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人高活性粒细胞集落刺激因子cDNA克隆与鉴定

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中华血液学杂志 1993年第6期14卷 293-296页

作者：瞿成奎贺福初解放军军事医学科学院放射医学所北京

加温对小肠实质及间质微血管结构与功能的损伤

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军事医学科学院院刊 1994年第2期18卷 90-93页

作者：瞿成奎李元敏李鼎九军事医学科学院放射医学研究所河南肿瘤研究所

通过外置大鼠小肠局部加温损伤模型，研究了小肠局部加热损伤后实质结构与间质微血管结构和功能的变化。结果在明，小肠组织损伤表现早（２—６ｈ即有显著损伤），不同部位热损伤敏感性不同，远离肠系膜部位是热损伤最敏感部位，且绒毛... 详细信息

通过外置大鼠小肠局部加温损伤模型，研究了小肠局部加热损伤后实质结构与间质微血管结构和功能的变化。结果在明，小肠组织损伤表现早（２—６ｈ即有显著损伤），不同部位热损伤敏感性不同，远离肠系膜部位是热损伤最敏感部位，且绒毛的损伤明显重于隐窝。其敏感性不同与局部微血管结构和功能差异有密切关系。微血管结构与功能的损伤是实质细胞损伤加重的重要因素。由于热损伤时隐窝损伤较轻，因而再生修复发生早，能力强。

关键词：过热热敏感性小肠损伤修复术

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PCR技术在鉴定阳性重组子中的应用

军事医学科学院院刊 1995年第1期19卷 61-63页

作者：魏汉东瞿成奎贺福初吴祖泽军事医学科学院放射医学研究所北京100850

介绍了采用ＰＣＲ技术在人粒细胞集落刺激因子（ｈＧ－ＣＳＦ）、人促红细胞生成素（ｈＥＰＯ）及中国人ｙ一干扰素（ｈＩＦＮ－γ）ＣＤＮＡ重组质粒构建过程中快速鉴定阳性重组子的方法。经ＰＣＲ扩增鉴定为阳性的重组子，提取... 详细信息

介绍了采用ＰＣＲ技术在人粒细胞集落刺激因子（ｈＧ－ＣＳＦ）、人促红细胞生成素（ｈＥＰＯ）及中国人ｙ一干扰素（ｈＩＦＮ－γ）ＣＤＮＡ重组质粒构建过程中快速鉴定阳性重组子的方法。经ＰＣＲ扩增鉴定为阳性的重组子，提取质粒ＤＮＡ经重组位点相应的ＤＮＡ内切酶双酶切鉴定表明，全部含有插入片段。

关键词：聚合酶链反应阳性重组子鉴定干扰素

hG-CSF cDNA 5′端序列修饰对其在原核细胞中表达的影响

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中国科学（B辑） 1993年第9期23卷 955-959页

作者：瞿成奎贺福初刘福陆吴祖泽军事医学科学院放射医学研究所北京100850

本文设计并构建了人粒细胞集落刺激因子(hG-CSF)三种cDNA突变体表达质粒,对影响hG-CSF cDNA在大肠杆菌中表达效率的因素进行了探讨。指出cDNA 5′端起始密码子ATG的上、下游序列对其表达有显著影响。不同因素影响hG-CSF cDNA在大肠杆菌... 详细信息

本文设计并构建了人粒细胞集落刺激因子(hG-CSF)三种cDNA突变体表达质粒,对影响hG-CSF cDNA在大肠杆菌中表达效率的因素进行了探讨。指出cDNA 5′端起始密码子ATG的上、下游序列对其表达有显著影响。不同因素影响hG-CSF cDNA在大肠杆菌中表达效率的主要调控环节在转录水平;翻译水平的差别亦可能与其表达效率的不同有一定关系。

关键词： cDNA 突变体基因表达 hG-CSF

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用离心法从琼脂糖凝胶中回收DNA片段

军事医学科学院院刊 1993年第4期17卷 304-306页

作者：邢桂春贺福初瞿成奎吴祖泽军事医学科学院放射医学研究所

借助离心式层折柱,成功地从琼脂糖凝胶中分离0.287～23.13kb范围的DNA片段;所得片段经乙醇沉淀、溶解后可有效地用于酶切、连接与转化。此法设备要求简单,操作省时简便,得率在50%以上。

