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姜黄素通过TGF-β/Smad和TGF-β/ERK途径对乳腺癌MDA-MB-231细胞MMP-9以及侵袭能力的影响

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姜黄素通过TGF-β/Smad和TGF-β/ERK途径对乳腺癌MDA-MB-231细胞M...

作者：磨娜重庆医科大学

学位级别：硕士

目的：通过研究姜黄素对转化生长因子-β （Transforming growthfactor-β，TGF-β1）诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞内基质金属蛋白酶-9（Matrix metallopeptidase-9, MMP-9）表达以及侵袭能力的影响，探讨TGF-β/Smad和（或）TGF-β/MAPKs信号通路在姜黄素抑制TGF-β1诱导的乳腺癌侵袭转移中可能存在的作用机制。方法：1. CCK-8法检测姜黄素对乳腺癌MDA-MB-231细胞的细胞毒性作用。 2．侵袭小室观察姜黄素对TGF-β1诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞内的侵袭能力的影响。 3. Western blot检测姜黄素对TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞内MMP-9的蛋白表达以及上游Smad2、ERK1/2、p38的磷酸化水平。 4.明胶酶谱法检测姜黄素对TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞上清液中MMP-9的活性变化。 5. Western blot和酶谱法检测姜黄素，ERK特异性抑制剂PD98059，p38特异性抑制剂SB203580对TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞MMP-9蛋白表达及活性变化。结果：1. CCK-8结果证实低浓度（≤10μM）姜黄素作用48h内，对乳腺癌MDA-MB-231细胞没有明显的细胞毒性作用（P＞0.05）;浓度大于10μM的姜黄素呈剂量，时间依赖性抑制细胞的生长（P＜0.05）。 2.侵袭小室检测显示姜黄素（≤10μM）呈剂量依赖性明显减少了TGF-β1诱导的细胞穿膜数量（P＜0.05）。 3. Western blot显示姜黄素（≤10μM）可显著抑制TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞MMP-9，p-Smad2，p-ERK1/2以及p-p38的蛋白表达，其抑制作用呈浓度，时间依赖性。 4.明胶酶谱法结果表明姜黄素（≤10μM）随浓度增加对TGF-β1诱导的MMP-9活性的抑制作用显著增强（P＜0.05）。 5. ERK特异性抑制剂PD98059（30μM）抑制MMP-9蛋白表达及活性的作用与姜黄素（10μM）相似，而p38特异性抑制剂SB203580（20μM）对MMP-9没有明显影响（P＞0.05）。结论：姜黄素可能通过TGF-β/Smad，TGF-β/ERK信号通路降低TGF–β1诱导的MMP-9表达及其活性，从而抑制MDA-MB-231细胞侵袭性。

关键词：姜黄素乳腺癌 TGF-β1 MMP-9 MAPK 侵袭

女性生殖道具有中肾管特征的增生性病变16例临床病理学分析

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中华病理学杂志 2022年第10期51卷 1000-1006页

作者：磨娜何春燕于海云边晓涛金玉兰首都医科大学附属北京妇产医院北京妇幼保健院病理科北京100006

目的探讨女性生殖道具有中肾管特征的增生性病变(PMF)的临床病理学特征。方法收集2016年10月至2022年1月首都医科大学附属北京妇产医院确诊的PMF病例16例,回顾性分析其临床病理资料,并复习相关文献。结果16例患者,年龄31~68岁,平均年龄5... 详细信息

