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pcDNA3.1/hTSHR真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第4期20卷 390-393页

作者：詹升华张徽刘纯重庆医科大学病理学教研室重庆400016 重庆医科大学第一医院内分泌科重庆400016

目的 :构建pcDNA3.1(+)人促甲状腺激素受体 (hTSHR)基因真核表达载体 ,并在COS 7细胞中进行表达。方法 :以限制性内切酶EcoRI和XbaI双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR ,获得hTSHRcDNA的全长片段 ,在以低熔点琼脂糖回收纯化后 ,定向插入真... 详细信息

目的 :构建pcDNA3.1(+)人促甲状腺激素受体 (hTSHR)基因真核表达载体 ,并在COS 7细胞中进行表达。方法 :以限制性内切酶EcoRI和XbaI双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR ,获得hTSHRcDNA的全长片段 ,在以低熔点琼脂糖回收纯化后 ,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)的多克隆酶切位点中 ,构建重组体pcDNA3.1/hTSHR ,进行酶切、PCR及测序鉴定。通过脂质体介导 ,转染COS 7细胞进行瞬时表达 ,并用RT PCR和免疫细胞化学染色法检测hTSHR的表达。结果 :双酶切pBluescriptSK(- ) /hTSHR得到约 2 70 0bp含TSHR全长cD NA的片段 ,同预期片段的大小相符。所构建的pcDNA3.1/hT SHR经双酶切及PCR鉴定同预期大小相符 ;测序结果与Gen Bank中收录的hTSHR全长序列一致 ,表明真核表达质粒构建正确。以脂质体转染COS 7细胞后 ,用RT PCR和免疫细胞化学染色法检测表明 ,细胞可表达hTSHR。结论 :成功地构建真核重组表达质粒pcDNA3.1/hTSHR ,为进一步研究TSHR的功能 ,以及利用hTSHR真核表达载体建立Graves实验动物模型奠定了基础。

关键词：人促甲状腺激素受体 pcDNA3.1 COS-7细胞转染动物模型

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带模板的结构化HTML文档深度标注框架

清华大学学报（自然科学版） 2006年第z1期46卷 936-941页

作者：廖述梅徐升华陶皖江西财经大学信息管理学院南昌330013 安徽工程科技学院计算机工程系芜湖241000

将现有W eb提升为语义W eb的有效方法之一就是标注W eb页。当前W eb上,动态生成页面的规模有静态页面的500倍之多,标注从数据库动态生成的页面是深度标注方法之一。针对数据库生成的W eb页面具有模板和结构化的特征,在对带模板的结构化H... 详细信息

将现有W eb提升为语义W eb的有效方法之一就是标注W eb页。当前W eb上,动态生成页面的规模有静态页面的500倍之多,标注从数据库动态生成的页面是深度标注方法之一。针对数据库生成的W eb页面具有模板和结构化的特征,在对带模板的结构化HTM L文档和本体形式化表示之后,提出了两段式的深度标注框架,即第一阶段解析HTM L文档,抽取结构化信息,第二阶段指定实例与词汇间的映射,标注自动生成。与其他标注方法相比,该方法能明显降低标注过程的工作量。

关键词：语义网深度标注信息抽取映射规则

钾-氯协同转运子1新的同分异构体的发现及其转录调控意义

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中华肾脏病杂志 2005年第1期21卷 47-51页

作者：周国平陈吉庆吴升华陈晓禹陈辉吴元俊南京医科大学附属江苏省人民医院儿科 210036

目的寻找钾-氯协同转运子(KCC)1新的同分异构体及分析其意义。方法抽提正常人肾组织RNA,用已发表KCCl序列设计引物,进行cDNA末端快速放大(RACE)及RT-PCR,以Northern印迹分析证实新的同分异构体的存在,并用生物信息学方法比较新序列。结... 详细信息

