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转红色荧光蛋白稻瘟菌的构建与分子分析

植物生理学报 2022年第5期58卷 972-980页

作者：田旭丹李亚丽应淑敏李利华李莘王岚岚龙文莉王教瑜瞿绍洪浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所杭州310021 浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所杭州310021 湖南农业大学植物保护学院长沙410128

水稻稻瘟病是水稻重要病害之一,研究稻瘟菌与水稻互作,对水稻稻瘟病防治具有重要意义。通过原生质体转化法将红色荧光蛋白基因RFP转化稻瘟菌菌株E2007046A-2,获得了6个稳定的转化子;通过继代培养,对转化子进行表型鉴定、DNA杂交、qRT-PC... 详细信息

水稻稻瘟病是水稻重要病害之一,研究稻瘟菌与水稻互作,对水稻稻瘟病防治具有重要意义。通过原生质体转化法将红色荧光蛋白基因RFP转化稻瘟菌菌株E2007046A-2,获得了6个稳定的转化子;通过继代培养,对转化子进行表型鉴定、DNA杂交、qRT-PCR分析,筛选出了产孢量较高、RFP和HPT稳定插入且高表达的转化菌株;在荧光显微镜下,观察到水稻细胞内表达红色荧光蛋白的侵染菌丝形成的侵染结构。本研究建立了稻瘟菌侵染水稻过程的可视化系统,为稻瘟菌与水稻互作提供了材料和研究基础。

关键词：稻瘟菌红色荧光蛋白水稻遗传转化

利用RFP标记进行水稻籼粳杂种偏分离的遗传分析

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浙江农业学报 2012年第2期24卷 189-192页

作者：刘中来李军瞿绍洪浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江杭州310021

为了研究水稻籼粳杂种偏分离的遗传基础,用转化红色荧光蛋白(RFP)的7个粳稻株系与籼稻杂交,以整合在不同基因组位点的RFP为可视遗传标记,对F1花粉及F2植株进行遗传分析。根据‘7F5’转基因系的研究结果,在粳稻‘日本晴’和籼稻‘9311’... 详细信息

为了研究水稻籼粳杂种偏分离的遗传基础,用转化红色荧光蛋白(RFP)的7个粳稻株系与籼稻杂交,以整合在不同基因组位点的RFP为可视遗传标记,对F1花粉及F2植株进行遗传分析。根据‘7F5’转基因系的研究结果,在粳稻‘日本晴’和籼稻‘9311’杂交的遗传背景中,水稻基因组chr02:33465170位置附近存在一个花粉偏分离位点。‘9A2’转基因系组配的籼粳杂种产生1∶1(RFP+∶RFP-)比例的花粉,并且其F2植株群体发生偏分离,说明相应RFP位点(chr04:29587748)附近有一个控制F2植株偏分离的连锁位点,该位点的遗传机制与F1的花粉比例无关。RFP标记提高了籼粳杂种花粉及后代植株的研究效率,为探索偏分离遗传机理提供了新的研究手段。

关键词：红色荧光蛋白转基因水稻籼粳杂种偏分离

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稻米外观品质的遗传研究

湖北大学学报（自然科学版） 1991年第4期13卷 373-379页

作者：瞿绍洪彭仲明湖北大学华中农业大学

采用华矮837、8216、桂朝2号、Dawn和Starbonnet77共5个籼稻品种配制完全双列杂交。测定F_1代和各亲本的米粒长度、米粒宽度、长/宽和垩白等级4个外观品质性状。按Hayman双列杂交法估算各性状的遗传参数,并对这4个性状进行基因型相关分析。

关键词：稻米水稻育种外观品质遗传

共转化水稻植株T-DNA共整合结构的分子分析

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分子植物育种 2013年第6期11卷 701-711页

作者：赵建华李亚丽刘中来瞿绍洪浙江师范大学化学与生命科学学院金华321004 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所杭州310021

