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天然与重组胶原蛋白在创面修复中的应用研究进展

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中华烧伤与创面修复杂志 2022年第10期38卷 978-982页

作者：刘小刚陈蕾李海航胡妍珂熊雅慧黄薇苏沙沙祁少海中山大学附属第一医院烧伤与创面修复科广州510062 四川大学生物医学工程学院成都610065 中山大学-逸仙集团皮肤健康精准研究联合实验室悦可丽皮肤再生实验室广州510275

胶原蛋白是一种构成动物结缔组织细胞外基质的高分子蛋白质,在生物医学、组织工程、食品以及化妆品等领域均有着广泛的应用和发展。胶原蛋白由于来源丰富且具有良好的生物相容性、低免疫原性与可降解性等优点,可被用作敷料或组织工程支... 详细信息

胶原蛋白是一种构成动物结缔组织细胞外基质的高分子蛋白质,在生物医学、组织工程、食品以及化妆品等领域均有着广泛的应用和发展。胶原蛋白由于来源丰富且具有良好的生物相容性、低免疫原性与可降解性等优点,可被用作敷料或组织工程支架用于创面修复。根据材料来源,胶原蛋白可被分为天然胶原蛋白和重组胶原蛋白,天然胶原蛋白主要是从哺乳动物和鱼类中直接提取的;而重组胶原蛋白是基于基因工程技术得到的,来源包括微生物、动物或植物重组表达体系。该文总结了胶原蛋白的来源及不同来源的胶原蛋白在创面修复中的作用及其优点、不足等,胶原蛋白结合三维打印技术用于创面修复的特殊性与优越性,以及中国胶原蛋白产业的市场规范对创面修复领域的影响,并对研发胶原蛋白相关产品的注意事项等做了进一步说明,旨在为选择合适来源的胶原蛋白进行创面修复提供新思路。

关键词：生物相容性材料打印,三维创面修复天然胶原蛋白重组胶原蛋白市场规范

毛乳头细胞促进组织工程皮肤血管化的实验研究

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中国修复重建外科杂志 2012年第2期26卷 135-140页

作者：刘坡祁少海舒斌谢举临徐盈斌刘旭盛东莞市塘厦医院外一科广东东莞523721 中山大学附属第一医院烧伤科

目的探讨毛乳头细胞对表皮干细胞与同种异体脱细胞真皮基质构建的组织工程皮肤血管化的影响。方法取门诊包皮环切术患者皮肤,用于表皮细胞培养;取孕19、20周引产胎儿头部皮肤,用于毛乳头细胞培养;患者及家属均知情同意。以中性蛋白酶联... 详细信息

目的探讨毛乳头细胞对表皮干细胞与同种异体脱细胞真皮基质构建的组织工程皮肤血管化的影响。方法取门诊包皮环切术患者皮肤,用于表皮细胞培养;取孕19、20周引产胎儿头部皮肤,用于毛乳头细胞培养;患者及家属均知情同意。以中性蛋白酶联合胰蛋白酶消化、分离表皮细胞,IV型胶原黏附法分选表皮于细胞;以Ⅰ型胶原酶消化法分离毛乳头,常规成纤维细胞培养液培养。以同种异体脱细胞真皮基质为支架,在真皮基质的真皮乳头侧种植毛乳头细胞,基底膜侧种植表皮干细胞构建实验组组织工程皮肤替代物;对照组组织工程皮肤替代物不种植毛乳头细胞。取6～8周龄BALB/C-nu裸鼠60只,随机分成实验组和对照组(n=30);实验动物背部制造1 cm×1 cm大小全层皮肤缺损模型,将两组组织工程皮肤替代物移植修复创面,2周后观察移植皮肤成活率。术后2、4周,取移植皮肤替代物标本,行HE及免疫组织化学染色,观察移植皮肤替代物CD31表达水平,并计算两组标本血管密度。结果Ⅳ型胶原分选后表皮细胞同时表达角蛋白19、β_1整合素,提示为表皮干细胞。由毛乳头培养出的细胞表达α平滑肌肌动蛋白,提示为毛乳头细胞。动物移植术后2周,实验组移植皮肤成活率为93.3%(28/30),对照组为80.0%(24/30),比较差异有统计学意义(χ~2=2.31,P=-0.00)。HE染色观察示实验组表皮层达12层,表皮细胞体积较大;对照组表皮层达4～6层,表皮细胞体积较小。实验组术后2、4周,血管密度分别为(38.56±2.49)个/mm2和(49.12±2.39)个/mm^2,对照组分别为(25.16±3.73)个/mm^2和(36.26±3.24)个/mm^2,两组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论毛乳头细胞可促进移植皮肤替代物血管形成,利于表皮层重建,提高组织工程皮肤移植成活率。

