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重组人载脂蛋白AⅠ的原核表达及活性检测初探

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中国输血杂志 2010年第10期23卷 793-798页

作者：卞炯何毅明祝慈芳王黎吴玮朱威上海生物制品研究所上海200052

目的原核表达人载脂蛋白AⅠ(ApoAⅠ),对其表达进行优化,同时对ApoAⅠ活性检测方法进行初步研究。方法通过构建3种不同的重组质粒来研究以组氨酸(His)6融合蛋白表达、(His)6-pro(前肽)融合蛋白与单目的基因表达之间的差别,其中(His)6-pro... 详细信息

目的原核表达人载脂蛋白AⅠ(ApoAⅠ),对其表达进行优化,同时对ApoAⅠ活性检测方法进行初步研究。方法通过构建3种不同的重组质粒来研究以组氨酸(His)6融合蛋白表达、(His)6-pro(前肽)融合蛋白与单目的基因表达之间的差别,其中(His)6-pro-ApoAⅠ质粒中目的基因第3、4、7位密码子进行无义突变。随后采用镍离子柱纯化重组蛋白,间接法测定ApoAⅠ对被内毒素(LPS)攻击的细胞的保护效果来检测其生物活性。结果单目的基因(pET28a-ApoAⅠ)、组氨酸标记的融合蛋白(pET28a-(His)6-ApoAⅠ)以及(His)6-pro(前肽)融合蛋白(pET28a-(His)6-pro-ApoAⅠ)表达量分别为17、40、95mg/L,经镍柱纯化后的重组蛋白经Western blot、分子筛层析以及生物活性检测,表明原核表达的ApoAⅠ为单体蛋白且具有相应的生物学活性。结论原核表达的ApoAⅠ与人血浆提纯的天然ApoAⅠ分子生物性状无明显差异。

关键词：重组ApoAⅠ 原核表达蛋白纯化生物活性

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FVⅢ浓制剂生产工艺的改进

中国生物制品学杂志 1991年第1期4卷 29-33页

作者：朱威祝慈芳王霞红张天仁卫生部上海生物制品研究所上海200052

作者于常规制备工艺中增加一步酸沉淀,加上超滤浓缩,可使制品纯度有较大提高。本工艺制备的镧品,在适宜稳定剂保护下,能耐受80℃、72小时的剧烈干热处理。3批小量制备的结果显示制品的平均效价为28.7±2.4μ/ml,平均比活为1.14±0.11u/m... 详细信息

作者于常规制备工艺中增加一步酸沉淀,加上超滤浓缩,可使制品纯度有较大提高。本工艺制备的镧品,在适宜稳定剂保护下,能耐受80℃、72小时的剧烈干热处理。3批小量制备的结果显示制品的平均效价为28.7±2.4μ/ml,平均比活为1.14±0.11u/mg。对冷沉淀抽提液的活性总回收为602以上。热处理制品经3名甲种血友病人初步临床输用观察结果表明安全有效,平均体内活性回收为98.1±31.7％.半衰期为8～12小时。

关键词： FVⅢ浓制剂病毒灭活干热处理

从各种生物体液中分离抗凝血酶Ⅲ的简单两步法

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国外医学.生物制品分册 1982年第5期 238-239页

作者：祝慈芳

抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)与肝素之间的相互作用具有高度特异性,并对凝血酶以及活化的因子Ⅸ及Ⅹ等的抑制速度,产生增强的效应。AT与肝素的这种相互作用,使肝素亲和层析法成为分离制备AT的重要方法。但通常商品肝素中具有高亲和力的部分不到1/3... 详细信息

抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)与肝素之间的相互作用具有高度特异性,并对凝血酶以及活化的因子Ⅸ及Ⅹ等的抑制速度,产生增强的效应。AT与肝素的这种相互作用,使肝素亲和层析法成为分离制备AT的重要方法。但通常商品肝素中具有高亲和力的部分不到1/3,且其中能特异地结合AT的位点仅占2～3％。因而结合在琼脂糖上的肝素总量中,仅极小部分能结合AT,而绝大部分肝素则

关键词：硫酸葡聚糖 AT 肝素亲和层析酶复合物肝素结合蛋白酶类

α_1-抗胰蛋白酶生物活性测定影响因素探讨

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中国输血杂志 2004年第4期17卷 243-246页

作者：祝慈芳朱威上海生物制品研究所上海200052

目的　研究分析用合成基质法测定α1 抗胰蛋白酶生物活性时的影响因素。方法　在α1 抗胰蛋白酶中分别加入不同浓度的聚乙二醇 (PEG ,分子量 4 0 0 0 ) ,蔗糖 ,枸橼酸钠 ,乙醇 ,测定其生物活性。结果　当PEG浓度接近2 0 %时 ,α1 抗... 详细信息

目的　研究分析用合成基质法测定α1 抗胰蛋白酶生物活性时的影响因素。方法　在α1 抗胰蛋白酶中分别加入不同浓度的聚乙二醇 (PEG ,分子量 4 0 0 0 ) ,蔗糖 ,枸橼酸钠 ,乙醇 ,测定其生物活性。结果　当PEG浓度接近2 0 %时 ,α1 抗胰蛋白酶生物活性与对照比增加近 1 0 0 %左右。结论　PEG影响α1