目的寻找钾-氯协同转运子(KCC)1新的同分异构体及分析其意义。方法抽提正常人肾组织RNA,用已发表KCCl序列设计引物,进行cDNA末端快速放大(RACE)及RT-PCR,以Northern印迹分析证实新的同分异构体的存在,并用生物信息学方法比较新序列。结果RACE和Northern印迹分析结果证实在人肾组织中有3种KCCl的新的同分异构体,与野生型KCCl不同的是,新的KCCl同分异构体2含部分内含子1的序列(外显子1b),作为其外显子1.蛋白翻译起始密码子也位于该外显子中。新的KCCl同分异构体3含外显子1b、外显子2、内含子2及以后与野生型KCCl相同的序列,蛋白翻译起始密码子位于外显子4,导致-长的5'端非翻译区,内含子2靠外显子3的位置有-翻译终止密码子。新的KCCl同分异构体4含部分内含子3作为其5'端非翻译区。结论新的异构体的发现为KCC家族增添了新的成员,并为KCCl这一重要分子的转录和功能调节提供了新的线索,其特异性序列可用于分析它们在人类疾病中的病理意义。由于启动子类型的不同对同分异构体基因转录的选择起主动的调节作用,多个同分异构体及多个启动子的存在对理解KCCl复杂的生理功能、调节过程和致病机制具有重要意义。

关键词：钾-氯协同转运子同分异构体转录调控基因调节

一种新的干扰素调节因子拼接异构体IRF-3b的结构及功能

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第3期25卷 199-203页

作者：周国平陈吉庆吴升华陈晓禹陈辉南京医科大学附属江苏省人民医院儿科 210036

目的　干扰素调节因子 (interferonregulatoryfactors ,IRF) 3是病毒感染后调节干扰素基因转录重要的转录因子 ,寻找IRF 3新的基因拼接异构体 ,研究其结构及功能。方法　抽提人类细胞RNA ,用IRF 3已发表序列设计引物 ,作cDNA末端快速放... 详细信息

目的　干扰素调节因子 (interferonregulatoryfactors ,IRF) 3是病毒感染后调节干扰素基因转录重要的转录因子 ,寻找IRF 3新的基因拼接异构体 ,研究其结构及功能。方法　抽提人类细胞RNA ,用IRF 3已发表序列设计引物 ,作cDNA末端快速放大 (RACE)及RT PCR ,生物信息学方法比较新序列 ,亚克隆IRF 3b至 pcDNA3.1 flag ,转染人胚胎肾上皮 2 93细胞 ,用抗flag抗体作Westernblot分析 ,用荧光素酶功能分析的方法观测IRF 3b对病毒诱导的干扰素 β启动子荧光素酶活性的影响。结果　发现了一种新的IRF 3拼接异构体IRF 3b ,IRF 3b用了紧接第七外显子前的 1 6个第六内含子的碱基 ,导致阅读框架移位 ,相应蛋白质的C端第 32 8～ 4 52位为不同于IRF 3的新C末端。Westernblot出现预期的相对分子质量 (Mr)为 57.75× 1 0 3的IRF 3b蛋白强阳性条带。新的外显子序列可在小鼠的表达序列标签 (EST)表达库中找到同源序列 ,提示这种新的异构体在生物演进中有其保守功能 ,IRF 3b荧光素酶功能分析显示 ,该同分异构体能抑制病毒诱导的干扰素 β启动子活性至对照组的 4 0 %～ 50 %。结论　新的异构体的发现为IRF 3这一重要分子的功能调节提供了新的线索 ,它可能是病毒感染通路中干扰素的显性负性抑制剂 ,提示其功能为干扰素产生的?

关键词：干扰素调节因子异构体结构 Western RT-PCR pcDNA3 荧光素酶活性相对分子质量表达序列标签 blot 病毒诱导功能分析病毒感染后细胞RNA 生物信息学 293细胞第七外显子启动子活性转录因子基因转录基因拼接设计引物

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试论企业执行力文化建设

江汉论坛 2004年第10期 63-65页

作者：鲍升华湖北经济学院武汉430077

企业执行力的实现有多种条件因素和流程步骤,企业文化是企业执行力实现的重要载体和表达方式。要实现和提升执行力,先要对这个载体进行分析和研究。本文在对执行力与执行力文化的关系、执行力文化的作用、特点进行全面分析的基础上,提... 详细信息

