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拟石莲花属‘碧桃’腐烂病病原菌的鉴定及其主要致病物质的测定

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湖南农业大学学报（自然科学版） 2024年第2期50卷 65-70页

作者：刘爽张廷萍薛治峰刘杨王婧钱亚新秦世雯云南大学资源植物研究院云南昆明650500 西北农林科技大学植物保护学院陕西杨凌712100

采用组织分离法和单孢子纯化法,从拟石莲花属多肉植物品种‘碧桃’(Echeveria cv.‘Peach Pride’)疑似腐烂病的叶片组织获得病原菌,通过形态学和分子序列特征的鉴定以及致病性测定,明确病原菌为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。测定... 详细信息

采用组织分离法和单孢子纯化法,从拟石莲花属多肉植物品种‘碧桃’(Echeveria cv.‘Peach Pride’)疑似腐烂病的叶片组织获得病原菌,通过形态学和分子序列特征的鉴定以及致病性测定,明确病原菌为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。测定尖孢镰刀菌的主要致病物质,发现该病原菌具有较强的细胞壁降解酶活性,并具有一定的产毒素(镰刀菌酸)能力,说明细胞壁降解酶类和毒素是该病原菌侵入、定殖和致病的主要因素。

关键词：拟石莲花属多肉植物腐烂病尖孢镰刀菌细胞壁降解酶镰刀菌酸

不同多年生稻品种内生细菌群落多样性比较分析

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生物技术通报 2024年第5期40卷 225-236页

作者：孔德婷齐笑含刘兴蕾李丽萍胡凤益黄立钰秦世雯云南大学农学院农业农村部多年生稻生物学与种质创新重点实验室昆明650500

【目的】为了解多年生稻内生细菌微生态的结构和潜在功能,探究多年生稻内生细菌与寄主优良性状的关系。【方法】通过16S rRNA扩增子测序技术比较分析了不同多年生稻品种(PR23、PR25和PR107)内生细菌多样性、物种组成和代谢功能。【结果... 详细信息

【目的】为了解多年生稻内生细菌微生态的结构和潜在功能,探究多年生稻内生细菌与寄主优良性状的关系。【方法】通过16S rRNA扩增子测序技术比较分析了不同多年生稻品种(PR23、PR25和PR107)内生细菌多样性、物种组成和代谢功能。【结果】不同基因型的多年生稻具有不同的内生细菌群落,三者β多样性存在显著差异。多年生稻地下和地上部组织分化形成了不同的内生细菌群落,其地下部内生细菌主要由变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)等组成,而地上部内生细菌主要由变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)等组成。不同多年生稻内生细菌特有扩增子序列变体(amplicon sequence variants,ASVs)数量较多,且具有不同的优势内生细菌属和生物标记物种类。多年生稻内生细菌的代谢功能主要为生物合成、生物降解与利用、解毒、代谢产物前体和能量的产生、甘氨酸途径、大分子修饰和代谢簇。品种间内生细菌的差异代谢功能主要涉及酯类、醇类、糖类等物质的生物合成和降解。【结论】寄主基因型和组织分化影响了多年生稻内生细菌的群落结构、物种组成和代谢功能。

关键词：多年生稻内生细菌群落结构 16S rRNA测序

香蕉枯萎病菌自噬基因Atg7的致病功能研究

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香蕉枯萎病菌自噬基因Atg7的致病功能研究

中国植物病理学会2023年学术年会

作者：唐锐薛治峰张廷萍秦世雯云南大学农学院资源植物研究院

香蕉枯萎病由尖孢镰孢菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f.***.cubense,Foc)引起的真菌维管束病害,在全球香蕉产区均有发生,严重危害香蕉产业发展。Foc致病1号小种(Foc1)侵染粉蕉(ABB)和龙牙蕉(AAB)等品种,而致病4号小种(Foc4)能侵染绝... 详细信息