关键词： α1-抗胰蛋白酶胰蛋白酶 BAPNA 聚乙二醇蔗糖枸橼酸钠乙醇

蛋白酶-抗蛋白酶失衡在内毒素诱发急性肺损伤中的作用

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中国危重病急救医学 2000年第1期12卷 10-14页

作者：揭志军杨文兰蔡映云金美玲朱威祝慈芳上海医科大学附属中山医院肺科上海200032 上海生物制品研究所上海200052

目的：研究蛋白酶抗蛋白酶失衡在内毒素诱发急性肺损伤（ＡＬＩ）兔模型中的作用。方法：成年健康新西兰大白兔１６只经麻醉、气管切开插管后给予机械通气。随机分成２组（每组８只）：即内毒素（ＬＰＳ）致ＡＬＩ模型组（ＬＰＳ组）... 详细信息

目的：研究蛋白酶抗蛋白酶失衡在内毒素诱发急性肺损伤（ＡＬＩ）兔模型中的作用。方法：成年健康新西兰大白兔１６只经麻醉、气管切开插管后给予机械通气。随机分成２组（每组８只）：即内毒素（ＬＰＳ）致ＡＬＩ模型组（ＬＰＳ组）和生理盐水对照组（ＮＳ组）。监测动脉血氧分压（ＰａＯ２）、动脉血压（ＢＰ）、外周血白细胞数（ＷＢＣ）、气道峰压（Ｐｐｅａｋ）、静态总呼吸顺应性（ＴＲＣ）和肺内动静脉分流（Ｑｓ／Ｑｔ）等指标的变化；比较实验８小时后血浆α１抗胰蛋白酶（α１ＡＴ）含量和活性、支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中总蛋白（ＴＰ）含量、中性粒细胞弹性蛋白酶（ＮＥ）样活性、α１ＡＴ活性、白介素８（ＩＬ８）、肿瘤坏死因子 α（ＴＮＦ α）、总磷脂（ＴＰＬ）、饱和磷脂酰胆碱（ＤＳＰＣ）含量及肺湿重与干重比（Ｗ／Ｄ）的差异。结果：与基础值相比，静注ＬＰＳ后ＰａＯ２下降，氧合指数＜２６．６７ｋＰａ（１ｋＰａ＝７．５ｍｍＨｇ），ＴＲＣ下降＞５０％，肺内动静脉分流增加＞２５％；与ＮＳ组相比，血浆α１ＡＴ含量增高但活性下降，外周血白细胞减少，而ＢＡＬＦ中ＴＰ含量、ＮＥ样活性、ＩＬ８和ＴＮＦ α浓度增加，α１ＡＴ活性、ＴＰ?

关键词：肺损伤急性弹性蛋白酶内毒素 α1-AT

α_1-抗胰蛋白酶对急性肺损伤兔蛋白酶和表面活性物质的影响

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中国危重病急救医学 2001年第12期13卷 735-738页

作者：揭志军蔡映云杨文兰金美玲朱威祝慈芳上海第二医科大学附属新华医院呼吸内科上海200092 复旦大学附属中山医院肺科上海200032 上海生物制品研究所上海200052

目的 :观察 α1抗胰蛋白酶 ( α1AT)对内毒素致急性肺损伤兔蛋白酶和表面活性物质的影响。方法 :3 2只成年健康新西兰兔在给予定容机械通气基础上随机分成内毒素 ( L PS)组、L AV组 (内毒素 +α1AT)、AT组 ( α1AT)和生理盐水组 ( NS)... 详细信息

目的 :观察 α1抗胰蛋白酶 ( α1AT)对内毒素致急性肺损伤兔蛋白酶和表面活性物质的影响。方法 :3 2只成年健康新西兰兔在给予定容机械通气基础上随机分成内毒素 ( L PS)组、L AV组 (内毒素 +α1AT)、AT组 ( α1AT)和生理盐水组 ( NS)。稳定 3 0分钟 ,监测每小时动脉血氧分压 ( Pa O2 )、静态总呼吸顺应性 ( TRC) ,4和 8小时分别测定肺内动静脉分流 ( Qs/Qt)。比较 8小时后血浆 α1AT浓度和活性、支气管肺泡灌洗液( BAL F)中总蛋白 ( TP)浓度、弹性蛋白酶 ( NE)样活性、α1AT活性、总磷脂 ( TPL)和饱和磷酯酰胆碱 ( DSPC)含量等指标以及肺重 /干重 ( W/D)。结果 :动物静脉注射 LPS后 Pa O2 下降 ,氧合指数 ( Pa O2 /Fi O2 ) 50 % ,Qs/Qt增加 >2 5%。与 NS组相比 ,血浆 α1AT含量增高但活性下降 ;BAL F中 TP含量和 NE样活性增加 ,α1AT活性、TPL 和 DSPC/TPL下降 ;W/D增加。L AV组与 LPS组相比 ,上述指标的变化明显改善 :Pa O2 和 TRC的下降幅度较 L PS组减小 ,血浆 α1AT含量和活性、BAL F中α1AT活性、TPL和 DSPC%较 L PS组增高 ;Qs/Qt、BAL F中 TP含量、NE样活性和 W/D较 L PS组降低。结论 :预防性静注 α1AT,可提高机体内的抗蛋白酶活性 ,抑制

