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基于CRISPR/Cas12a的生物传感平台的机制研究及应用

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生物技术通报 2024年第7期40卷 90-98页

作者：陈墨岩祝诚天津大学生命科学学院天津300072

CRISPR/Cas12a系统能够由可编程的RNA引导,准确识别特异的单链DNA或含有PAM序列的双链DNA,而后在目标底物进行切割的同时完成对非特异性单链DNA的迅速切割,该特性使其在生物传感应用中显示出巨大前景。近年来,CRISPR/Cas12a系统被广泛... 详细信息

CRISPR/Cas12a系统能够由可编程的RNA引导,准确识别特异的单链DNA或含有PAM序列的双链DNA,而后在目标底物进行切割的同时完成对非特异性单链DNA的迅速切割,该特性使其在生物传感应用中显示出巨大前景。近年来,CRISPR/Cas12a系统被广泛应用于生物标志物的辅助检测,其生物标志物传感平台已在可视化细胞途径、体内活体诊断等生物分子传感器的构建方面得到应用。本文基于CRISPR/Cas12a生物传感平台的构建原理,对不同应用情景下CRISPR/Cas12a系统的变体进行了总结,并对基于该系统的体外、体内传感平台的应用进行了重点介绍和归纳,进一步讨论了不同传感平台的特点。最后对目前应用的优点和局限性做出总结和展望,以期为该领域的研究与应用提供一定参考。

关键词： CRISPR/Cas12a 体外生物传感体内生物传感准确识别

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补肾活血方通过调控circ_0036763/miR-583轴对髓核细胞增殖和胞外基质合成的影响

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中国医师杂志 2024年第1期26卷 63-69页

作者：梁灿荣何俊杰褚学远冯浩坚郭伟俊蔡东岭祝诚华陈晓峰广州市番禺区中医院骨伤科广州511400 广州市番禺区中医院影像科广州511400

目的探究补肾活血方可能通过调控circ_0036763/miR-583轴对髓核细胞增殖和胞外基质合成的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测正常及椎间盘退变(IDD)髓核细胞中circ_0036763、miR-583表达水平;将IDD髓核细胞分为pcDNA组、pcDNA ... 详细信息

目的探究补肾活血方可能通过调控circ_0036763/miR-583轴对髓核细胞增殖和胞外基质合成的影响。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测正常及椎间盘退变(IDD)髓核细胞中circ_0036763、miR-583表达水平;将IDD髓核细胞分为pcDNA组、pcDNA circ_0036763组、pcDNA circ_0036763+mimic NC组、pcDNA circ_0036763+miR-583 mimic组,采用qRT-PCR检测各组髓核细胞circ_0036763、miR-583表达水平,MTT检测细胞增殖(A值),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测髓核细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、collagen Ⅰ、collagen Ⅱ蛋白表达,双荧光素酶报告实验验证circ_0036763与miR-583靶向关系。将27只小鼠分为假手术组、IDD组、补肾活血方组,除假手术组外均建立IDD模型。建模成功后,假手术组、IDD灌胃生理盐水,补肾活血方组灌胃1.5 g/ml补肾活血方,连续灌胃3周。采用qRT-PCR检测各组小鼠髓核细胞circ_0036763、miR-583表达水平,MTT检测细胞增殖,Western blot检测PCNA、collagen Ⅰ、collagen Ⅱ蛋白表达。结果IDD髓核细胞中circ_0036763表达水平降低,miR-583表达水平升高(均P<0.05);过表达circ_0036763可促进髓核细胞增殖和胞外基质合成(均P<0.05);circ_0036763靶向调控miR-583,上调miR-583可逆转过表达circ_0036763对IDD髓核细胞增殖和胞外基质合成能力。与假手术组相比,IDD组collagen Ⅰ蛋白表达、miR-583表达水平增加(均P<0.05),细胞A值、PCNA及collagen Ⅱ蛋白表达、circ_0036763表达水平降低(均P<0.05);与IDD组相比,补肾活血方组collagen Ⅰ蛋白表达、miR-583表达水平降低(均P<0.05),细胞A值、PCNA及collagenⅡ蛋白表达、circ_0036763表达水增加(均P<0.05)。结论补肾活血方可能通过调控circ_0036763/miR-583轴诱导髓核细胞增殖和胞外基质合成。

关键词：椎间盘退行性变髓核 RNA,环状 miRNA-583 细胞增殖

孕酮、17β-雌二醇对在体培养人子宫内膜出血作用的初步研究

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动物学报 1985年第4期34卷 308-312,389页