目的探讨女性生殖道具有中肾管特征的增生性病变(PMF)的临床病理学特征。方法收集2016年10月至2022年1月首都医科大学附属北京妇产医院确诊的PMF病例16例,回顾性分析其临床病理资料,并复习相关文献。结果16例患者,年龄31~68岁,平均年龄53岁。中肾管增生5例,中肾腺癌4例,中肾样腺癌7例。5例中肾管增生均位于宫颈侧壁,由简单小管呈弥漫或小叶状成簇生长,无明显的间质反应。4例中肾腺癌主体位于宫颈或阴道壁外侧,由乳头状、筛孔状、实性等多种结构混合,细胞核具有类似于甲状腺乳头状癌核特点,有显著的间质反应,其中1例(1/4)宫颈中肾腺癌周围伴局灶细胞非典型性的中肾管增生。5例宫体和2例卵巢的中肾样腺癌与中肾腺癌具有相似的形态学特征,但癌旁均未发现中肾管残件/中肾管增生。此外,4例(4/5)宫体中肾样腺癌由内膜面向肌层浸润,其中1例病变与正常子宫内膜腺上皮移行;1例(1/5)宫体中肾样腺癌位于深肌层,周围可见子宫腺肌症病灶;2例卵巢中肾样腺癌均伴子宫内膜异位囊肿/子宫内膜样囊腺瘤,其中1例可见异位子宫内膜腺上皮向异型中肾管样上皮过渡。所有中肾管增生和中肾腺癌病例均不同程度阳性表达GATA3、PAX8、CD10,阴性表达雌激素受体、孕激素受体及甲状腺转录因子1(TTF1)。尽管中肾样腺癌与中肾腺癌的免疫组织化学表达模式类似,但不同的是,所有7例中肾样腺癌均有TTF1的表达,并与GATA3存在反向染色。结论PMF是一类具有中肾管形态学和免疫表型特征的罕见的增生性病变谱系,其诊断与鉴别诊断依赖于对病变发生的部位、镜下形态、伴随的良性和/或非典型性病变以及免疫组织化学表达等方面的综合考量。

关键词：肿瘤子宫卵巢诊断,鉴别

姜黄素对转化生长因子-β1诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞基质金属蛋白酶-9表达及其侵袭能力的影响

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中国生物制品学杂志 2012年第10期25卷 1329-1335页

作者：磨娜曹友德蒋金李静重庆医科大学基础医学院病理教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的研究姜黄素对转化生长因子-β1(Transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)诱导的人乳腺癌MDA-MB-231细胞基质金属蛋白酶-9(Matrix metallopeptidase-9,MMP-9)表达及其侵袭能力的影响,探讨姜黄素在防治TGF-β1诱导的乳腺癌侵袭转移中可能的作用机制。方法采用CCK-8法检测姜黄素对MDA-MB-231细胞的细胞毒性作用。将MDA-MB-231细胞分为阴性对照组(无血清RPMI1640培养基/DMSO)、TGF-β1处理组(无血清RPMI1640培养基/DMSO+10 ng/ml TGF-β1),姜黄素+TGF-β1处理组(无血清RPMI1640培养基+5、7.5、10μmol/L姜黄素+10 ng/ml TGF-β1)。处理24 h后,采用侵袭小室试验观察细胞的侵袭能力;处理不同时间后,采用Western blot法检测细胞MMP-9、p-Smad2、p-ERK1/2以及p-p38的表达,明胶酶谱法检测各组细胞上清液中MMP-9的活性变化;以ERK特异性抑制剂PD98059、p38特异性抑制剂SB202580、姜黄素和/或TGF-β1处理细胞48 h,采用Western blot和明胶酶谱法检测MMP-9的表达。结果低浓度姜黄素(≤10μmol/L)对MDA-MB-231细胞无明显的细胞毒性作用;姜黄素呈剂量依赖性明显减少了TGF-β1诱导的细胞穿膜数量(P<0.001);姜黄素可显著抑制TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞MMP-9、p-Smad2、p-ERK1/2及p-p38蛋白的表达,且呈浓度、时间依赖性(P<0.05);姜黄素随浓度的增加,对TGF-β1诱导的MDA-MB-231细胞MMP-9活性的抑制作用明显增强(P<0.05);PD98059抑制MMP-9蛋白表达及活性的作用与姜黄素相似,而SB202580对MMP-9无明显影响。结论姜黄素可能通过TGF-β/Smad、TGF-β/ERK信号通路下调TGF-β1诱导的MMP-9的表达及其活性,从而抑制肿瘤的侵袭能力。

