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shRNA慢病毒质粒的构建技巧

中国生物工程杂志 2011年第3期31卷 124-127页

作者：秦俊文谢琪璇蔡冬青秋山泰身井上纯一郎暨南大学生殖免疫研究所广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室再生医学香港中文大学-暨南大学联合实验室科技部及广东省科技厅国际科技合作基地广州510632 东京大学医科学研究所分子发癌分野东京108-8639

携带shRNA慢病毒质粒的慢病毒宿主范围广,能感染分裂期与非分裂期细胞,转染效率高,shRNA在宿主细胞中能高效、长期稳定地表达,因此shRNA慢病毒载体正被越来越广泛地应用于RNAi研究和疾病治疗中。

关键词： shRNA 慢病毒载体质粒宿主细胞宿主范围转染效率 RNAi 分裂

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中枢免疫耐受缺损模型的构建

免疫学杂志 2012年第2期28卷 152-156页

作者：谢琪璇叶绍恩蒋启荣秋山泰身井上纯一郎秦俊文暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所广州510632 暨南大学生命科学技术学院再生医学教育部重点实验室广东省动物防疫监督总所广州510230 东京大学医科学研究所分子发癌分野东京108-8639

目的构建基于shRNA介导的中枢免疫耐受缺损模型。方法分离妊娠后13.5 d的胎鼠胸腺,除去淋巴细胞,获得原代胸腺基质细胞,利用慢病毒将小鼠TRAF6基因特异性shRNA慢病毒质粒(LV-T6-shRNA)导入原代胸腺基质细胞中,重新聚集这些胸腺基质细胞... 详细信息

目的构建基于shRNA介导的中枢免疫耐受缺损模型。方法分离妊娠后13.5 d的胎鼠胸腺,除去淋巴细胞,获得原代胸腺基质细胞,利用慢病毒将小鼠TRAF6基因特异性shRNA慢病毒质粒(LV-T6-shRNA)导入原代胸腺基质细胞中,重新聚集这些胸腺基质细胞得到LV-T6-shRNA重塑胸腺,将此重塑胸腺移植入无胸腺的雌性小鼠肾脏荚膜下,饲养8周。结果慢病毒可有效转导LV-T6-shRNA慢病毒质粒入原代胸腺髓质上皮细胞中;移植LV-T6-shRNA重塑胸腺的小鼠饲养8周后,胸腺明显较小,成熟的胸腺髓质上皮细胞减少,脾脏肿大,脾脏中活化的T淋巴细胞增多,肺脏中出现淋巴细胞浸润等现象,这些表现型与TRAF6-/-小鼠的表现型相似。结论中枢免疫耐受缺损模型构建成功。

关键词：重塑胸腺中枢免疫耐受缺损模型 TRAF6 慢病毒 shRNA

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Fas相关因子1的研究进展

中国病理生理杂志 2012年第3期28卷 565-569,576页

作者：董少男谢琪璇秋山泰身高桥祐司秦俊文暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所广东广州510632 东京大学医科学研究所分子发癌分野日本东京108-8639 国立成育医疗研究中心生殖·细胞医疗研究部日本东京157-8535 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632

Fas相关因子1（Fas-associated factor 1,FAF1）是一种细胞内蛋白质,在不同细胞中可存在于细胞核、核仁及核周细胞质中。FAF1是一种进化上保守的蛋白质,约74 kD,由650个氨基酸组成,含有多个功能结构域,包括Fas作用结构域（Fas-interacti... 详细信息

Fas相关因子1（Fas-associated factor 1,FAF1）是一种细胞内蛋白质,在不同细胞中可存在于细胞核、核仁及核周细胞质中。FAF1是一种进化上保守的蛋白质,约74 kD,由650个氨基酸组成,含有多个功能结构域,包括Fas作用结构域（Fas-interacting domain,FID）、

