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辅助病毒依赖型腺病毒载体转基因的体外表达效率

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生物工程学报 2010年第8期26卷 1108-1115页

作者：郑娴娴何金生付远辉徐少华谢灿石长信张梅王小波洪涛安徽医科大学免疫学教研室合肥230032 北京交通大学生命科学与生物工程研究院北京100044 Division of Hernatology-Oncology Mayo ClinicScottsdale AZ 85259USA 中国疾病预防控制中心病毒病蓣防控制所北京100052

构建可表达增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的辅助病毒依赖型腺病毒载体(Helper-dependent adenoviral vector,HDAd),并完成大量制备、纯化和体外表达鉴定。荧光显微镜证实HDAd/EGFP可表达,电镜下观察到经CsCl纯化后的腺病毒的典型形态。分光光度计法测定病毒的浓度为4.0×1012颗粒数(Virus particle,vp)/mL。与可表达EGFP的第一代腺病毒载体(First generation adenoviral vector,FGAd)FGAd/EGFP进行了体外感染和转基因表达效率的比较研究,分别用约2000vp/细胞的HDAd/EGFP和FGAd/EGFP感染A549细胞,流式细胞仪检测EGFP的表达情况。通过相同时间点流式细胞仪分析EGFP的表达情况,可见HDAd/EGFP感染早期的A549细胞较FGAd/EGFP有更高的荧光表达率及更高的表达强度,显示HDAd载体具有转基因瞬时高表达的特性,是一种更有价值的疫苗载体。

关键词：辅助病毒依赖型腺病毒载体第一代腺病毒载体增强型绿色荧光蛋白转基因表达

7型腺病毒疫苗株76.5～87mu核苷酸序列分析

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中华实验和临床病毒学杂志 1998年第3期12卷 201-206页

作者：石长信温乐英中国预防医学科学院病毒学所北京

目的获得７型腺病毒疫苗株（Ａｄ７ｖ）７６５－８７ｍｕ核苷酸序列，分析该区段的基因结构和功能。方法从Ａｄ７疫苗株克隆出６８－８７ｍｕ核苷酸片段，应用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧法进行核苷酸序列分析。结果Ａｄ７ｖ７６５～８７ｍ... 详细信息

目的获得７型腺病毒疫苗株（Ａｄ７ｖ）７６５－８７ｍｕ核苷酸序列，分析该区段的基因结构和功能。方法从Ａｄ７疫苗株克隆出６８－８７ｍｕ核苷酸片段，应用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧法进行核苷酸序列分析。结果Ａｄ７ｖ７６５～８７ｍｕ核苷酸序列长度为３５５７ｂｐ，推测此片段编码Ｅ３区１２１ｋＤ、１９２ｋＤ、２０１ｋＤ、２０５ｋＤ、１０３ｋＤ和１５２ｋＤ蛋白的一部分。所编码的６个蛋白与Ａｄ７原型株（Ａｄ７ｐ）和Ａｄ７ｈ（１９８６年以来南美流行的毒株）核苷酸高度同源（大于９７２％）。１６１ｋＤ蛋白由于缺失一个核苷酸，造成移码突变，编码提前终止。编码７７ｋＤ蛋白的ＯＲＦ由于缺失一段核苷酸而提前终止编码。

关键词： 7型腺病毒克隆序列分析疫苗

可表达人呼吸道合胞病毒融合蛋白辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建与制备

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微生物学报 2007年第4期47卷 682-685页

作者：杨兵何金生石长信张梅虞结梅谢灿陆燕燕付远辉彭向雷洪涛安徽医科大学免疫学教研室 Division of Hematology-Oncology Mayo ClinicScottsdale AZ 85259USA 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京交通大学生物科学与技术研究所