香蕉枯萎病由尖孢镰孢菌古巴专化型(Fusarium oxysporum f.***.cubense,Foc)引起的真菌维管束病害,在全球香蕉产区均有发生,严重危害香蕉产业发展。Foc致病1号小种(Foc1)侵染粉蕉(ABB)和龙牙蕉(AAB)等品种,而致病4号小种(Foc4)能侵染绝大多数香蕉品种,包括抗Foc1的主栽Cavendish (AAA)品种。已有研究表明,侵染Cavendish香蕉时,孢子萌发和菌丝生长的差异是造成两者致病性差异的主要原因。而细胞自噬是调控植物病原真菌分生孢子萌发和菌丝生长的重要细胞过程,因此推测其与Foc致病性分化密切相关。本研究通过分析Foc降解香蕉细胞壁的转录组发现,自噬基因Atg7在Foc1突破巴西蕉细胞壁防御时被显著抑制,而在Foc1降解粉蕉细胞壁时以及Foc4降解2种细胞壁时均正常表达。本研究对Foc1-Atg7进行了过表达以及对Foc4-Atg7进行敲除发现,氮饥饿诱导后,过表达菌株Foc1-OEAtg7的自噬小体的数量显著多于野生型Foc1,而敲除突变体Foc4-ΔAtg7未观察到自噬小体或自噬溶酶体,验证了Atg7是Foc自噬体形成的重要基因。相较于野生型Foc1,Foc1-OEAtg7对粉蕉的定殖能力和致病力显著增强,且能造成巴西蕉致病。Foc4-ΔAtg7对巴西蕉的致病力显著降低,而互补菌株Foc4-ΔAtg7::ATG7和野生型Foc4致病力无显著差异。Foc1-OEAtg7菌株在3种氮源(KNO、甘氨酸和尿嘧啶)和9种碳源(果糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、甘油、Tween 80、果胶、羧甲基纤维素钠和木聚糖)环境下,生长较野生型Foc1快;Foc4-ΔAtg7在2种氮源(KNO和甘氨酸)和6种碳源(麦芽糖、甘露醇、甘油、Tween80、果胶和羧甲基纤维素钠)环境下,生长较互补菌株Foc4-ΔAtg7::ATG7和野生型Foc4慢。另外,过表达Atg7未能提高Foc1抵御渗透胁迫、氧化胁迫和细胞壁抑制剂的能力,但缺失Atg7却造成Foc4对渗透胁迫、氧化胁迫和细胞壁抑制剂的抗性降低。以上结果说明,细胞自噬对Foc致病性有显著影响,其中Atg7是造成香蕉枯萎病菌2个小种致病性分化的自噬基因,深入研究该基因的致病分子机制,将为Foc寄主专化性研究提供新的视角,并为香蕉枯萎病的防治提供新的杀菌剂靶标位点。

关键词：香蕉枯萎病菌生理小种寄主专化性自噬基因

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多肉植物‘静夜’黑腐病的病原菌鉴定

植物病理学报 2023年第5期53卷 981-985页

作者：薛治峰张树竹孔德婷李梦杰周忠寒秦世雯云南大学农学院/资源植物研究院昆明650000 云南大学生命科学学院昆明650000

0引言多肉植物是深受全球消费者喜爱的观赏植物,具有品种多样、形态小巧、耐旱、易繁殖等特点。多肉植物在栽培过程中易受黑腐病、白粉病、锈病和炭疽病等病害的侵害[1]。其中,黑腐病引起叶片和茎部黑腐,导致植株枯萎,严重影响多肉植物... 详细信息

0引言多肉植物是深受全球消费者喜爱的观赏植物,具有品种多样、形态小巧、耐旱、易繁殖等特点。多肉植物在栽培过程中易受黑腐病、白粉病、锈病和炭疽病等病害的侵害[1]。其中,黑腐病引起叶片和茎部黑腐,导致植株枯萎,严重影响多肉植物的观赏和经济价值[2]。已有研究发现,多种真菌在不同多肉植物上能引起相似的黑腐症状。