为研究共转化水稻的T-DNA共整合结构，本研究利用分别含有HPT、GFP和mCherry基因的T—DNA载体共转化水稻，从共转化植株获得了22个由两种T—DNA共整合形成的串联结构和25个关于相同T—DNA的多拷贝结构。序列分析结果表明，相邻T-DNA通过... 详细信息

为研究共转化水稻的T-DNA共整合结构，本研究利用分别含有HPT、GFP和mCherry基因的T—DNA载体共转化水稻，从共转化植株获得了22个由两种T—DNA共整合形成的串联结构和25个关于相同T—DNA的多拷贝结构。序列分析结果表明，相邻T-DNA通过LRRL、RLLR和LRLR模式相互连接，由RB参与形成的T-DNA连接区均发生RB序列的完全缺失，在LB参与的T-DNA连接区，LB发生不同数目的碱基缺失或其3＇末端的1个C碱基发生C→T颠换，因而使T-DNA连接区表现多种变异类型。此外，伴随着RB或LB边界的完全缺失，其边界内侧序列也缺失1-643bp。在共转化水稻植株的T-DNA连接区不存在拟南芥相关报道所述的填充DNA序列。研究结果为深入解析禾谷类植物T—DNA共整合的分子机理奠定了重要基础。

关键词：共转化转基因水稻 T—DNA 共整合

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单粒稻米直链淀粉含量的测定方法

湖北大学学报（自然科学版） 1991年第2期13卷 166-169,183页

作者：瞿绍洪彭仲明湖北大学华中农业大学

本文介绍了测定单粒稻米直链淀粉含量的方法。并用此方法测定农垦58、CP231、IR26和BG90-2精米的直链淀粉含量,结果与IRRI的简化法测定结果相同。取相同米粒部位的样品进行分析,重复测定值的平均标准误差为±0.21％,最大标准误差为±0.9... 详细信息

本文介绍了测定单粒稻米直链淀粉含量的方法。并用此方法测定农垦58、CP231、IR26和BG90-2精米的直链淀粉含量,结果与IRRI的简化法测定结果相同。取相同米粒部位的样品进行分析,重复测定值的平均标准误差为±0.21％,最大标准误差为±0.95％。此外,讨论了单粒法在稻米品质遗传育种研究中的实际意义。

关键词：稻米单粒稻米直链淀粉含量测定

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杂交水稻三个基因位点的遗传研究

湖北大学学报（自然科学版） 1992年第4期14卷 378-384页

作者：宋国清瞿绍洪周勇吕新湖北大学生物系

研究了野败型杂交稻(Oryza Sativa L.)两个籼稻(Indica)组合三对性状的遗传特性及其基因位点间的相互关系。本研究中酯酶同工酶E12A的存在对缺如,芽鞘的紫色对绿色和柱头的紫色对绿色分别是显性。三对性状分别受三个基因位点的三对等位... 详细信息

研究了野败型杂交稻(Oryza Sativa L.)两个籼稻(Indica)组合三对性状的遗传特性及其基因位点间的相互关系。本研究中酯酶同工酶E12A的存在对缺如,芽鞘的紫色对绿色和柱头的紫色对绿色分别是显性。三对性状分别受三个基因位点的三对等位基因控制,表现出典型的孟德尔遗传特征。三个基因位点间存在着明显的连锁关系,其排列顺序是紫色芽鞘基因位点(Pc)——紫色柱头基因位点(Ps)——酯酶同工酶基因位点—3(Est—3)。

关键词：杂交稻酯酶同工酶基因水稻

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杂交早稻米质性状遗传的初步研究

湖北大学学报（自然科学版） 1992年第4期14卷 385-389页

作者：瞿绍洪宋国清周勇湖北大学生物系

测定武昌夏季和广西秋季栽培的杂交早稻新组合威优242F_1、F_2,汕优242F_1、F_2,威20B,珍汕97B和湖大242的糙米率、精米率、米粒长、米粒宽、粒形(长/宽)、垩白等级和碱消值。分析以上性状的F_2变异,估算垩白等级和碱消值的广义遗传力... 详细信息