企业执行力的实现有多种条件因素和流程步骤,企业文化是企业执行力实现的重要载体和表达方式。要实现和提升执行力,先要对这个载体进行分析和研究。本文在对执行力与执行力文化的关系、执行力文化的作用、特点进行全面分析的基础上,提出了构建企业执行力文化的解决之道。

关键词：执行力组织文化企业管理

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应培养学生阅读历史教材的能力

教育评论 2001年第2期 63-64页

作者：黄升华

由于不少学生对历史课程不大重视,往往不注意认真阅读教材,甚至有个别学生从未认真阅读过教材.如果学生不具备与教学要求相适应的阅读能力,就会影响教学进度和教学效果,无法全面完成教学任务.针对这一现状,历史教师在课堂上应注重对学... 详细信息

由于不少学生对历史课程不大重视,往往不注意认真阅读教材,甚至有个别学生从未认真阅读过教材.如果学生不具备与教学要求相适应的阅读能力,就会影响教学进度和教学效果,无法全面完成教学任务.针对这一现状,历史教师在课堂上应注重对学生历史阅读能力的培养.笔者根据多年的教学实践,谈谈几点体会.

关键词：初中历史教学阅读能力历史教材知识结构阅读形式思维能力

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民营企业管理的思维转型与管理创新

江汉论坛 2005年第11期 73-74页

作者：鲍升华湖北经济学院武汉431502

民营企业管理水平已经成为制约其发展的重要瓶颈,创新管理势在必行。本文在分析民营企业管理存在的误区与问题的基础上,提出了民营企业实现管理创新的理念、重点与实现途径,对推进民营企业实施管理变革,提高管理水平有一定现实意义。

关键词：民营企业管理创新理念变革

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浅论英语“多层并列”结构

外语与外语教学 1995年第2期 26-30页

作者：井升华南京理工大学

浅论英语“多层并列”结构南京理工大学副教授井升华首先，有必要引出一个新的语法术语：“多层并列”结构（ｍｕｌｔｉｃｏｏｒｄｉｎａｔｉｏｎｓ），因为它不同于多项并列（ｍｕｌｔｉｐｌｅｃｏｏｒｄｉｎａｔｉｏｎ）。例如：（１... 详细信息

浅论英语“多层并列”结构南京理工大学副教授井升华首先，有必要引出一个新的语法术语：“多层并列”结构（ｍｕｌｔｉｃｏｏｒｄｉｎａｔｉｏｎｓ），因为它不同于多项并列（ｍｕｌｔｉｐｌｅｃｏｏｒｄｉｎａｔｉｏｎ）。例如：（１）ＨｅｓｔｕｄｉｅｓＥｎｇｌｉｓｈ...

关键词：并列结构语言现象学习者英语教学语言教学结构层次相互平行实用意义南京理工大学语法学家

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X射线平板探测器数字成像及其图像校准

北京航空航天大学学报 2004年第8期30卷 698-701页

作者：周正干滕升华江巍安振刚北京航空航天大学机械工程及自动化学院北京100083

为了提高X射线数字成像系统的图像质量 ,以基于平板探测器的X射线数字照相系统为研究对象 ,介绍了平板探测器自身影响图像质量的 4大因素 :随机噪声 ,偏置误差 ,像元响应不一致性和瑕疵像元等 ,分析了这些因素的成因及其对图像质量的影... 详细信息

为了提高X射线数字成像系统的图像质量 ,以基于平板探测器的X射线数字照相系统为研究对象 ,介绍了平板探测器自身影响图像质量的 4大因素 :随机噪声 ,偏置误差 ,像元响应不一致性和瑕疵像元等 ,分析了这些因素的成因及其对图像质量的影响 ,提出了相应的减小和消除这些影响的图像校准方法 .实验结果表明 :运用这些图像校准方法 ,可以有效地去除上述因素对图像质量的影响 ,显著提高平板探测器输出图像的质量。

关键词：无损检验图像处理图像校准平板探测器