关键词：组织工程皮肤毛乳头细胞表皮干细胞同种异体脱细胞真皮基质血管化裸鼠

人Ⅰ型前胶原基因反义寡核苷酸对人增生性瘢痕裸鼠移植模型胶原合成的作用

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中国修复重建外科杂志 2011年第6期25卷 718-723页

作者：袁即山利天增祁少海江苏大学附属人民医院骨科江苏镇江212002 中山大学附属第一医院烧伤科

目的人Ⅰ型前胶原基因(ColⅠA1)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxyneucleotide,ASODN)对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞有抑制胶原合成作用,拟进一步探讨ColⅠA1 ASODN对裸鼠移植模型体内的人增生性瘢痕的胶原合成作用。方法 SPF级B... 详细信息

目的人Ⅰ型前胶原基因(ColⅠA1)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxyneucleotide,ASODN)对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞有抑制胶原合成作用,拟进一步探讨ColⅠA1 ASODN对裸鼠移植模型体内的人增生性瘢痕的胶原合成作用。方法 SPF级BALB/c-nunu品系6～8周龄雌性裸鼠60只,体重约20 g;取行瘢痕切除手术患者自愿捐赠的瘢痕组织块去表皮后,移植至裸鼠背部肩胛内侧皮下,每只裸鼠移植1块,制备人增生性瘢痕裸鼠移植模型。将58只成功制备模型的裸鼠根据处理方法不同,随机分成3组,于瘢痕移植2周根据分组行经皮穿刺瘢痕内注射。A组(n=20):5μL浓度为3 mmol/L ColⅠA1 ASODN、3μL脂质体、92μL Opti-MEMⅠ减血清培养基;B组(n=20):3μL脂质体、97μL Opti-MEMⅠ减血清培养基;C组(n=18):100μL Opti-MEMⅠ减血清培养基。实验最初2周每天注射1次,之后隔天1次,至实验取材。注射后2、4、6周,对存活裸鼠进行瘢痕硬度测量后,处死裸鼠取瘢痕组织行胶原染色组织学观察以及透射电镜观察;提取细胞总RNA后行RT-PCR测定ColⅠA1 mRNA相对含量;ELISA法行ColⅠA1蛋白定量分析。结果注射后6周内17只裸鼠死亡;共41只裸鼠40块瘢痕组织符合实验标准,纳入实验;A、B、C组各14、13、14只。注射后2周,3组间瘢痕硬度比较,差异均无统计学意义(P>0.05);4、6周时A组与B、C组比较,差异有统计学意义(P0.05)。随时间延长,组织学观察示3组Ⅲ型胶原表达上升,A组最明显,Ⅰ型胶原排列规则。透射电镜观察示A组成纤维细胞退化,胶原纤维排列更趋于一致;B、C组胶原纤维排列也逐渐规则。注射后2、4周3组间ColⅠA1 mRNA和蛋白表达量比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论在人增生性瘢痕裸鼠移植模型的瘢痕内注射ColⅠA1 ASODN可抑制ColⅠA1 mRNA及Ⅰ型胶原表达,促进瘢痕组织成熟、软化,脂质体可促进该抑制效果。

