年来的研究发现,核苷酸作为一种危险信号分子对激活巨噬细胞、调节炎症具有十分重要的作用。而对胞外核苷酸ADP在细菌感染过程中的功能及作用机制尚未有详细报道。方法 :为此本课题首先建立了小鼠体内、外的细菌感染模型,并对细菌感染过程中胞外ADP的释放、受

关键词： ADP 嘌呤受体巨噬细胞 MCP-1 细胞迁移

绿色技术创新对城市碳减排影响的区域差异和收敛性——来自地级市层面的经验证据

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财经理论与实践 2024年第1期45卷 97-103页

作者：田虹秦喜亮吉林大学商学与管理学院吉林长春130012

运用我国299个城市的面板数据构建空间杜宾模型,实证研究绿色技术创新对城市碳排放影响的区域差异性和收敛性。结果表明:我国绿色技术创新可以降低碳排放水平,且存在空间关联效应。横向来看,不同区域的绿色技术创新对碳排放的影响具有... 详细信息

运用我国299个城市的面板数据构建空间杜宾模型,实证研究绿色技术创新对城市碳排放影响的区域差异性和收敛性。结果表明:我国绿色技术创新可以降低碳排放水平,且存在空间关联效应。横向来看,不同区域的绿色技术创新对碳排放的影响具有明显的区域差异性,东部、长三角、珠三角等经济发达地区的影响效应更强,中西部、京津冀等地区相对较弱。纵向来看,2015年以来绿色技术创新对碳排放影响的区域差异持续收敛,根源在于区域经济发展差距的缩小。未来持续推进绿色技术创新、缩小区域发展差距是实现“双碳”目标的必由之路。

关键词：绿色技术创新碳减排区域收敛性空间杜宾模型

数字技术背景下企业知识扩散模型构建及仿真研究——基于信息生态视角

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情报科学 2024年第3期42卷 174-182页

作者：秦喜亮田虹吉林大学商学与管理学院吉林长春130022

【目的/意义】揭示企业知识扩散过程和影响因素,提升企业知识存量,实现企业知识资源的优化配置。【方法/过程】分析企业知识扩散机理,基于信息生态理论构建企业知识扩散模型,通过仿真对其各发展阶段进行演化分析,探索企业知识扩散过程... 详细信息

【目的/意义】揭示企业知识扩散过程和影响因素,提升企业知识存量,实现企业知识资源的优化配置。【方法/过程】分析企业知识扩散机理,基于信息生态理论构建企业知识扩散模型,通过仿真对其各发展阶段进行演化分析,探索企业知识扩散过程和影响因素。【结果/结论】不同阶段知识扩散影响因素影响程度不同。初始期数字技术对知识扩散效率的影响最大,其次为知识异质性、吸收能力和扩散意愿。成长期和成熟期影响程度最大的为知识异质性,其次为吸收能力,扩散意愿和数字技术影响程度最小。应根据企业发展的阶段性特征制定相应的策略以更好地实现知识扩散。【创新/局限】本文仅从理论上探讨企业知识扩散模型并利用Networkx软件进行仿真,未利用真实的专利数据进行验证。

关键词：数字赋能数字技术信息生态系统知识扩散仿真研究

基于灰色DEMATEL-ANP的杀伤链效能评估模型研究

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系统仿真学报 2024年

作者：赵泽靖尚军亮秦焰培曲阜师范大学计算机学院山东米捷软件有限公司

杀伤链在现代战争作战中具有重要地位，是以系统思维理解、调度和执行作战行动的一种重要工具。合理评估杀伤链效能对于准确把握战局发展，合理调配作战资源具有关键作用。然而，现有的杀伤链效能评估依赖的指标体系相对孤立和分散，且... 详细信息

杀伤链在现代战争作战中具有重要地位，是以系统思维理解、调度和执行作战行动的一种重要工具。合理评估杀伤链效能对于准确把握战局发展，合理调配作战资源具有关键作用。然而，现有的杀伤链效能评估依赖的指标体系相对孤立和分散，且评估中往往忽视了杀伤链各环节间的关联性和影响。针对以上问题，结合杀伤链各阶段特点和OODA理论，提出了一套新型效能评估指标体系；此外，将灰色理论融入DEMATEL-ANP方法中，建立了一种效能评估方法。将作战仿真实验采集的数据应用到效能评估中表明，所设计的杀伤链效能评估指标和方法合理有效，提高了杀伤链效能评估的科学性和可靠性，对于军事领域决策者在战略规划、战术分析和作战资源调配等方面具有重要参考意义。

关键词：杀伤链体系效能评估作战仿真灰色理论决策实验室法网络分析法

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偷身高的男孩

风流一代 2024年第11期 12-13页

作者：秦萤亮不详

在世界上的某座城市里,有个矮个子男孩。上幼儿园时,他总是够不到架子上的积木。上了小学,他也要费很大劲来擦黑板。排队和合影的时候,他总是站在最前面。在班里,谁也不把他说的话当回事,就因为他个子矮。“小个子……嗯……也蛮可爱的... 详细信息

在世界上的某座城市里,有个矮个子男孩。上幼儿园时,他总是够不到架子上的积木。上了小学,他也要费很大劲来擦黑板。排队和合影的时候,他总是站在最前面。在班里,谁也不把他说的话当回事,就因为他个子矮。“小个子……嗯……也蛮可爱的。”“将来说不定还能长高一些。”“小个子懂什么?”从小到大,这些话他都听腻了。他觉得自己非常不幸。

关键词：擦黑板幼儿园小个子男孩矮个子小学