关键词：急性肺损伤 α1-抗胰蛋白酶弹性蛋白酶内毒素肺泡表面活性物质

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凝血酶原复合物病毒灭活的研究

中国生物制品学杂志 1995年第3期8卷 101-104页

作者：黄金明刁武萍祝慈芳吴玮陈延韩剑秋卫生部上海生物制品研究所上海200052

从Cohn’s组分Ⅲ制备凝血酶原复合物（简称PCC），并经S／D处理灭活病毒。通过加入标志病毒（VSV、Sindbis、仙台及EMC）考察病毒灭活效果。结果显示，因子Ⅱ、Ⅸ活性总回收率分别为52．2％和22．3％，纯化倍数分别为3．5和1．5，均比... 详细信息

从Cohn’s组分Ⅲ制备凝血酶原复合物（简称PCC），并经S／D处理灭活病毒。通过加入标志病毒（VSV、Sindbis、仙台及EMC）考察病毒灭活效果。结果显示，因子Ⅱ、Ⅸ活性总回收率分别为52．2％和22．3％，纯化倍数分别为3．5和1．5，均比原制备工艺提高约2倍。对标志病毒的灭活效果分别达107．55TCID50／ml（VSV）、107．27TCID50／ml（Sindbis）、108．25TCID50／ml（仙台），而对非脂膜病毒EMC的灭活小于100．2TCID50／ml，表明S／D对灭活脂膜病毒有效，而对非脂膜病毒无效。TNBP残留量小于10ppm，Tween80残留量小于100ppm。所得制剂的溶解性及外观均比原制备工艺所得制剂有明显改善。

关键词：凝血酶原复合物生物制品病毒灭活 S/D法

α1-抗胰蛋白酶的制备及其防治急性肺损伤的疗效

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α1-抗胰蛋白酶的制备及其防治急性肺损伤的疗效

人纤维结合蛋白制备方法的建立及人纤维结合蛋白稳定性初探

首届长三角科技论坛——长三角生物医药发展论坛

作者：祝慈芳朱威揭志军蔡映云上海生物制品研究所复旦大学附属中山医院肺功能室

目的以FIV-1为原料,制备了较高纯度α-AT 制剂,用该制剂干预急性肺损伤动物模型作疗效考核。方法FIV-1抽提液经PEG 沉淀,离子交换,病毒灭活,超滤,除菌,分装,冻干制备α-AT 制剂。用急性肺损伤动物模型,比较静脉注射与雾化吸入α-AT 的... 详细信息

目的以FIV-1为原料,制备了较高纯度α-AT 制剂,用该制剂干预急性肺损伤动物模型作疗效考核。方法FIV-1抽提液经PEG 沉淀,离子交换,病毒灭活,超滤,除菌,分装,冻干制备α-AT 制剂。用急性肺损伤动物模型,比较静脉注射与雾化吸入α-AT 的治疗效果。结果3批制剂的纯度>70%,无菌、热原、安全试验均符合生物制品规程要求。静脉注射或雾化吸入,可降低由内毒素诱发急性肺损程度。结论α-AT制备工艺适合大规模生产。在防治急性肺损伤时有一定效果。

关键词：组分Ⅳ-1 α1-抗胰蛋白酶内毒素急性肺损伤

来源： cnki会议评论

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国际生物制品学杂志 2013年第4期36卷 185-189页

作者：祝慈芳朱威上海生物制品研究所有限责任公司第五研究室 200052

目的建立人纤维结合蛋白（fibronectin,Fn）制备方法,研究不同保护剂对Fn稳定性的影响.方法将经磷酸盐缓冲液抽提溶解的血浆冷沉淀用聚乙二醇沉淀,获得的上清液经离子交换层析制得纯化的Fn.将加入复合保护剂的Fn溶液分别于-20、4和37... 详细信息

目的建立人纤维结合蛋白（fibronectin,Fn）制备方法,研究不同保护剂对Fn稳定性的影响.方法将经磷酸盐缓冲液抽提溶解的血浆冷沉淀用聚乙二醇沉淀,获得的上清液经离子交换层析制得纯化的Fn.将加入复合保护剂的Fn溶液分别于-20、4和37℃存放0、5和14 d,观察保护剂抑制Fn降解的效果.结果采用建立的方法制备的Fn的纯度和平均回收率均＞80％.Fn稳定性研究显示,Fn于4℃存放会发生降解,加入枸橼酸钠＋甘氨酸或枸橼酸钠＋咪唑复合保护剂能有效抑制Fn降解.结论采用建立的方法制备Fn是可行的.枸橼酸钠＋甘氨酸或枸橼酸钠＋咪唑复合保护剂对Fn具有保护作用.

关键词：纤连蛋白类色谱法,离子交换蛋白质稳定性辅药