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血红素加氧酶-1对肝窦内皮细胞增殖及促肝再生表型的影响

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中华肝胆外科杂志 2022年第7期28卷 536-541页

作者：袁博明廷凤瞿思铭黄汉飞曾仲林杰昆明医科大学第一附属医院器官移植中心昆明650032

目的研究血红素加氧酶-1(HO-1)对肝窦内皮细胞(LSECs)增殖、迁移及促肝细胞增殖作用的影响。方法雄性6~8周龄无特定病原体级C57BL/6小鼠18只,行部分肝切除,组织免疫荧光检测术后0、2、4 d残肝内细胞增殖及HO-1表达。以携带HO-1基因的腺... 详细信息

目的研究血红素加氧酶-1(HO-1)对肝窦内皮细胞(LSECs)增殖、迁移及促肝细胞增殖作用的影响。方法雄性6~8周龄无特定病原体级C57BL/6小鼠18只,行部分肝切除,组织免疫荧光检测术后0、2、4 d残肝内细胞增殖及HO-1表达。以携带HO-1基因的腺病毒转染LSECs细胞系(HO-1组),同时以空载体腺病毒转染和未转染细胞为对照。另外建立不同转染组LSECs与肝细胞系非接触共培养模型,评价HO-1表达对肝细胞的促增殖作用。Western印迹及实时定量聚合酶链反应检测各组细胞HO-1、分化抑制因子1(Id1)、肝细胞生长因子(HGF)、Wnt2蛋白和mRNA表达水平变化,EdU法检测各组细胞增殖,Transwell迁移实验检测细胞迁移能力变化。结果相比小鼠肝切除术后0 d,术后4 d再生肝内LSECs开始大量增殖并伴随LSECs内HO-1表达明显升高。HO-1组LSECs的EdU阳性率(27.20±4.80)%高于空载体组(12.47±3.30)%和未转染对照组(15.97±2.50)%,HO-1组LSECs迁移数量(258.70±36.56)个高于空载体组(122.00±38.16)个和对照组(107.70±30.01)个(均为5个200×视野),HO-1组HO-1、Id1、HGF、Wnt2蛋白及mRNA表达水平均高于空载体组与对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。HO-1组LSECs共培养的肝细胞EdU阳性率(18.33±2.52)%高于空载体组(11.33±1.53)%与对照组(11.70±2.08)%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论上调HO-1表达能够促进小鼠LSECs增殖、迁移以及增强LSECs对肝细胞的促增殖作用。

关键词：肝再生内皮细胞肝细胞血红素加氧酶-1

HO-1对小鼠肝窦内皮细胞缺氧—复氧损伤保护作用的实验研究

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HO-1对小鼠肝窦内皮细胞缺氧—复氧损伤保护作用的实验研究

作者：瞿思铭昆明医科大学

学位级别：硕士

[背景]缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion injurry,IRI）是出现在肝脏移植手术中常见的病理生理过程,细胞在缺血缺氧过程中发生溶解、凋亡,严重影响了移植肝功能。早期再灌注损伤机制包括Kupffer细胞活化、肝细胞膨胀及肝脏微循环... 详细信息