关键词：多肉植物黑腐病病原菌鉴定白粉病全球消费者观赏植物炭疽病锈病

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多肉植物春桃玉属绫耀玉枯萎病的病原菌鉴定

多肉植物春桃玉属绫耀玉枯萎病的病原菌鉴定

中国植物病理学会2023年学术年会

作者：刘爽薛治峰唐锐张廷萍秦世雯云南大学农学院资源植物研究院

绫耀玉(Dinteranthus vanzylii)是番杏科(Aizoaceae)春桃玉属(Dinteranthus)的多肉植物品种,近年来深受消费者喜爱。该品种原产于南非,外形似元宝,具有1～2对灰粉色肉质叶,叶部表面具有红色线条状斑点。2021年9月,笔者在福建宁德一多肉... 详细信息

绫耀玉(Dinteranthus vanzylii)是番杏科(Aizoaceae)春桃玉属(Dinteranthus)的多肉植物品种,近年来深受消费者喜爱。该品种原产于南非,外形似元宝,具有1～2对灰粉色肉质叶,叶部表面具有红色线条状斑点。2021年9月,笔者在福建宁德一多肉植物商业大棚中发现约7%的绫耀玉盆栽出现了叶部枯萎症状。本研究采用组织分离法和单胞分离法从患病植株叶部获得了20株真菌菌株。根据其在PDA培养基上的菌落形态分为两种类型:①白色菌落,气生菌丝丰富且产淡紫色色素;②白色菌落,气生菌丝丰富但不产色素。对2种菌落类型的代表菌株KMDV1和KMDV2进行孢子形态鉴定发现,2个菌株能够产生3种孢子类型:卵圆形的小分生孢子、3～4个分隔的镰刀状大分生孢子以及圆形厚壁的厚垣孢子。对2种菌株的ITS、EF1-α和β-tubulin基因序列进行PCR扩增和测序后提交至GenBank数据库(ITS序列号为OP897707和OP897714;EF1-α序列号为OP910243和OP910244;β-tubulin序列号为OP910245和OP910246)。经过同源比对发现,2个菌株的ITS、EF1-α和β-tubulin序列相似性分别为99.25%、99.24%和98.37%。在NCBI数据库进行Blastn比对发现,以上序列分别与多个尖孢镰孢菌Fusarium oxysporum菌株(GenBank序列号为MK790100、MN788643、KU738441、LN828039、MK682460和MK682429)的相似性达99.02%～99.81%。构建3个序列串联发育树发现,2个菌株与F.oxysporum聚在同一枝,而与不同种的Fusarium处在不同分枝。以上结果说明,KMDV1和KMDV2菌株为F.oxysporum。通过灌根接种法发现,KMDV1和KMDV2菌株接种绫耀玉15d后均出现叶片枯萎症状,与大棚症状一致,而清水处理的植株无任何症状。通过形态学和分子序列鉴定发现,从发病植株中获得的重分离菌株分别与KMDV1和KMDV2菌株特征一致,而对照植株未分离出F.oxysporum。本研究是F.oxysporum引起绫耀玉枯萎病的首次报道。目前番杏科植物病害报道尚少,本研究将为番杏科植物的真菌病害的诊断和防控提供病原信息。

关键词：多肉植物春桃玉属绫耀玉枯萎病尖孢镰孢菌

香蕉枯萎病菌2个生理小种PL基因真核表达载体的构建与表达

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2012年第4期40卷 102-106页

作者：董章勇秦世雯王振中仲恺农业工程学院植物保护系广东广州510225 华南农业大学资源环境学院植物病理生理学研究室广东广州510642

【目的】构建香蕉枯萎病菌1号小种(FOC1)和4号小种(FOC4)果胶裂解酶(Pectate lyases,PL)基因的真核表达载体,并进行诱导表达,为进一步研究PL在病原菌致病过程中的作用奠定基础。【方法】将质粒pMD18-pl-foc1、pMD18-pl-foc4和真核表达... 详细信息

