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人FL-FEN-1基因功能的初步研究

中国病理生理杂志 2000年第10期16卷 172-173页

作者：石斌山余应年浙江大学医学院!浙江杭州310031

目的:FEN-1是一种结构特异性核酸酶,它识别特定的核酸分叉结构,并切除含有游离5'末端的单链核酸.FEN-1具有对DNA复制和修复都必需的双重功能.对酵母和体外实验的研究表明,在DNA复制过程中,FEN-1去除了冈崎片段前端RNA引物的最后一个核... 详细信息

目的:FEN-1是一种结构特异性核酸酶,它识别特定的核酸分叉结构,并切除含有游离5'末端的单链核酸.FEN-1具有对DNA复制和修复都必需的双重功能.对酵母和体外实验的研究表明,在DNA复制过程中,FEN-1去除了冈崎片段前端RNA引物的最后一个核糖核苷;在DNA修复中,FEN-1参与了损伤碱基的修复过程.方法和结果:采用反义核酸技术,从人FEN-1表达质粒hPET-FCH经双酶切得到1084 bp的hFEN-1片段,反向克隆入采用经改建的哺乳动物表达载体pMAMneoAmp ,并得到hFEN-1反义表达质粒pMAMneoAmp FNB .采用改进的磷酸钙介导的细胞转染法,将pMAMneoAmp FNB 和pMAMneoAmp 质粒分别导入FL细胞,用含400 μg/mL G418的MEM完全培养基筛选,分别得到FL-FEN 和FL-M细胞.细胞生长曲线的测定发现,FL-FEN-1 在地塞米松的诱导下,细胞生长速度明显下降,细胞倍增时间TD为3.03 d,而FL和仅含有空载体的FL-M细胞在地塞米松存在下的细胞倍增时间TD分别为2.03 d和2.22 d,不经地塞米松诱导的FL-FEN-1 细胞的TD为2.38 d.采用流式细胞仪对细胞周期的研究表明,在地塞米松诱导下,用不含精氨酸的MEM培养48 h同步化处理后,FL-FEN-1 细胞的S期百分比为9.95%,而FL和FL-M细胞分别为26.31%和23.07%.采用DEAE介导的细胞转染法将穿梭质粒pZ189分别转染经地塞米松诱导的FL、FL-M和FL-FEN-1 细胞,以Hirt's法提取质粒并转化大肠杆菌MBM7070,得到的自发突变率依次为3.91/104、7.79/104和14.4/104.结论:在哺乳动物细胞中FEN-1基因在DNA复制和细胞繁殖的过程中起着重要作用,并且可能参与维持细胞DNA遗传稳定性的过程.

关键词：细胞转染表达质粒 FL-FEN-1 地塞米松氟甲去氢氢化可的松

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臭鼩酯酶和苹果酸脱氢酶同工酶的电泳研究

兽类学报 1993年第1期13卷 25-30页

作者：石斌山诸葛阳杭州大学生物系杭州310012

用聚丙烯酰胺凝胶薄层(0.5毫米)等电聚焦电泳分析了臭鼩(Suncus ***)的心肌、骨骼肌、肾脏、脾脏、肝脏和脑6种组织器官的酯酶和苹果酸脱氢酶同工酶。结果表明臭鼩6种组织的酯酶同工酶分别具有11—24条酶带,存在着明显的组织特异性。实... 详细信息

用聚丙烯酰胺凝胶薄层(0.5毫米)等电聚焦电泳分析了臭鼩(Suncus ***)的心肌、骨骼肌、肾脏、脾脏、肝脏和脑6种组织器官的酯酶和苹果酸脱氢酶同工酶。结果表明臭鼩6种组织的酯酶同工酶分别具有11—24条酶带,存在着明显的组织特异性。实验还发现其醋酶同工酶存在异型酶。臭鼩6种组织的苹果酸脱氢酶同工酶则未发现存在明显的组织特异性。

关键词：臭Qu 酯酶苹果酸脱氢酶同功酶

臭鼩血清蛋白和六种组织乳酸脱氢酶同工酶的研究

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兽类学报 1991年第2期11卷 126-130页

作者：石斌山诸葛阳杭州大学生物系

本实验对臭鼩的血清蛋白及心肌、骨骼肌、肾脏、脾脏、肝脏,睾丸6种组织器官的乳酸脱氢酶(LDH)同工酶进行了聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳的分析研究。臭鼩血清蛋白存在15—17条带,各组织的LDH同工酶均由5条带构成,其中心肌LDH-1、LDH-2和肾脏... 详细信息

本实验对臭鼩的血清蛋白及心肌、骨骼肌、肾脏、脾脏、肝脏,睾丸6种组织器官的乳酸脱氢酶(LDH)同工酶进行了聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳的分析研究。臭鼩血清蛋白存在15—17条带,各组织的LDH同工酶均由5条带构成,其中心肌LDH-1、LDH-2和肾脏LDH-1各出现1条亚带。