作者：祝诚中国科学院动物研究所

去卵巢地鼠皮下埋植孕酮和17β-雌二醇硅胶管,两周后在地鼠颊囊内移植分泌期人子宫内膜。手术后第11天用3种不同方式取出含类固醇激素管;1)10只动物仅取出17β-雌二醇管,保留孕酮管,移植内膜均无出血现象;2)31只动物取出孕酮管,保留17β... 详细信息

去卵巢地鼠皮下埋植孕酮和17β-雌二醇硅胶管,两周后在地鼠颊囊内移植分泌期人子宫内膜。手术后第11天用3种不同方式取出含类固醇激素管;1)10只动物仅取出17β-雌二醇管,保留孕酮管,移植内膜均无出血现象;2)31只动物取出孕酮管,保留17β-雌二醇管,有21只动物移植内膜出血,10只不出血;3)10只动物两种激素管同时取出,所有移植内膜均出血。内膜出血时间比较集中在取管后36—72小时内,占总出血动物的64％。文章讨论了子宫内膜出血原因。

关键词： Human endometrium. Hamster Progesterone

黄顶菊AM真菌多样性及其优势种对植株生长的影响

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菌物学报 2023年第3期42卷 692-706页

作者：胡学意吴海英祝诚尚李伟郭霄李敏郭绍霞青岛农业大学园林与林学院山东青岛266109 青岛农业大学菌根生物技术研究所山东青岛266109

自河北衡水市选择6个黄顶菊Flaveria bidentis入侵样地,采集根区土壤和根系样品,分离丛枝菌根(AM)真菌,测定其物种多样性状况;于盆栽条件下评估上述试验确定的优势AM真菌对黄顶菊生长发育的影响;采用隔网分室培养系统测定促生效应最大... 详细信息

自河北衡水市选择6个黄顶菊Flaveria bidentis入侵样地,采集根区土壤和根系样品,分离丛枝菌根(AM)真菌,测定其物种多样性状况;于盆栽条件下评估上述试验确定的优势AM真菌对黄顶菊生长发育的影响;采用隔网分室培养系统测定促生效应最大的AM真菌优势种组合对黄顶菊与伴生植物三叶草Trifolium repens间碳氮运转分配的影响。从根区土壤和根内分别鉴定到AM真菌8属26种和5属7种,其中光壁无梗囊霉Acaulospora laevis、根内根孢囊霉Rhizophagus intraradices、摩西斗管囊霉Funneliformis mosseae和变形球囊霉Glomus versiforme为根区土壤的优势种;接种***+***+***处理对黄顶菊的促生效应最大。分室培养系统中分别对黄顶菊和三叶草接种AM真菌和施加15N或13C处理后,黄顶菊茎叶和根系15N和13C丰度均明显高于三叶草的。结论认为,入侵样地黄顶菊根区有丰富的AM真菌物种多样性,其中,优势种***+***+***组合有助于黄顶菊从三叶草中夺取碳氮养分,显著提高入侵寄主竞争力,改善营养状况,促进其入侵建群。

关键词：黄顶菊丛枝菌根生长发育养分传递

转化生长因子-β对基质金属蛋白酶及其组织抑制因子调控的研究进展

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生物化学与生物物理进展 2003年第1期30卷 7-12页

作者：林海燕王红梅祝诚中国科学院动物研究所

基质金属蛋白酶 (MMPs)及其组织抑制因子 (TIMPs)参与调控胞外基质 (ECM)的降解与重建 ,二者的协同作用以及表达的动态平衡保证组织的生理 /病理形态结构建成 ,并完成生长、分化、维持、降解的往复周期 .转化生长因子 β (TGF β)通过对... 详细信息

基质金属蛋白酶 (MMPs)及其组织抑制因子 (TIMPs)参与调控胞外基质 (ECM)的降解与重建 ,二者的协同作用以及表达的动态平衡保证组织的生理 /病理形态结构建成 ,并完成生长、分化、维持、降解的往复周期 .转化生长因子 β (TGF β)通过对MMPs和TIMPs家族成员因细胞类型而异的基因表达调控作用 ,表现出调节ECM重建的生物学效应 .TGF β可通过激活Smad通路、促分裂原活化蛋白激酶 (MAPK)通路 ,以及刺激激活蛋白 1(AP 1)复合体的形成 ,完成对MMPs和TIMPs基因表达的调控功能 .