构建可表达A亚型人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytialvirus,RSV)融合蛋白(fusion protein,F)的辅助病毒依赖型腺病毒载体(helper-dependent adenoviral vector,HDAd),并完成大量制备、纯化和F蛋白的体外表达鉴定。将带有CMV启动子序列的F基因亚克隆至克隆载体pSC11,鉴定正确后,克隆至HDAd质粒pSC15B,构建pSC15B/F HDAd重组质粒,PmeⅠ消化pSC15B/F去除原核复制元件及抗性基因,获得HDAd/F DNA分子,经磷酸钙共沉淀法转染293Cre4细胞,16h后感染辅助病毒,收获HDAd/F载体粗提液,随后以HDAd/F粗提液及辅助病毒连续共感染293Cre4细胞直至HDAd/F达到复制极限,同时以可表达β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,LacZ)报告基因的HDAdLacZ载体作为平行对照监测载体复制过程。与辅助病毒共感染293Cre4细胞进一步扩增HDAd/F、CsCl梯度法超速离心制备大量纯化的HDAd/F载体,体外感染293细胞,RT-PCR检测到F基因有转录,Western blot分析表明F蛋白有特异性表达。总之,成功构建HDAd/F载体并在真核细胞中实现表达,为体内免疫学效力试验奠定基础,为研制RSV疫苗提供了一种新方法。

关键词：辅助病毒依赖型腺病毒载体人呼吸道合胞病毒融合蛋白逆转录聚合酶链式反应免疫印迹

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5型腺病毒载体的改建

中华实验和临床病毒学杂志 1999年第1期13卷 20-22页

作者：石长信周伟温乐英洪涛中国预防医学科学院病毒学研究所形态室

腺病毒载体是一个良好的真核表达载体，已有多种外源基因在５型腺病毒载体得到表达。病毒学研究所形态室八十年代中期从国外引进了Ｅ３区缺失的５型腺病毒载体，并应用该载体表达了Ｂ组轮状病毒第５基因和乙型肝炎表面抗原基因，在使用... 详细信息

腺病毒载体是一个良好的真核表达载体，已有多种外源基因在５型腺病毒载体得到表达。病毒学研究所形态室八十年代中期从国外引进了Ｅ３区缺失的５型腺病毒载体，并应用该载体表达了Ｂ组轮状病毒第５基因和乙型肝炎表面抗原基因，在使用过程中发现该载体有以下缺点，１．载...

关键词： 4型腺病毒载体腺病毒 β-半乳糖苷酶

表达流行性感冒病毒血凝素蛋白的重组腺病毒的构建

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病毒学报 2000年第3期16卷 203-206页

作者：张立国郭元吉温乐英曾革非王敏董婕郭俊峰石长信张智清中国预防医学科学院病毒学研究所北京100052

用RT PCR方法扩增流感病毒血凝素基因 ,将其克隆到 5型腺病毒载体质粒 pAd5C中。用此质粒与EcoRI酶切回收的 5型腺病毒基因组大片段共转染 2 93细胞 ,通过PCR初步筛选得到重组病毒。SDS PAGE电泳、West ernblot证明重组病毒能表达流感... 详细信息

用RT PCR方法扩增流感病毒血凝素基因 ,将其克隆到 5型腺病毒载体质粒 pAd5C中。用此质粒与EcoRI酶切回收的 5型腺病毒基因组大片段共转染 2 93细胞 ,通过PCR初步筛选得到重组病毒。SDS PAGE电泳、West ernblot证明重组病毒能表达流感病毒的血凝素蛋白。此重组病毒经滴鼻免疫Balb/C小鼠 ,ELISA实验证明能诱导小鼠产生针对流感病毒的循环抗体IgG和分泌型抗体IgA。本实验证明 ,利用E3区缺失的 5型腺病毒载体可以用来表达流感病毒血凝素抗原 ,重组抗原具有良好的免疫原性。

关键词：流感病毒血凝素重组疫苗腺病毒载体粘膜免疫

7型腺病毒疫苗株87mu-97.4mu片段核苷酸序列分析

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中华实验和临床病毒学杂志 1998年第2期12卷 101-104页

作者：周杰昊屈建国石长信彭瑚洪涛中国预防医学科学院病毒学研究所

目的获得７型腺病毒（Ａｄ７）疫苗株８７ｍｕ－９７．４ｍｕ核苷酸序列，分析该区段的基因结构和功能。方法应用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧法进行核苷酸序列分析。结果Ａｄ７疫苗株８７ｍｕ－９７．４ｍｕ全长３６９８个核苷酸，推测编码纤维... 详细信息

目的获得７型腺病毒（Ａｄ７）疫苗株８７ｍｕ－９７．４ｍｕ核苷酸序列，分析该区段的基因结构和功能。方法应用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧法进行核苷酸序列分析。结果Ａｄ７疫苗株８７ｍｕ－９７．４ｍｕ全长３６９８个核苷酸，推测编码纤维蛋白（３２５个氨基酸）和Ｅ３区１５．４ｋＤ蛋白，Ｅ４区５个蛋白（ＯＲＦ１４．２，ＯＲＦ１５．７，ＯＲＦ８．１，ＯＲＦ４２．８和ＯＲＦ１０．３）。