关键词：姜黄素乳腺癌转化生长因子-β1 基质金属蛋白酶-9 绝裂原活化的蛋白激酶肿瘤侵润

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女性生殖道中肾腺癌临床病理及分子特征分析

现代妇产科进展 2024年第5期33卷 327-331,339页

作者：靳琼磨娜詹阳韩超徐小红首都医科大学附属北京妇产医院/北京妇幼保健院妇瘤科北京100006 首都医科大学附属北京妇产医院/北京妇幼保健院病理科北京100006

目的:探讨女性生殖道中肾腺癌的临床特点、组织病理学形态及免疫表型和分子特征。方法:收集2014年1月至2023年12月于首都医科大学附属北京妇产医院确诊的女性生殖道中肾腺癌5例(宫颈中肾腺癌4例及阴道中肾腺癌1例),回顾分析其临床病理... 详细信息

目的:探讨女性生殖道中肾腺癌的临床特点、组织病理学形态及免疫表型和分子特征。方法:收集2014年1月至2023年12月于首都医科大学附属北京妇产医院确诊的女性生殖道中肾腺癌5例(宫颈中肾腺癌4例及阴道中肾腺癌1例),回顾分析其临床病理资料。结果:5例患者平均年龄55岁(49~63岁)。主要临床表现为异常阴道出血。4例宫颈中肾腺癌均在术前行宫颈活检,但未明确诊断为中肾腺癌。患者均行根治性全子宫切除+双侧附件切除+盆腔淋巴结清扫±腹主动脉旁淋巴结切除术,术前和(或)术后行以铂类为基础的化疗±放疗±抗血管生成治疗。4例宫颈中肾腺癌诊断为FIGOⅠb1~Ⅱb期,1例阴道中肾腺癌诊断为Ⅲ期。宫颈中肾腺癌肿瘤主体位于宫颈管壁深层,肿瘤周边存在中肾管残余/中肾管增生。5例中肾腺癌的免疫组化染色结果基本一致,阳性表达PAX8、GATA3、CD10,并阴性表达TTF-1、ER及PR,且4例为TP53野生型。1例宫颈中肾腺癌和1例阴道中肾腺癌均存在KRAS基因突变,突变位点分别为p.G12D及p.G12A。平均随访51个月(18~115月),1例阴道中肾腺癌患者在随访13个月时发生肺转移。结论:女性生殖道中肾腺癌是起源于中肾管残留或增生的罕见恶性肿瘤。中肾腺癌极易误诊,结合PAX8、GATA-3、CD10、ER、PR及TTF-1等免疫组化特征有助于明确诊断。中肾腺癌常与KRAS/NRAS的分子改变有关,为疾病的分子靶向治疗提供了依据。

关键词：中肾腺癌宫颈癌阴道癌诊断 KARS

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姜黄素诱导肺癌A549细胞凋亡

激光杂志 2012年第4期33卷 58-60页

作者：蒋金曹友德磨娜李静莫显刚重庆医科大学基础医学院病理教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 贵阳医学院附属医院综合病房贵阳550004

目的:研究姜黄素对A549细胞凋亡的诱导作用,并探讨其可能的分子机制。方法:姜黄素处理A549细胞后,MTT法于不同时间点检测A549细胞的增殖情况;姜黄素处理A549细胞48h后,流式细胞术(Flow CytoMetry,FCM)检测A549细胞的凋亡率;30μmol/L姜... 详细信息