关键词： Ⅰ型前胶原基因反义寡核苷酸增生性瘢痕胶原裸鼠

人Ⅰ型前胶原基因反义寡核苷酸抑制增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成

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中国修复重建外科杂志 2009年第6期23卷 713-717页

作者：袁即山利天增祁少海江苏大学附属人民医院骨科江苏镇江212002 中山大学附属第一医院烧伤科

目的探讨阳离子脂质体介导Ⅰ型前胶原基因(ColⅠA1)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxyneucleotide,ASODN)转染对人增生性瘢痕成纤维细胞ColⅠA1表达的影响。方法取患者自愿捐赠瘢痕组织,采用组织块法培养人增生性瘢痕成纤维细胞并传代... 详细信息

目的探讨阳离子脂质体介导Ⅰ型前胶原基因(ColⅠA1)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxyneucleotide,ASODN)转染对人增生性瘢痕成纤维细胞ColⅠA1表达的影响。方法取患者自愿捐赠瘢痕组织,采用组织块法培养人增生性瘢痕成纤维细胞并传代。于6孔板内按32.25×104个/孔的密度接种第4代细胞,根据转染液不同分为4组:A组为脂质体加ColⅠA1 ASODN,B组为ColⅠA1 ASODN,C组为脂质体,D组为空白对照。转染后8h,1、2、3、4d分别提取细胞总RNA,行RT-PCR后测定ColⅠA1 mRNA表达量;胃酶消化法提取ECM中ColⅠA1蛋白,ELISA测定其浓度。结果扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测显示条带清晰,无杂带、明显的引物二聚体及拖尾现象。ColⅠA1 mRNA相对表达量:转染后8h,A组小于B、C、D组,B、C组小于D组,比较差异均有统计学意义(P0.05);转染后1d,A、B组小于C、D组(P0.05);转染后2d,各组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。ColⅠ蛋白浓度:转染后8h,A组小于B、C、D组,B、C组小于D组,比较差异均有统计学意义(P0.05);转染后1d,各组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论ColⅠA1 ASODN抑制ColⅠA1 mRNA和蛋白表达;阳离子脂质体作为载体有增强效果,促进ASODN进入细胞并在核内分布。

关键词： I型前胶原基因反义寡核苷酸增生性瘢痕胶原

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医院后勤智慧化运维体系的构建与应用

现代医院 2023年第1期23卷 117-119页

作者：刘阳萍吴耿祁少海中山大学附属第一医院广东广州510062

随着我国人口的不断增长与社会老龄化进程的逐渐加快,国内各级医疗单位作为响应社会医疗需求的公益性组织,面临着内部管理工作不断繁杂,大量人力物力成本的耗费,但管理效能提升却十分缓慢的困局,尤其对于医院后勤保障岗位,属于医疗单位... 详细信息

随着我国人口的不断增长与社会老龄化进程的逐渐加快,国内各级医疗单位作为响应社会医疗需求的公益性组织,面临着内部管理工作不断繁杂,大量人力物力成本的耗费,但管理效能提升却十分缓慢的困局,尤其对于医院后勤保障岗位,属于医疗单位的核心部门,上述问题更加突出。本文主要探讨医疗单位后勤智慧化运维体系的搭建与实践,分别从医疗单位后勤智慧化运维体系的构建、运维体系的优势、实践中的功能运用三个方面进行分析阐述。

关键词：医院后勤智慧化运维体系构建应用

国产医疗器械要着重提升创新能力——专访中山大学附属第一医院设备科科长祁少海

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医疗保健器具 2006年第3期13卷 7-7页

作者：冯琴昌常海庆祁少海中山大学附属第一医院设备科

记者:1984年你从东莞中学毕业.听说你有个特长,足球踢得很好,在读中学时,你是学校足球队的;在中山医读研究生期间,你还获得了卫生部属院校篮球锦标赛第一名.