【目的】构建香蕉枯萎病菌1号小种(FOC1)和4号小种(FOC4)果胶裂解酶(Pectate lyases,PL)基因的真核表达载体,并进行诱导表达,为进一步研究PL在病原菌致病过程中的作用奠定基础。【方法】将质粒pMD18-pl-foc1、pMD18-pl-foc4和真核表达穿梭载体pPICZαA进行EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切反应,回收目的片段连接,转化至DH5α进行筛选扩繁,对菌落进行PCR鉴定后抽提质粒进行PCR和EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切鉴定。将阳性载体线性化后电击转化毕赤酵母SMD1168感受态细胞,用甲醇进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析。【结果】成功构建了FOC1和FOC4 PL基因的真核表达载体pPICZαA-pl-foc1和pPICZαA-pl-foc4,经甲醇诱导表达后分别获得了重组的PL蛋白,其分子质量约为23.4ku。【结论】FOC1和FOC4 2个香蕉枯萎病菌小种的PL基因在酵母中得到了成功表达。

关键词：香蕉枯萎病香蕉枯萎病菌果胶裂解酶载体构建真核表达

哈萨克斯坦酵母FJY-3菌株对草莓灰霉病的生防效果

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哈萨克斯坦酵母FJY-3菌株对草莓灰霉病的生防效果

中国植物病理学会2023年学术年会

作者：孔德婷张树竹何飞飞索玉凯秦世雯云南大学农学院资源植物研究院云南民族大学民族医药学院民族药资源化学国家民委-教育部重点实验室

拮抗酵母菌是果实采后病害的优势生防菌株,该类真菌营养需求简单,并且在发酵过程不易产生毒素和抗生素,对人体安全。目前拮抗酵母菌主要应用在灰霉病和青霉病的生物防治中,其生防效果可达60%以上。灰霉病是由灰葡萄孢(Botrytis cinerea... 详细信息

拮抗酵母菌是果实采后病害的优势生防菌株,该类真菌营养需求简单,并且在发酵过程不易产生毒素和抗生素,对人体安全。目前拮抗酵母菌主要应用在灰霉病和青霉病的生物防治中,其生防效果可达60%以上。灰霉病是由灰葡萄孢(Botrytis cinerea)引起的一种气传采后病害,寄主范围广泛,造成多种经济和园艺作物损失。本研究利用16S rRNA扩增子测序技术,发现云南咖啡果内生真菌中富含多种酵母菌,优势属包括哈萨克斯坦酵母(Kazachstania)、维希尼克氏酵母(Vishniacozyma)、毕赤酵母(Pichia)、隐球酵母(Cryptococcus)、汉纳酵母(Hannnaella)、白冬孢酵母(Leucosporidium)和威克汉姆酵母(Wickerhamomyces)。通过组织分离法、平板对峙法和双皿倒扣法筛选发现,采集自普洱市小粒咖啡果实的内生哈萨克斯坦酵母Kazachstania humilis FJY-3菌株及其挥发性物质对灰霉病菌的菌丝生长抑制率分别为83.61%和57.89%。以上结果说明FJY-3菌株及其抗菌物质对灰霉病菌具有良好的抑菌效果。通过生防效果测定发现,不同浓度的FJY-3菌株(10～10 cells/mL)浸泡后草莓果实病斑大小分别为5 mm、1.5 mm、1 mm、1 mm,而对照病斑大小为16 mm,说明FJY-3菌株对草莓灰霉病具有显著生防效果(68.75%、90.63%、93.75%和93.75%)。其中,浓度范围在10～10cells/mL的FJY-3菌株对草莓灰霉病的生防效果达90%以上。通过对草莓果实品质检测发现,FJY-3菌株对草莓果实的硬度、可滴定酸含量、可溶性固形物含量、维生素C含量等指标没有造成显著影响。本研究后续将开展哈萨克斯坦酵母FJY-3菌株对草莓灰霉病的生防机制研究,明确其抗菌物质,为其生防制剂的开发奠定理论基础。

关键词：咖啡内生酵母哈萨克斯坦酵母草莓灰霉病生物防治

云南大理洱海流域古生片区水稻病害发生情况及防治建议

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云南大理洱海流域古生片区水稻病害发生情况及防治建议

中国植物病理学会2023年学术年会

作者：谭丹杜雪丽康锁倩张顺涛秦世雯徐玖亮云南大学农学院资源植物研究院中国农业大学资源与环境学院华中农业大学资源与环境学院

水稻(Oryza sativa)是云南省大理白族自治州洱海流域古生片区最重要的粮食作物之一,也是当地农民的重要经济来源。该片区为一季稻种植区,水稻种植面积达7 398亩以上,主要分布在甸中村、古生村、向阳溪村、和乐村和河矣江村。由于种植技... 详细信息