目的:研究姜黄素对A549细胞凋亡的诱导作用,并探讨其可能的分子机制。方法:姜黄素处理A549细胞后,MTT法于不同时间点检测A549细胞的增殖情况;姜黄素处理A549细胞48h后,流式细胞术(Flow CytoMetry,FCM)检测A549细胞的凋亡率;30μmol/L姜黄素处理A549细胞24h、48h、72h后,RT-PCR、Western-Blot检测A549细胞中P53、Bcl2、Bax和Caspase-3基因的表达水平。结果:姜黄素对肺癌A549细胞增殖的抑制作用具有显著的浓度-时间依赖关系,30μmol/L姜黄素可诱导A549细胞凋亡。30μmol/L姜黄素作用A549细胞24h即可引起A549细胞中P53、Bax和Caspase-3表达水平的上调,48h后可引起Bcl2表达水平的下调,诱导A549细胞凋亡。结论:30μmol/L姜黄素可诱导A549细胞凋亡,其机制可能与促进P53、Bax和Caspase-3基因的表达,抑制Bcl2基因的表达有关。

关键词：姜黄素细胞凋亡 P53

靶向SATB1基因的短发夹RNA诱导肺癌A549细胞凋亡

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肿瘤 2012年第7期32卷 501-506页

作者：蒋金曹友德磨娜莫显刚重庆医科大学基础医学院病理教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 贵阳医学院附属医院综合病房贵阳550004

目的:探讨靶向SATB1(special AT-rich sequence-binding protein-1)基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对肺癌A549细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法:构建靶向SATB1基因的shRNA重组质粒SATB1-shRNA,采用脂质体法将其转染至A549细胞;分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测A549细胞中SATB1、Bcl-2、BaxmRNA和SATB1、Bcl-2、Bax、caspase3蛋白的表达水平;FCM检测A549细胞的凋亡率。结果:成功构建了SATB1-shRNA重组质粒;SATB1-shRNA转染A549细胞后,SATB1、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达下调,Bax mRNA和Bax、caspase3蛋白表达上调(P<0.05)。SATB1-shRNA转染组细胞凋亡率[(14.18±1.59)%]较对照组[(1.84±0.57)%]明显增加(P<0.01)。结论:SATB1-shRNA可显著下调肺癌A549细胞中SATB1基因的表达水平并诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2基因表达所引起的级联效应有关。

关键词：肺肿瘤 RNA,小分子干扰细胞凋亡基因,SATB1

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苯并噻唑类比率型荧光探针的合成及性能研究

苯并噻唑类比率型荧光探针的合成及性能研究

作者：磨玲娜中南大学

学位级别：硕士

2-（2-羟基苯基）苯并噻唑（HBT）光化学性能稳定,在紫外光照射下可以发生激发态分子内质子转移（Excited state intramolecular proton transfer, ESIPT）过程,引起烯醇式和酮式的互变异构,发射双重荧光峰,具有较大的斯托克斯位移,可... 详细信息

2-（2-羟基苯基）苯并噻唑（HBT）光化学性能稳定,在紫外光照射下可以发生激发态分子内质子转移（Excited state intramolecular proton transfer, ESIPT）过程,引起烯醇式和酮式的互变异构,发射双重荧光峰,具有较大的斯托克斯位移,可用作荧光探针分子的荧光母体。本论文基于HBT荧光染料,利用ESIPT或ICT原理,分别设计合成了对亚硫酸根、氟离子具有专一响应的比率型荧光探针。基于ESIPT和分子内电荷转移（intramolecular charge transfer, ICT）原理,设计合成了2-（2-羟基-4-醛基苯基）苯并噻唑HB-Ⅰ,利用亚硫酸根对醛基的加成反应,实现了对亚硫酸根的选择性检测。该荧光探针属于比率型,与亚硫酸根反应后荧光光谱蓝移79nm,同时HB-Ⅰ对亚硫酸根检测响应时间短,具有较好的选择性和较高的灵敏度,检测下限为0.11μM。基于ESIPT和ICT原理,设计合成了一种可同时检测氟离子和亚硫酸根的双功能比率型荧光探针HB-Ⅱ。探针HB-Ⅱ结构中包含的叔丁基二甲基硅醚基和丙烯腈部分,分别对亚硫酸根、氟离子的识别产生不同的荧光响应信号。当向探针溶液中加入氟离子后,探针的荧光光谱从498nm红移至634nm;当向探针溶液中加入亚硫酸根后,探针的荧光光谱从498nm蓝移至371nm。该荧光探针对氟离子和亚硫酸根的检测均具有良好的选择性和灵敏度。