关键词：转化生长因子-β 基质金属蛋白酶组织抑制因子 TIMPs 基因表达调控作用研究进展 MAPK信号通路

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血管内皮生长因子在雌性生殖系统中的作用

科学通报 2002年第24期47卷 1841-1846页

作者：钱东祝诚中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室北京100080

血管内皮生长因子(VEGF)是一种同源二聚体糖蛋白,是血管内吱细胞高度特异的有丝分裂原,能诱导内皮细胞增殖,刺激内皮细胞迁移并抑制细胞凋亡等.VEGF参与排卵、子宫内膜周期性变化、胚胎植入及胚胎发育等多种雌性生殖过程.对先兆子痫和... 详细信息

血管内皮生长因子(VEGF)是一种同源二聚体糖蛋白,是血管内吱细胞高度特异的有丝分裂原,能诱导内皮细胞增殖,刺激内皮细胞迁移并抑制细胞凋亡等.VEGF参与排卵、子宫内膜周期性变化、胚胎植入及胚胎发育等多种雌性生殖过程.对先兆子痫和胎儿宫内发育迟缓等生殖疾病发生也起着重要作用.结合本实验室多年来对雌性生殖过程中血管发生及其相关因子的研究,综述了VEGF在雌性生殖系统中的怍用,并展望其研究和应用前景.

关键词：血管内皮生长因子雌性生殖系统血管发生糖蛋白卵巢胚胎植入胚胎发育

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白血病抑制因子促进胚泡植入的研究进展

生物化学与生物物理进展 1999年第2期26卷 125-127页

作者：蔡理全段恩奎祝诚中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室

白血病抑制因子是一多效性细胞因子，能促进哺乳动物的早期胚胎发育和启动胚泡植入，其基因表达和生物合成受母体因素（如甾体激素和其他细胞因子）的控制．ｇｐ１３０是白血病抑制因子家族受体的亲和力转化亚基，其同源／异源亚基的二... 详细信息

白血病抑制因子是一多效性细胞因子，能促进哺乳动物的早期胚胎发育和启动胚泡植入，其基因表达和生物合成受母体因素（如甾体激素和其他细胞因子）的控制．ｇｐ１３０是白血病抑制因子家族受体的亲和力转化亚基，其同源／异源亚基的二聚体能够激活酪氨酸激酶。

关键词：白血病抑制因子胚泡植入 gp130

滋养层细胞表面主要组织相容性复合体抗原的研究进展

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生物化学与生物物理进展 2001年第1期28卷 26-28页

作者：刘喆彭景楩祝诚中国科学院动物研究所

胎盘滋养层是直接与母体接触的与母体基因型不同的胎儿组织 ,滋养层细胞是否表达主要组织相容性复合体 (MHC)抗原以及表达何种MHC抗原对于妊娠成功与否至关重要 .非经典MHCⅠ类抗原发现较晚 ,其中HLA G在滋养层细胞表达 ,可以保护带有... 详细信息

胎盘滋养层是直接与母体接触的与母体基因型不同的胎儿组织 ,滋养层细胞是否表达主要组织相容性复合体 (MHC)抗原以及表达何种MHC抗原对于妊娠成功与否至关重要 .非经典MHCⅠ类抗原发现较晚 ,其中HLA G在滋养层细胞表达 ,可以保护带有父方同种异体抗原的胎儿免受母体免疫系统的杀伤 .经典MHCⅠ类抗原有多种亚型 ,不同亚型在滋养层细胞的表达有所不同 .MHCⅡ类抗原在妊娠维持过程中表达极弱 ,新近的研究资料表明 ,滋养层细胞CⅡTA在MHCⅡ类基因表达调控中起主要作用 .

关键词：主要组织相容性复合体 MHC 非经典MHCⅠ类抗原经经典MHCⅠ抗原 MHCⅡ类抗原滋养层细胞

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人类胚胎对植入的调控

生理科学进展 2002年第4期33卷 359-360页

作者：刘国艺祝诚倪江中国科学院动物研究所计划生育生殖生物学国家重点实验室北京100080 哈尔滨医科大学生理学教研室

胚胎植入是一个十分复杂的过程,需要胚泡和子宫内膜之间的协同发育。植入过程中,胚泡和内膜之间的通讯和相互作用仍是生殖医学领域中尚未解决的问题。最近的研究取得了一些进展,发现在人类胚胎植入的定位和粘附过程中,胚胎能对子宫内膜... 详细信息

胚胎植入是一个十分复杂的过程,需要胚泡和子宫内膜之间的协同发育。植入过程中,胚泡和内膜之间的通讯和相互作用仍是生殖医学领域中尚未解决的问题。最近的研究取得了一些进展,发现在人类胚胎植入的定位和粘附过程中,胚胎能对子宫内膜上皮的分子,如趋化因子、粘附分子、抗粘附分子和瘦素进行旁分泌调控。

关键词：人类胚胎植入调控趋化因子粘附分子抗粘附分子瘦素