水稻(Oryza sativa)是云南省大理白族自治州洱海流域古生片区最重要的粮食作物之一,也是当地农民的重要经济来源。该片区为一季稻种植区,水稻种植面积达7 398亩以上,主要分布在甸中村、古生村、向阳溪村、和乐村和河矣江村。由于种植技术参差不齐、栽培管理粗放等问题,导致该地水稻病害多发,水稻产量损失较重。为制定适宜当地水稻病害防治的方案,2021—2022年笔者对古生片区水稻病害进行了调查,并提出了符合洱海保护政策和绿色水稻生产的病害管理建议。经调查发现,胡麻叶斑病、白叶枯病、稻瘟病为该片区的主要病害,干尖线虫为次要病害。胡麻叶斑病始发期为5月下旬,盛发期为6—7月,发病率为32.01%。白叶枯病始发于7月下旬,盛发期在抽穗期至蜡熟期,最高发病率达19.77%。稻瘟病和白叶枯在齐穗期后混合发生,稻瘟病盛发于乳熟期,发病率为22.22%。干尖线虫病始发于6月中旬,盛发于6月下旬,发病率为6.21%。另外,7月下旬,抽穗期间恰逢雨季,约有10.08%的谷粒出现褐色病变,导致褐粒。结合以上调查结果,提出了古生村水稻整个生育期的病害防治方案,具体如下:育苗期使用5%阿维菌素浸种,避免干尖线虫病的种传;移栽时间需提前或者延迟10d,避免抽穗期与夏季雨季相遇;苗期需根据秧苗素质合理追施钾肥,加快植株的健壮挺拔,预防胡麻叶斑病;抽穗期前施用40%稻瘟灵和40%噻唑锌进行稻瘟病和白叶枯病的防治,随后视病情在抽穗至灌浆期进行多轮补药。另外根据水稻植株生长情况,适当少施氮肥,避免白叶枯病情的加重。本防治方案旨在协调古生片区水稻生产"产量-质量-洱海保护"三者的关系,为当地水稻生产效益的提高提供参考。

关键词：水稻洱海流域病情调查防治建议

香蕉枯萎病菌1号和4号生理小种细胞壁降解酶的比较

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植物病理学报 2010年第5期40卷 463-468页

作者：董章勇王琪秦世雯王振中华南农业大学植物病理生理学研究室广州510642

对香蕉枯萎病菌1号和4号生理小种的细胞壁降解酶进行比较。通过测定4号生理小种在寄主体内细胞壁降解酶的活性发现,能检测到多聚半乳糖醛酸酶(PG)、果胶甲基半乳糖醛酸酶(PMG)、多聚半乳糖醛酸反式消除酶(PGTE)、果胶甲基反式消除酶(PM... 详细信息

对香蕉枯萎病菌1号和4号生理小种的细胞壁降解酶进行比较。通过测定4号生理小种在寄主体内细胞壁降解酶的活性发现,能检测到多聚半乳糖醛酸酶(PG)、果胶甲基半乳糖醛酸酶(PMG)、多聚半乳糖醛酸反式消除酶(PGTE)、果胶甲基反式消除酶(PMTE)和纤维素酶(Cx)的活性。在不同碳源培养条件下,2个生理小种均有以上5种酶的活性,以1%柑桔果胶为碳源时产生的PMG和PG活性明显高于其他几种酶的活性,而以1%CMC为碳源时,所产生的Cx都比其他几种酶的活性高。细胞壁降解酶同工酶电泳后发现,4号生理小种在寄主体内和体外培养时都比1号生理小种多分泌一种PG。2个生理小种在体外培养时分泌的PMG、PGTE和PMTE没有差异。4号生理小种在寄主体内比1号生理小种多分泌一种PMG,却少分泌一种PGTE,2个生理小种在寄主体内的PMTE则没有差异。

关键词：香蕉香蕉枯萎病香蕉枯萎病菌细胞壁降解酶