关键词： 2-（2-羟基苯基）苯并噻唑比率型荧光探针亚硫酸根氟离子

siRNA下调EIF4E基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和周期的影响

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肿瘤 2011年第3期31卷 197-202页

作者：孙阳阳曹友德叶维霞磨娜重庆医科大学基础医学院病理教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的:应用小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)乳腺癌MDA-MB-231细胞中真核细胞翻译起始因子4E (eukaryotic translation initiation factor 4E, EIF 4E )基因的表达,探讨其对乳腺癌细胞增殖和生长周期的影响。方法:构建针对EIF 4E 基因的siRNA表达质粒,采用脂质体法将表达质粒pGPU6/GFP/Neo-EIF4E转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞;分别采用RT-PCR、Western 印迹法和免疫细胞化学法检测转染EIF4E siRNA后, 对MDA-MB-231细胞中EIF4E及cyclinD1 mRNA和蛋白的表达水平的影响;MTT法、平板克隆形成实验和FCM检测MDA-MB-231细胞增殖活性、克隆形成率及细胞周期。结果:成功构建EIF4E siRNA表达质粒。RT-PCR、Western 印迹法和免疫细胞化学法检测结果显示,MDA-MB-231细胞中EIF4E及cyclinD1 mRNA和蛋白表达均明显下降(P <0.05)。转染EIF4E siRNA组细胞生长缓慢,集落形成数明显减少,与空白对照组和转染空载体组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。FCM检测结果显示,EIF4E siRNA转染组G1期细胞所占百分比为(71.30±0.47)%, 较空白对照组的( 53.10±0.43)%明显增加,而S期细胞所占百分比为(12.53±0.13)%,较空白对照组的(26.47±0.38)%明显减少(P<0.05)。结论:EIF4E siRNA可显著下调EIF4E基因在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达水平,在一定程度上抑制乳腺癌细胞的增殖,有可能成为临床治疗乳腺癌的靶点之一。

关键词：乳腺肿瘤 RNA,小分子干扰细胞凋亡真核细胞翻译起始因子细胞,MDA-MB-231

姜黄素通过P53/P21/PCNA/eIF4E信号通路抑制A549细胞增殖

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第三军医大学学报 2012年第1期34卷 49-53页

作者：蒋金曹友德磨娜李静莫显刚重庆医科大学基础医学院病理学教研室分子医学与肿瘤研究中心 400016 贵阳医学院附属医院综合病房 550004

目的研究姜黄素对A549细胞增殖的抑制作用,并探讨其可能的分子机制。方法不同浓度姜黄素处理A549细胞后,分别用平板克隆形成实验、MTT法检测A549细胞的克隆形成数和增殖。20μmol/L姜黄素处理A549细胞24、48、72 h后,FCM检测细胞周期;RT... 详细信息

目的研究姜黄素对A549细胞增殖的抑制作用,并探讨其可能的分子机制。方法不同浓度姜黄素处理A549细胞后,分别用平板克隆形成实验、MTT法检测A549细胞的克隆形成数和增殖。20μmol/L姜黄素处理A549细胞24、48、72 h后,FCM检测细胞周期;RT-PCR、Western blot检测P53、P21、PCNA及eIF4E mRNA和蛋白的表达水平。结果 20μmol/L姜黄素可引起A549细胞S期阻滞,抑制细胞增殖,减少细胞的克隆形成数。20μmol/L姜黄素作用A54924 h后P53、P21 mRNA和蛋白表达上调,48 h或72 h后变得尤明显。此外,20μmol/L姜黄素处理A549细胞48 h后可引起PCNA、eIF4E mRNA和蛋白表达水平下调,72 h后尤明显。结论姜黄素可抑制A549的克隆形成数和细胞增殖,其机制可能与姜黄素促进P53和P21基因表达,抑制PCNA和eIF4E基因表达有关。

关键词：姜黄素细胞周期细胞增殖 P53