关键词：国产医疗器械医院设备科创新能力研究生卫生部中山大学附属第一医院祁少海

积雪草苷对增生性瘢痕成纤维细胞增殖与Smad信号通路的影响

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中国修复重建外科杂志 2004年第4期18卷 291-294页

作者：潘姝利天增李叶扬谢举临徐盈斌祁少海陈晓东中山大学附属第一医院烧伤科广州510080 广州市红十字会医院

目的　研究积雪草苷对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及对 Smad信号通路的影响。　方法　采用组织块法培养人瘢痕成纤维细胞 ,将成纤维细胞分为用与不用积雪草苷两组 (实验组和对照组 ) ,4 8小时后采用逆转录 -聚合酶链反应 ( reverse transc... 详细信息

目的　研究积雪草苷对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及对 Smad信号通路的影响。　方法　采用组织块法培养人瘢痕成纤维细胞 ,将成纤维细胞分为用与不用积雪草苷两组 (实验组和对照组 ) ,4 8小时后采用逆转录 -聚合酶链反应 ( reverse transcription- polymerase chain reaction,RT- PCR)观察 Smad2及 Smad7m RNA表达量的改变。应用流式细胞仪分析、免疫细胞化学及蛋白印迹 ( Western blot)技术结合光密度扫描分析 ,观察积雪草苷对瘢痕成纤维细胞周期及磷酸化 Smad2和 Smad7的改变。　结果　实验组可见瘢痕中成纤维细胞从 S期进入 M期细胞减少 ,受到抑制 ;成纤维细胞中 Smad2的含量及 Smad2 m RNA的表达实验组较对照组改变不明显 ,但 Smad7的含量及 Smad7m RNA的表达实验组与对照组分别为 ( 1.33± 1.2 6 ) %、( 5 0 .80± 2 2 .4 0 ) %及 ( 9.15± 3.36 ) %、( 32 .18± 17.84 ) % ,二者两组差异均有统计学意义 ( P<0 .0 5 )。　结论　积雪草苷抑制瘢痕的作用是通过 Smad通路。

关键词：积雪草苷增生性瘢痕成纤维细胞增殖 Smad信号通路

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皮肤瘢痕癌临床及病理特点

广东医学 1998年第5期19卷 359-360页

作者：祁少海利天增中山医科大学附属第一医院烧伤科 510080

积雪草苷对烧伤创面愈合中细胞周期蛋白、增殖细胞核抗原表达的影响

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中华实验外科杂志 2005年第1期22卷 43-45,i002页

作者：张涛利天增祁少海徐盈斌谢举临中山大学附属第一医院烧伤科广州510080

目的　探讨积雪草苷 (asiaticoside)在烧伤创面愈合过程中对细胞周期蛋白B1(CyclinB1)、细胞周期蛋白C(CyclinC)及增殖细胞核抗原 (PCNA)表达的影响。方法　建立Waster大鼠深Ⅱ°自身对照烫伤模型 ,分为积雪草苷治疗组和对照组。采用免... 详细信息

目的　探讨积雪草苷 (asiaticoside)在烧伤创面愈合过程中对细胞周期蛋白B1(CyclinB1)、细胞周期蛋白C(CyclinC)及增殖细胞核抗原 (PCNA)表达的影响。方法　建立Waster大鼠深Ⅱ°自身对照烫伤模型 ,分为积雪草苷治疗组和对照组。采用免疫组织化学方法 ,检测创面愈合过程中CyclinB1、CyclinC及PCNA表达水平。结果　积雪草苷组在伤后第 3天开始有CyclinB1表达于基底细胞层。第 5天表达明显高于对照组 (P 0 .0 5 )。结论　积雪草苷能有效促进CyclinB1和PCNA的表达 ,使细胞周期的S +G2 期明显提前 ,从而加快细胞增殖 ,促进创面愈合。

关键词：表达水平对照组积雪草苷 PCNA 烧伤创面细胞周期蛋白增殖细胞核抗原细胞增殖