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苦荞黄酮醇合酶同源基因FtFLS1-5的功能研究

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苦荞黄酮醇合酶同源基因FtFLS1-5的功能研究

作者：石冠蓝四川农业大学

学位级别：硕士

苦荞是一种兼具药用和保健功能的小杂粮,芦丁含量是其主要的质量性状和经济指标。黄酮醇合酶(FLS)及其同源基因是苦荞芦丁合成和积累的关键酶和限制因素,其转录强度、编码产物的催化特征是引起苦荞黄酮醇种类和含量差异的重要原因。本... 详细信息

苦荞是一种兼具药用和保健功能的小杂粮,芦丁含量是其主要的质量性状和经济指标。黄酮醇合酶(FLS)及其同源基因是苦荞芦丁合成和积累的关键酶和限制因素,其转录强度、编码产物的催化特征是引起苦荞黄酮醇种类和含量差异的重要原因。本研究以5条苦荞黄酮醇合酶基因Ft FLS1-5为研究对象,分析苦荞全生长期Ft FLS1-5的时空表达模式和黄酮类物质含量的相关性;采用转基因技术,鉴定其在拟南芥中的生物学活性,分析其对拟南芥黄酮合成相关基因表达和代谢产物积累的影响;采用原核表达亲和层析技术,分离纯化重组Ft FLS1-5蛋白并利用HPLC技术测定其体外催化特征。本研究初步阐明了苦荞Ft FLS1-5的分子特征,鉴定了其在拟南芥体外内的活性,明晰了苦荞黄酮醇合成支路的主效基因,为未来进行高芦丁苦荞的分子育种提供理论依据和基础材料。主要结果如下:1.基于苦荞转录组和基因组测序结果,对Ft FLS1-5分子特征进行分析。结果表明,苦荞基因组中有5条FLS同源序列,其ORF与Ft FLS1-5一致。Ft FLS1和Ft FLS2定位于苦荞第7号染色体,且属于串联重复序列;Ft FLS3定位于苦荞第2号染色体,Ft FLS4定位于苦荞第3号染色体;Ft FLS5定位于苦荞第1号染色体。序列分析显示,Ft FLS1、Ft FLS2、Ft FLS3和Ft FLS5均含有3个外显子和2个内含子,Ft FLS4含有2个外显子和1个内含子;Ft FLS1-5的外显子序列同源性为75.7%,而内含子在数目、大小、位置和碱基序列差异较大,显示出苦荞FLS同源基因在进化和功能分化中存在差异。基于参与苦荞黄酮代谢的2-ODD蛋白的进化树分析结果表明,Ft FLS1和Ft FLS3具有最近的系统发育关系,与典型的植物FLS聚为一簇;Ft FLS2与花青素合酶(ANS)具有相对接近的进化关系,Ft FLS5与黄烷酮3-羟化酶(F3H)归为一类,Ft FLS4独立于进化树中所有分支与其它Ft FLS及2-ODD蛋白关系较远。2.苦荞全生长期黄酮类物质测定结果表明,芦丁为苦荞主要的黄酮,从整体上看,叶片(1.22%)、花(1.46%)和种子(1.10%)中芦丁含量较高,根(0.044%)和茎(0.12%)中芦丁含量较低。花青素在苦荞幼苗期的茎中积累量最高(0.19%),在花期各组织花青素含量为0.026～0.074%,其余时期各组织花青素含量为0.017-0.078%。q RT-PCR结果显示,Ft FLS1-5在苦荞全生长期的各组织部位的表达具有时空和组织特异性。苦荞全生长期中,Ft FLS1的表达量随着生殖器官的分化急剧上调表达,并在Stage 5中的未成熟种子中达到顶峰,种子成熟时表达量略有下降;Ft FLS2和Ft FLS4的表达具有相似的模式,在未分化出生殖器官前(Stage 1～2),主要在苦荞幼苗的根和茎中表达,进入生殖阶段后在花和种子中表达且变化趋势不明显(P>0.05);Ft FLS3和Ft FLS5在苦荞全生长期各部位均有一定表达水平,其变化趋势不显著(P>0.05)。进一步分析苦荞全生长期Ft FLS1-5表达量与黄酮类物质含量进行相关性分析,结果表明,Ft FLS1在全生长期的表达量与总黄酮和芦丁含量成显著正相关,与花青素的含量成显著负相关,Ft FLS2和Ft FLS4的表达量与总黄酮、芦丁以及花青素含量的均无显著相关性关系。Ft FLS3和Ft FLS5在全生长期的表达量与总黄酮和芦丁含量成显著正相关,与花青素的含量无显著相关性关系。3.构建含有Ft FLS1-5的p CAMBIA1301植物表达载体,通过农杆菌感受态细胞GV3101的介导,采用浸花法将其转化花期拟南芥。通过抗性平板以及PCR筛选鉴定,获得T3代纯合阳性植株。表型观察结果显示,转Ft FLS1-5拟南芥植株较野生型抽薹更早,在花期之前植株较野生型高大。转基因拟南芥中,Ft FLS1-5的超表达均引起拟南芥总黄酮和芦丁含量的极显著提高(P<0.01);Ft FLS1超表达拟南芥中花青素含量显著提高(P<0.05),Ft FLS5超表达拟南芥中花青素含量显著降低(P<0.05),Ft FLS2-4超表达拟南芥中花青素含量与野生型相近。q RT-PCR结果表明,Ft FLS1超表达拟南芥中,内源性黄酮合成相关基因At PAL、At C4H、At4CL、At CHS、At CHI、At F3H、At F3’H、At DFR和At ANS的表达均得到显著上调(P<0.05);Ft FLS2超表达拟南芥中,拟南芥内源的At CHS和At FLS被显著的抑制(P<0.05);Ft FLS3超表达拟南芥中,At PAL、At C4H、At4CL、At CHS、At CHI、At F3’H、At F3H和At FLS等基因的表达量显著提高(P<0.05);Ft FLS4超表达拟南芥中,显著上调