关键词：腺病毒 7型腺病毒克隆序列分析核苷酸

陶行知教育理念在高职院校电工课程教学中的应用

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陶行知教育理念在高职院校电工课程教学中的应用

2024年高等教育发展论坛

作者：高长信江苏省昆山第二中等专业学校

陶行知教育理念在高职院校电工课程教学中的应用具有重要意义。本文通过尊重学生的主体地位,注重实践和动手能力培养,以及培养学生创新思维和解决问题的能力三个方面,探讨了陶行知教育理念在电工课程中的应用。研究表明,陶行知教育理念... 详细信息

陶行知教育理念在高职院校电工课程教学中的应用具有重要意义。本文通过尊重学生的主体地位,注重实践和动手能力培养,以及培养学生创新思维和解决问题的能力三个方面,探讨了陶行知教育理念在电工课程中的应用。研究表明,陶行知教育理念的应用可以提高学生的学习兴趣和积极性,增强学生的实践能力和创新能力,并提升教师的教学水平和教育质量。

关键词：陶行知教育理念高职院校电工课程教育

来源： cnki会议评论

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宋心仿蜂业发展基金会成立5周年工作回顾

蜜蜂杂志 2024年第8期44卷 60-62页

作者：刘长信陈达希宋心仿蜂业发展基金会

2019年8月14日宋心仿蜂业发展基金会在济南召开了成立大会。5年来，宋心仿蜂业发展基金会在理事会及各级主管部门的领导、支持下，以“服务蜂农，发展蜂业”为己任，以致力于慈善事业、服务蜂行业发展为宗旨，紧紧抓住救危扶贫和蜂产业...

2019年8月14日宋心仿蜂业发展基金会在济南召开了成立大会。5年来，宋心仿蜂业发展基金会在理事会及各级主管部门的领导、支持下，以“服务蜂农，发展蜂业”为己任，以致力于慈善事业、服务蜂行业发展为宗旨，紧紧抓住救危扶贫和蜂产业发展两大目标，强化战时心态，不断开拓创新，工作取得了显著成绩。1坚持发展理念，夯实工作基础基金会自2019年成立以来，已经经历了5个年度的持续运行，整体形势稳中有升，成功举办了多项活动，获得了来自主管部门、蜂农朋友、蜂行业从业人员的认可与支持。

关键词：

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掺氢天然气管网数值仿真轻量化算法

天然气工业 2024年第2期44卷 156-165页

作者：石国赟宇波北京石油化工学院机械工程学院北京市安全生产工程技术研究院北京航空航天大学航空发动机研究院

目前针对管网数值仿真算法的优化主要集中在代数方程组的求解上。针对管网流动数值仿真算法提升计算效率方案中缺少针对封闭关系与状态方程的优化,分析了目前优化方案各模块的耗时情况,发现了仿真程序中耗时模块为封闭关系与状态方程求... 详细信息

目前针对管网数值仿真算法的优化主要集中在代数方程组的求解上。针对管网流动数值仿真算法提升计算效率方案中缺少针对封闭关系与状态方程的优化,分析了目前优化方案各模块的耗时情况,发现了仿真程序中耗时模块为封闭关系与状态方程求解。最后,结合计算机库函数的缺点以及现代CPU中SIMD (Single Instruction Multiple Data)模型的特点,提出了针对封闭关系与状态方程的轻量化算法,并验证了算法的高效性。研究结果表明:(1)封闭关系与状态方程模型中的耗时原因为直接调用库函数的次幂运算、指数运算、对数运算以及除法运算;(2)由于次幂运算效率远低于其他运算,通过变换消除了模型中几乎所有的次幂运算;(3)利用SIMD指令来计算指数运算与对数运算,实现了在单核CPU上同时计算多个数据的指数与对数,最后通过数学变换将所有除法转换为乘法;(4)轻量化算法加速效果显著,其整体加速比为18,而在状态方程求解模块的加速比更是高达70以上。结论认为,该轻量化算法在不影响计算精度的条件下提高了计算速度,对于提高掺氢天然气管网在线仿真与智能管网的建设具有重要的理论价值和技术支撑。

关键词：天然气管网数值仿真计算效率状态方程加速比掺氢