关键词： Fas相关因子1 表达与功能信号通路肿瘤

小鼠TRAF6特异性shRNA慢病毒质粒的构建及活性

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生物技术 2011年第6期21卷 20-24页

作者：谢琪璇罗峰秋山泰身井上纯一郎秦俊文暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所广东广州510632 东京大学医科学研究所分子发癌分野暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632

目的:构建小鼠TRAF6基因特异性shRNA慢病毒质粒。方法:设计、合成小鼠TRAF6基因特异性shRNA核苷酸,将其链接入pENTR/U6载体,基因测序;通过LR克隆酶将pENTR/U6中的TRAF6特异性shRNA核苷酸插入CS-RfA-EG慢病毒载体,KpnⅠ限制酶切分析;通... 详细信息

目的:构建小鼠TRAF6基因特异性shRNA慢病毒质粒。方法:设计、合成小鼠TRAF6基因特异性shRNA核苷酸,将其链接入pENTR/U6载体,基因测序;通过LR克隆酶将pENTR/U6中的TRAF6特异性shRNA核苷酸插入CS-RfA-EG慢病毒载体,KpnⅠ限制酶切分析;通过慢病毒将TRAF6基因特异性shRNA慢病毒质粒导入MEF13细胞中,FACS分析质粒导入率,同时利用Western blot技术检测MEF13细胞中TRAF6的表达以及磷酸化IκBα的表达。以LacZ基因特异性shRNA慢病毒质粒为对照。结果:构建的小鼠TRAF6基因特异性shRNA慢病毒质粒与设计相符;MEF13细胞中慢病毒质粒的导入率为95%以上;与对照组比较,TRAF6基因特异性shRNA可长期、完全抑制MEF13细胞中TRAF6的表达及TRAF6介导的IκBα的磷酸化。结论:成功构建小鼠TRAF6基因特异性shRNA慢病毒质粒。

关键词： TRAF6 慢病毒质粒 shRNA RNAi

围着床期小鼠胚胎表达肿瘤易感基因101(TSG101)

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2013年第2期34卷 134-138页

作者：谢琪璇黄卉卉蒋启荣高桥祐司秋山泰身秦俊文暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院发育与再生生物学系广东广州510632 广东省动物防疫监督总所广东广州510230 国立成育医疗研究中心生殖·细胞医疗研究部东京157-8535 东京大学医科学研究所分子发癌分野东京108-8639

揭示肿瘤易感基因101(TSG101)在围着床期胚胎中的时空表达型。方法:收集囊胚、培养获得着床前、着床后以及长开的小鼠胚胎。利用全胚原位杂交以及全胚免疫染色方法检测围着床期小鼠胚胎中TSG101的时空表达型。结果:TSG101表达于围着床... 详细信息

揭示肿瘤易感基因101(TSG101)在围着床期胚胎中的时空表达型。方法:收集囊胚、培养获得着床前、着床后以及长开的小鼠胚胎。利用全胚原位杂交以及全胚免疫染色方法检测围着床期小鼠胚胎中TSG101的时空表达型。结果:TSG101表达于围着床期胚胎的內细胞块和滋养层细胞中,其中内细胞块细胞中的表达更强。结论:围着床期胚胎表达TSG101,暗示TSG101在胚胎着床过程中发挥作用。

关键词： TSG101 表达型胚胎围着床期

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人工中枢免疫耐受缺损模型的构建

人工中枢免疫耐受缺损模型的构建

第八届全国免疫学学术大会

作者：秦俊文谢琪璇秋山泰身井上纯一郎黄卉卉董少男万颖张坤暨南大学再生医学教育部重点实验室/发育与再生生物学系东京大学医科学研究所分子发癌分野

研究背景:中枢免疫耐受对于免疫系统识别自身和非自身,从而清除外来异物,维持对自身成分的不反应性是必不可少的。研究表明,NF-κB信号传导通路对于胸腺髓质微细构造的形成和维持特别是诱导胸腺髓质上皮细胞的分化和成熟,进而控制机体... 详细信息