关键词：苦荞黄酮醇合酶同源基因黄酮醇功能鉴定

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双有源桥串联谐振变换器的暂态过程与控制

中国电机工程学报 2024年第8期44卷 3189-3201,I0021页

作者：李卓蓝张宇强电磁工程与新技术国家重点实验室(华中科技大学电气与电子工程学院) 湖北省武汉市430074

基于移相控制的双有源桥串联谐振变换器(dual-bridge series resonant converter,DBSRC)在传输功率的快速调控过程中,移相角将发生较大的阶跃变化,导致谐振腔出现大幅度长时间的振荡过程,不仅严重恶化了变换器的动态性能,电路元件也会... 详细信息

基于移相控制的双有源桥串联谐振变换器(dual-bridge series resonant converter,DBSRC)在传输功率的快速调控过程中,移相角将发生较大的阶跃变化,导致谐振腔出现大幅度长时间的振荡过程,不仅严重恶化了变换器的动态性能,电路元件也会面临严重的过电压和过电流风险。该文首先基于基波分析法推导DBSRC暂态过程的通用计算模型,分析暂态过程中的振荡特性,精确估算暂态过程中的谐振电压峰值、谐振电流峰值以及暂态过渡时间,评估暂态过程中的过电压与过电流程度。基于暂态过程计算模型,提出一种振荡的抑制方法,使变换器在一个开关周期后能够到达新的稳定状态,有效地避免了过电压与过电流的风险,并且大幅改善了闭环控制的动态特性。最后,通过仿真与实验结果验证理论分析和所提出的控制方法。

关键词：双有源桥串联谐振变换器暂态过程暂态建模电压应力电流应力振荡抑制

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即刻种植中软组织移植的效果和技巧

中华口腔医学杂志 2024年第5期59卷 518-523页

作者：王宇蓝张玉峰武汉大学口腔医(学)院种植科武汉

即刻种植可减少治疗次数, 缩短缺牙时间, 但具有较高的美学风险。软组织移植可一定程度减少牙龈退缩风险, 提高即刻种植美学效果的可预期性和长期稳定性, 是目前研究的热点。全面了解即刻种植手术中使用软组织移植的循证依据和手术方法,... 详细信息

即刻种植可减少治疗次数, 缩短缺牙时间, 但具有较高的美学风险。软组织移植可一定程度减少牙龈退缩风险, 提高即刻种植美学效果的可预期性和长期稳定性, 是目前研究的热点。全面了解即刻种植手术中使用软组织移植的循证依据和手术方法, 能辅助临床诊疗决策和提高治疗效果。本文阐述即刻种植后的软硬组织变化、美学风险及危险因素, 对即刻种植中软组织移植的优势、时机、材料选择和常用临床术式进行阐述, 以期为临床医师提高即刻种植的效果提供参考。

关键词：牙种植即刻种植软组织移植结缔组织移植胶原蛋白生物材料牙龈退缩

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蓝明谷的救国之路(下)

台声 2024年第2期 64-71页

作者：蓝博洲

在北平，前“在日军服务之台湾人(被日军强迫征用的军夫或士兵)”与日军官兵区别后，一共115人，集中住宿于交道口一带的“前圆恩寺胡同20号”。北平军政当局派管理员1名与翻译官2名参与管理。台湾省旅平同乡会在成立之初，就把这批因...

在北平，前“在日军服务之台湾人(被日军强迫征用的军夫或士兵)”与日军官兵区别后，一共115人，集中住宿于交道口一带的“前圆恩寺胡同20号”。北平军政当局派管理员1名与翻译官2名参与管理。台湾省旅平同乡会在成立之初，就把这批因为抗战胜利而恢复自由的台湾省籍日俘组成台湾青年团；救济他们的生活，替他们“向同乡代募衣服，

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