关键词： DNA片段分离离心法琼脂糖凝胶

hG－CSF　cDNA重组逆转录病毒的构建

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军事医学科学院院刊 1995年第4期19卷 241-244页

作者：瞿成奎魏汉东贺福初徐黎吴祖泽北京军事医学科学院放射医学研究所

通过ＤＮＡ重组技术，将不含非编码区的人粒细胞集落刺激因子（ｈＧ－ＣＳＦ）ｃＤＮＡ重组入逆转录病毒质粒ｐＬＸＳＮ中。重组质粒转染ＰＡ３１７细胞后，经Ｇ４１８筛选，抗性克隆细胞培养上清液能成功地感染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，使之... 详细信息

通过ＤＮＡ重组技术，将不含非编码区的人粒细胞集落刺激因子（ｈＧ－ＣＳＦ）ｃＤＮＡ重组入逆转录病毒质粒ｐＬＸＳＮ中。重组质粒转染ＰＡ３１７细胞后，经Ｇ４１８筛选，抗性克隆细胞培养上清液能成功地感染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，使之在筛选培养基中形成典型的Ｇ４１８抗性克隆。该克隆细胞染色体中成功地整合了ｈＧ－ＣＳＦｃＤＮＡ，并且表达了有生物学活性的ｈＧ－ＣＳＦ产物。

关键词：脱氧核糖核酸逆转录病毒科基因转移

重组人粒细胞集落刺激因子杂合蛋白的分离纯化与复性研究

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军事医学科学院院刊 1993年第3期17卷 161-165页

作者：瞿成奎贺福初吴祖泽刘福陆军事医学科学院放射医学研究所

大肠杆菌中表达的rhG—CSF经过包涵体纯化及DEAE—Sepharose CL—6B、Sephacryl S—200两步连续层析纯化,纯度达90%。纯化样品经复性处理,生物活性得以恢复,免疫印迹试验阳性。

关键词：集落刺激因子杂合蛋白纯化复性

人G-CSF突变体cDNA在大肠杆菌中的高效表达

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科学通报 1994年第6期39卷 557-560页

作者：瞿成奎贺福初吴祖泽刘福陆徐黎北京放射医学研究所北京100850

人粒细胞生长因子(hG-CSF)应用前景非常广阔,它对于治疗各种原因引起的粒细胞减少症具有显著疗效.利用基因工程技术生产是大量获取有药用价值hG-CSF的一条重要途径.国外文献报道,由于自身结构特点,hG-CSF天然cDNA在大肠杆菌中很难获得... 详细信息

人粒细胞生长因子(hG-CSF)应用前景非常广阔,它对于治疗各种原因引起的粒细胞减少症具有显著疗效.利用基因工程技术生产是大量获取有药用价值hG-CSF的一条重要途径.国外文献报道,由于自身结构特点,hG-CSF天然cDNA在大肠杆菌中很难获得高效表达,因此,构建其突变体,并在不同启动子控制下进行表达研究,以期实现其在大肠杆菌中的高效表达是hG-CSF基因工程研究的核心课题.

关键词： cDNA 突变体 hG-CSF 大肠杆菌

外源基因在大肠杆菌中高效表达的转录与转录后调控

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高技术通讯 1993年第2期3卷 38-41页

作者：瞿成奎贺福初吴祖泽军事医学科学院放射医学研究所

70年代发展起来的DNA重组技术给生物学、医学带来了一场革命性变化,基因工程高效表达技术使得很多从自然界很难或不能获得的蛋白质多肽得以大规模制备。大肠杆菌作为外源基因的表达宿主,遗传背景清楚,技术操作简便,研究周期短,培养条件... 详细信息

70年代发展起来的DNA重组技术给生物学、医学带来了一场革命性变化,基因工程高效表达技术使得很多从自然界很难或不能获得的蛋白质多肽得以大规模制备。大肠杆菌作为外源基因的表达宿主,遗传背景清楚,技术操作简便,研究周期短,培养条件简单,大规模发酵经济,因此倍受分子遗传学家们的重视。目前,大肠杆菌是应用最广泛、最成功的高效表达体系,并常常作为高效表达研究的首选体系。自80年代以来,以大肠杆菌作为宿主表达真核cDNA、细菌毒素及病毒抗原基因,为人

关键词：高效表达外源基因大肠杆菌大肠埃希氏菌埃希氏杆菌属强启动子起始密码子起译密码子宿主菌调控调节控制