测定武昌夏季和广西秋季栽培的杂交早稻新组合威优242F_1、F_2,汕优242F_1、F_2,威20B,珍汕97B和湖大242的糙米率、精米率、米粒长、米粒宽、粒形(长/宽)、垩白等级和碱消值。分析以上性状的F_2变异,估算垩白等级和碱消值的广义遗传力分别为52.26％和80.40％。同时研究了异地不同季别栽培条件对米质性状的影响。

关键词：杂交早稻遗传早稻水稻米质

水稻抗稻瘟菌HIGS表达载体的构建及遗传转化

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植物保护 2015年第3期41卷 73-78,114页

作者：王梦颖刘敬瞿绍洪王旭丽王国梁中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所杭州310021

水稻是我国主要粮食作物之一,而稻瘟病是影响水稻安全生产的最主要病害之一。为克服抗病基因的抗病性很快消失的弊端,本研究尝试了宿主诱导的基因沉默(HIGS)技术在创制抗稻瘟病水稻新材料上的可行性。HIGS是新发展起来的以RNAi为基础的... 详细信息

水稻是我国主要粮食作物之一,而稻瘟病是影响水稻安全生产的最主要病害之一。为克服抗病基因的抗病性很快消失的弊端,本研究尝试了宿主诱导的基因沉默(HIGS)技术在创制抗稻瘟病水稻新材料上的可行性。HIGS是新发展起来的以RNAi为基础的抗病技术,即在寄主植物中表达可沉默病原物特定基因的HIGS载体,达到控制病原菌扩展的目的。本研究选取了两个稻瘟菌致病关键基因Nox1和NAC为研究靶标,分别克隆其UTR区和CDS区中的特异区段,利用Gateway技术构建这4个片段HIGS表达载体,再利用农杆菌介导法将各载体分别转化水稻,通过鉴定得到转基因阳性植株,为后续开展该技术在水稻抗稻瘟病方面的深入研究奠定了基础。

关键词：水稻稻瘟病 HIGS 遗传转化

转mCherry基因水稻的遗传分析及T-DNA整合位点的研究

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分子植物育种 2012年第2期10卷 121-130页

作者：李亚丽刘中来周洁徐国娟瞿绍洪浙江师范大学化学与生命科学学院金华321004 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所杭州310021

为了建立转基因水稻的高通量遗传分析系统,本研究以粳稻成熟胚诱导的愈伤组织为受体材料,潮霉素磷酸转移酶(HPT)为抗性筛选标记,通过农杆菌介导的方法将红色荧光蛋白基因mCherry导入水稻。在水稻转化愈伤组织、转化植株(T0)和转基因后代... 详细信息

为了建立转基因水稻的高通量遗传分析系统,本研究以粳稻成熟胚诱导的愈伤组织为受体材料,潮霉素磷酸转移酶(HPT)为抗性筛选标记,通过农杆菌介导的方法将红色荧光蛋白基因mCherry导入水稻。在水稻转化愈伤组织、转化植株(T0)和转基因后代(T1)均检测到红色荧光,证实mCherry在转基因水稻中稳定表达。139个独立转化株系的遗传分析表明,mCherry在转基因后代表现多种遗传模式,54%的转基因株系呈单位点遗传。TAIL-PCR进一步验证转基因整合到水稻基因组。根据T-DNA整合位点DNA序列分析结果,T-DNA左边界发生碱基缺失、增加和替换,右边界只发生碱基缺失,说明左边界比右边界有更多的碱基变异类型。此外,对T2代植株mCherry和HPT的转录水平进行实时定量逆转录PCR分析,结果表明,mCherry和HPT转录水平因T-DNA在水稻基因组中的整合位置而变化,表现位置效应。本研究在mCherry荧光蛋白和其它相关方法的基础上,为转基因水稻遗传及分子分析建立了一个高效的流程体系。

关键词：水稻 mCherry 转基因 T-DNA 整合位点遗传分析