研究背景:中枢免疫耐受对于免疫系统识别自身和非自身,从而清除外来异物,维持对自身成分的不反应性是必不可少的。研究表明,NF-κB信号传导通路对于胸腺髓质微细构造的形成和维持特别是诱导胸腺髓质上皮细胞的分化和成熟,进而控制机体的中枢免疫耐受是必须的,肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNF-receptor associated factor 6,TRAF6)是该信号通路中必不可少的信号传导分子,发挥着中心作用,其机制之一可能是通过诱导自身免疫调节因子(autoimmune regulator,AI RE)以及外周组织特异性抗原(tissue-specific antigens,TSA)的表达实现的。中枢免疫耐受的异常或者缺乏导致多种自身免疫疾病的发生;此外,近来的研究也提示中枢免疫耐受与妊娠等生理过程以及癌症等病理过程有着密切的关联。发展和建立一个中枢免疫耐受缺损模型对于开展中枢免疫耐受的相关研究具有重要的意义。目的:构建基于shRNA介导的中枢免疫耐受缺损模型。方法:分离妊娠后13.5天的胎鼠胸腺,除去淋巴细胞,获得原代胸腺基质细胞,利用慢病毒将小鼠TRAF6基因特异性shRNA慢病毒质粒(LV-T6-shRNA)导入原代胸腺基质细胞中,重新聚集这些胸腺基质细胞得到LV-T6-shRNA重塑胸腺,将此重塑胸腺移植入无胸腺的雌性小鼠肾脏荚膜下,饲养8周。结果:慢病毒可有效转导LV-T6-shRNA慢病毒质粒入原代胸腺髓质上皮细胞中;移植LV-T6-shRNA重塑胸腺的小鼠饲养8周后,胸腺明显较小,成熟的胸腺髓质上皮细胞减少,脾脏肿大,脾脏中活化的T淋巴细胞增多,肺脏中出现淋巴细胞浸润等现象,这些表现型与TRAF6-/-小鼠的表现型相似。结论:中枢免疫耐受缺损模型构建成功。

关键词：重塑胸腺人工中枢免疫耐受缺损模型 TRAF6 慢病毒 shRNA

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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小鼠早期胚胎的全胚原位杂交技术

暨南大学学报（自然科学与医学版） 2011年第6期32卷 620-623页

作者：肖銮娟谢琪璇高桥祐司秋山泰身董少男黄卉卉罗峰叶绍恩张春雪秦俊文暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学再生医学香港中文大学-暨南大学联合实验室广东广州510632 暨南大学科技部及广东省科技厅国际科技合作基地广东广州510632 国立成育医疗研究中心生殖·细胞医疗研究部东京157-8535 东京大学医科学研究所分子发癌分野东京108-8639

目的:探索一种适合于早期胚胎基因表达型检测的全胚原位杂交技术。方法:收集小鼠囊胚、固定;制备VASP、IL1R2基因特异性地高辛标记的cRNA探针;对囊胚进行杂交前处理、全胚原位杂交、抗体处理、显色以及显色后处理与镜检。结果:VASP、IL... 详细信息

目的:探索一种适合于早期胚胎基因表达型检测的全胚原位杂交技术。方法:收集小鼠囊胚、固定;制备VASP、IL1R2基因特异性地高辛标记的cRNA探针;对囊胚进行杂交前处理、全胚原位杂交、抗体处理、显色以及显色后处理与镜检。结果:VASP、IL1R2特异性表达在囊胚的内细胞团细胞和滋养层细胞中。结论:小鼠早期胚胎全胚原位杂交技术适用于早期胚胎基因时空表达型的检测。

关键词：小鼠早期胚胎全胚原位杂交血管扩张刺激磷蛋白(VASP) 白细胞介素1受体2(IL1R2)

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秋山草

秋山草

丛书名：诗歌译作社丛书

1934年

作者：吴秋山

来源：汇雅图书（南通市图书馆... 评论

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秋山的诗(4首)

诗歌月刊 2014年第2期 61-62页

作者：秋山

海浪,不需要雕刻……;满天星星掉满地;

关键词：诗歌文学文学作品当代作品