关键词：臭Ju 血清蛋白乳酸脱氢酶同功酶

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浙江西部山区珍稀雉类生态学研究

杭州大学学报（自然科学版） 1989年第3期16卷 302-309页

作者：丁平诸葛阳石斌山杭州大学生物学系

浙西山区雉类栖息地的植被类型、分布高度存在差异,其主要活动地有季节性变化,并和月降水量相关。黄腹角雉在浙江西部分布于金衢盆地以南,白颈长尾雉、白鹇和勺鸡在浙西山区均有分布。对该山区秋季和春季的雉类密度进行调查,秋季捕获率... 详细信息

浙西山区雉类栖息地的植被类型、分布高度存在差异,其主要活动地有季节性变化,并和月降水量相关。黄腹角雉在浙江西部分布于金衢盆地以南,白颈长尾雉、白鹇和勺鸡在浙西山区均有分布。对该山区秋季和春季的雉类密度进行调查,秋季捕获率以勺鸡最高(4.58‰),白颈长尾雉次之(1.42‰),白鹇最低(0.39‰)。春季遇见率勺鸡为0.15只/小时,白鹇为0.175只/小时,白颈长尾雉仅0.063只/小时。白颈长尾雉和白鹇存在正关联的种间关系,而其他雉类间不存在关联。植被群落的演替可导致雉类群落的变化,主要表现在雉类的种类组成和数量的波动等几方面。70年代至80年代浙西雉类资源持续下降。

关键词：雉生态学浙江种群生态

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浙江西部山区白鹇生态的初步研究

动物学杂志 1992年第3期27卷 20-23页

作者：丁平姜仕仁石斌山鲍毅新诸葛阳杭州大学生物系 310012 浙江师范大学生物系

1982—1987年在浙西的开化、衢州、建德、淳安等地对白鹇的生态进行了调查。白鹇分布于全省植被良好的山区,活动于乔木层覆盖率较高的针阔混交林和针叶林等生境,其种群密度受林下灌木层盖度的影响。白鹇的冬季食物以壳斗科植物为主,取... 详细信息

1982—1987年在浙西的开化、衢州、建德、淳安等地对白鹇的生态进行了调查。白鹇分布于全省植被良好的山区,活动于乔木层覆盖率较高的针阔混交林和针叶林等生境,其种群密度受林下灌木层盖度的影响。白鹇的冬季食物以壳斗科植物为主,取食频度为53.5％,干重百分比达72.48％;同时也取食一定量的昆虫等动物性食物,取食频度达40％。白鹇的冬季食物可分为三种类型:1.最喜食食物,取食频度在50％以上;2.喜食食物,取食频度在10—40％;3.偶食食物,取食频度小于10％。

关键词：白鹇生态

钱塘江河口滩涂围垦区农田小兽种群分布格局初步研究

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杭州大学学报（自然科学版） 1992年第3期19卷 320-326页

作者：丁平石斌山诸葛阳鲍毅新杭州大学生物学系浙江师范大学生物系

1987年8月和1989年8月对钱塘江河口滩涂围垦区农田小型兽类的调查得知,农田小兽各种群的分布格局均为负二项分布.种群集聚度的大小依次为黄毛鼠、黑线姬鼠、臭鼩和大麝鼩。在6种不同的农田类型中,各种群的集聚度有异,呈现不同的分布格局... 详细信息

1987年8月和1989年8月对钱塘江河口滩涂围垦区农田小型兽类的调查得知,农田小兽各种群的分布格局均为负二项分布.种群集聚度的大小依次为黄毛鼠、黑线姬鼠、臭鼩和大麝鼩。在6种不同的农田类型中,各种群的集聚度有异,呈现不同的分布格局.种群的集聚度与种群的密度、栖息地生境及群落结构之间都存在相互的影响.

关键词：滩涂围垦区小型兽类分布格局

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FL-FEN-1-细胞的建立

癌变．畸变．突变 1999年第6期11卷 288-289页

作者：石斌山余应年浙江大学医学院病理生理教研室杭州310031

目的：ＦＥＮ－１是一种结构特异性核酸酶，它识别特定的核酸分叉结构，并切除含有游离５’末端的单链核酸。ＦＥＮ－１具有对ＤＮＡ复制和修复都必需的双重功能。目前有关ＦＥＮ－１在高等动物和人类中的系统研究尚无报道。本实验采用... 详细信息

目的：ＦＥＮ－１是一种结构特异性核酸酶，它识别特定的核酸分叉结构，并切除含有游离５’末端的单链核酸。ＦＥＮ－１具有对ＤＮＡ复制和修复都必需的双重功能。目前有关ＦＥＮ－１在高等动物和人类中的系统研究尚无报道。本实验采用反义核酸技术，得到ＦＥＮ－１基因表达被阻断的哺乳动物细胞ＦＬ－ＦＥＮ－１－，为进一步在哺乳动物细胞水平上研究ＦＥＮ－１基因在ＤＮＡ复制和修复过程中的作用提供基础。方法：１ｈＦＥＮ－１反义表达质粒的构建　ＦＥＮ－１表达质粒ｈＰＥＴ－ＦＣＨ经ＮｃｏⅠ和ＢａｍＨⅠ双酶切，得到１０８４ｂｐ的ｈＦＥＮ－１片段，经Ｋｌｅｎｏｗ补平后两端接上ＳａｌⅠ连接头，作为连接反应的外源片段。表达载体采用经改建的哺乳动物表达载体ｐＭＡＭｎｅｏＡｍｐ，以ＳａｌⅠ酶切，并用ＣＩＰ脱磷酸化，将外源片段和载体片段以Ｔ４连接酶连接过夜，转化感受态ＤＨ５α酶切，酶切筛选转化子，得到ｈＦＥＮ－１反义表达质粒ｐＭＡＭｎｅｏＡｍｐＦＮＢ。２细胞转染及筛选　细胞的转染采用改进的磷酸钙介导的细胞转染法，将ｐＭＡＭｎｅｏＡｍｐＦＭＢ和ｐＭＡＭｎｅｏＡｍｐ质粒分别导入ＦＬ细胞，用含４００μｇ／ｍｌＧ４１８的ＭＥＭ完全培养基筛选，分别得...

关键词： FEN-1 特异性核酸酶病理生理学

FEN-1基因对细胞周期和遗传稳定性的影响

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生物化学与生物物理学报 2001年第3期33卷 309-314页

作者：石斌山余应年蔡朱男沈炳辉浙江大学医学院病理生理教研室!杭州310031 City of Hope National Medical Center and Beckman Research Institute!Duart CA910103000USA

结构特异性核酸酶FEN 1在DNA复制和修复 ,以及维持细胞遗传稳定性方面都起着重要作用。采用RT PCR方法 ,证实了FEN 1基因阻断细胞 (FL FEN 1-)通过FEN 1反义mRNA片段的表达 ,阻断了FEN 1基因。应用流式细胞仪对FL FEN 1-细胞进行细胞周... 详细信息

结构特异性核酸酶FEN 1在DNA复制和修复 ,以及维持细胞遗传稳定性方面都起着重要作用。采用RT PCR方法 ,证实了FEN 1基因阻断细胞 (FL FEN 1-)通过FEN 1反义mRNA片段的表达 ,阻断了FEN 1基因。应用流式细胞仪对FL FEN 1-细胞进行细胞周期分析 ,发现FL FEN 1-细胞进入S期DNA合成的过程被延缓 ,并发生了G1期的阻滞。在由穿梭质粒 pZ189介导的突变试验中 ,质粒在FL FEN 1-细胞中复制后 ,其SupFtRNA基因的自发突变频率为 19.1× 10 4 ,而对照细胞FL和FL M细胞分别为 2 .9× 10 4 和 3.0× 10 4 ,但FL FEN 1-细胞经甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)诱发后的非定标突变频率与对照细胞并无明显差异 ,这表明由FEN 1阻断造成的突变频率升高与细胞在受低浓度MNNG攻击后发生的非定标突变可能通过不同的途径形成。FL FEN 1-细胞对MNNG的敏感性高于对照细胞

关键词： FEN-1 细胞周期遗传不稳定性非定标突变 MNNG敏感性

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咖啡因、茶碱对家蝇毒性的研究

浙江大学学报（理学版） 1988年第4期24卷 466-471页

作者：张贞华石斌山

1985年,我们进行了咖啡因(1、3、7三甲基黄嘌呤)、茶碱(1、3二甲基黄嘌呤),对家蝇(Musca domestic vicina Macq)的毒性试验,实验结果能证明这两种药物对家蝇都是有毒性的,但茶碱对家蝇的毒性亚于咖啡因。用喂食法测定咖啡因的毒力。随... 详细信息

1985年,我们进行了咖啡因(1、3、7三甲基黄嘌呤)、茶碱(1、3二甲基黄嘌呤),对家蝇(Musca domestic vicina Macq)的毒性试验,实验结果能证明这两种药物对家蝇都是有毒性的,但茶碱对家蝇的毒性亚于咖啡因。用喂食法测定咖啡因的毒力。随着处理组浓度的增高,家蝇的死亡率也上升0.5％高浓度,家蝇的死亡率可达100％.0.2％浓度,已接近半致死浓度。羽化后8—10小时的家蝇,以0.1％浓度喂食72小时,多次重复试验,结果表明药剂对家蝇生育有一定影响:产卵量减少,卵巢的发育受抑制,卵的孵化率下降,产卵期缩短,此外,用聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳,分析家蝇的血淋巴蛋白也有差异。

关键词：家蝇咖啡因茶碱