[背景]缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion injurry,IRI）是出现在肝脏移植手术中常见的病理生理过程,细胞在缺血缺氧过程中发生溶解、凋亡,严重影响了移植肝功能。早期再灌注损伤机制包括Kupffer细胞活化、肝细胞膨胀及肝脏微循环功能障碍,而肝窦内皮细胞（liver sinusoidal endothelial cells,LSEC）在调节肝脏微循环中占据了主要地位。研究表明,在肝脏IRI时LSEC是最先发生功能异常的细胞,早期LSEC结构和功能的损伤是构成肝脏IRI病理发生发展的基础。因此,有效的保护LSEC活性和功能是减轻IRI的关键。近年来,具有细胞保护作用的血红素氧合酶-1（heme oxygenase 1,HO-1）成为了研究热点。HO-1亦称热休克蛋白32,作为细胞氧化应激最敏感的指标,在炎症、缺氧、放射等损伤过程中,通过上调表达量调节细胞促炎因子释放和抑制细胞凋亡,从而发挥细胞保护作用。以往研究表明,诱导HO-1高表达能够显著减轻肝脏缺血再灌注损伤,其机制之一可能是通过抑制Kupffer细胞分泌炎症介质及抗细胞凋亡等作用保护肝脏。但现阶段关于LSEC在肝脏缺血再灌注损伤中表达HO-1的情况尚不清楚,特别是HO-1对LSEC保护作用的研究尚未见报道。[目的]本研究采用HO-1过表达腺病毒载体行小鼠LSEC体外转染,通过“低血清、缺氧-复氧”培养方法建立体外小鼠LSEC缺血再灌注损伤模型,探讨LSEC缺氧-复氧损伤后,HO-1对LSEC的保护作用。[方法]1、实验分组:将LSEC随机分为以下6组,空载体腺病毒转染组（enhanced green fluorescent protein group,EGFP 组）;HO-1 腺病毒转染组（heme oxygenase 1 group,HO-1组）;空白对照组（control group,细胞不进行任何腺病毒转染）,将以上三组接受不同干预的细胞分别进行缺氧-复氧（H-R）培养和常氧（Normoxia）培养,即 H-R 干预下的 control、EGFP 和 HO-1 组;Normoxia 干预下的 control、EGFP 和 HO-1 组。2、腺病毒转染效率检测:选取生长汇合度达80%～90%的LSEC分别进行空载体腺病毒转染和HO-1高表达腺病毒转染。在转染48小时后,用倒置荧光显微镜观察细胞转染后的荧光显色及转染效率;用RT-qPCR和Western blot检测细胞转染后HO-1的mRNA和蛋白表达水平。3、模型建立:当细胞生长汇合大于80%时,更换低血清（＜5%）细胞培养基,将细胞放于37℃,N2体积分数为95%、C02体积分数为5%的混合气体培养箱中进行缺氧培养6小时,随后放回37℃,空气体积为95%、CO2体积分数为5%的混合气体培养箱中进行复氧培养24小时,完成LSEC体外缺血再灌注损伤模型的建立。空白对照组置于常氧细胞培养箱（37℃,空气体积分数95%、C02体积分数5%）中培养。4、ELISA检测细胞因子释放:实验模型建立完成后,收集细胞培养液,.离心后选取培养上清液,根据小鼠ELISA试剂盒分别进行IL-6、TNF-α表达水平检测。5、流式细胞学检测细胞凋亡:实验模型建立完成后,弃去细胞培养液,加入Annexin V/Alexa Fluor647检测试剂,通过流式细胞分析仪进行LSEC凋亡率检测。.6、CCK-8检测细胞活性:根据CCK-8细胞活性检测试剂盒操作说明,对完成缺氧-复氧损伤后的LSEC活性进行检测。7、RT-qPCR法检测:检测小鼠LSEC中HO-1mRNA水平的表达量。8、Western blot法检测:检测小鼠LSEC中HO-1蛋白水平的表达量。9、统计学分析:所有数据采用Windows XP操作系统,SPSS 13.0统计分析软件对数据进行统计分析,组间差异采用双因素方差分析,均数之间用独立样本的t检验。结果用均数±标准误（x±SEM）表示,以P＜0.05表示差异有统计学意义。[结果]1、腺病毒转染效率:HO-1高表达腺病毒在最佳剂量（MOI=80）转染LSEC时,转染效率大于80%,且细胞形态保持稳定,并能在LSEC中显著表达HO-1 mRNA和蛋白,差异具有统计学意义（P＜0.05）。2、ELISA 检测结果:H-R 干预组（control、EGFP 和 HO-1 组）LSEC 的 IL-6和TNF-α水平都高于Normoxia干预组（control、EGFP和HO-1组）,（每组n =6,*P＜0.05 和**P＜0.01）。与 EGFP 组相比,HO-1 组上清液的 IL-6 和 TNF-α水平显著降低（###P＜0.001）。3、流式细胞检测细胞凋亡结果:HO-1组相比于EGFP组（H-R干预后）凋亡细胞数量减少（每组n = 3,**P＜0.01）。4、CCK-8检测细胞活性结果:EGF

关键词：血红素氧合酶-1 肝窦内皮细胞小鼠缺血再灌注损伤

肝窦内皮细胞介导肝再生与纤维化平衡的研究进展

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中华肝胆外科杂志 2021年第7期27卷 545-548页

作者：袁博瞿思铭黄汉飞曾仲昆明医科大学第一附属医院器官移植中心昆明650032

肝窦内皮细胞(LSECs)在维系肝窦微循环以维持肝脏稳态中发挥了积极作用,同时在肝损伤修复中又介导了肝再生和纤维化平衡。急性肝损伤后,LSECs是肝脏修复性再生的调控者,而慢性肝损伤时,异常激活的LSECs促进了肝纤维化的发展。本文就近年... 详细信息

肝窦内皮细胞(LSECs)在维系肝窦微循环以维持肝脏稳态中发挥了积极作用,同时在肝损伤修复中又介导了肝再生和纤维化平衡。急性肝损伤后,LSECs是肝脏修复性再生的调控者,而慢性肝损伤时,异常激活的LSECs促进了肝纤维化的发展。本文就近年来LSECs介导肝再生与纤维化平衡的研究进展综述,旨在为LSECs靶向治疗肝纤维化和促进肝再生的研究提供新思路。

关键词：内皮细胞肝切除术肝再生肝纤维化

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天麻素在肝脏损伤中的应用及其研究进展

中国现代应用药学 2017年第2期34卷 298-300页

作者：瞿思铭曾仲昆明医科大学第一附属医院器官移植中心昆明650032

天麻素以其多重功效集一身的特点,被普遍应用于临床疾病的辅助治疗当中,在心脑血管领域的疗效较为突出。随着对天麻素研究的不断深入,目前很多学者开始关注天麻素在肝脏损伤中的应用,本文就近年来天麻素在各类肝脏损伤中的应用作一综述... 详细信息

天麻素以其多重功效集一身的特点,被普遍应用于临床疾病的辅助治疗当中,在心脑血管领域的疗效较为突出。随着对天麻素研究的不断深入,目前很多学者开始关注天麻素在肝脏损伤中的应用,本文就近年来天麻素在各类肝脏损伤中的应用作一综述,为进一步开发利用提供理论基础。

关键词：天麻素研究进展肝损伤肝脏脂肪变性

胆道镜联合钬激光碎石与部分肝切除治疗Ⅰ型肝内胆管结石对比分析

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重庆医学 2017年第A1期46卷 145-148页

作者：吴朴曾仲袁博瞿思铭段键昆明医科大学第一附属医院云南昆明650032

目的探讨应用胆道镜联合钬激光碎石治疗I型肝内胆管结石的手术方法、疗效在治疗I型肝内胆管结石方面的优势。方法回顾性分析该院2012年8月至2016年6月收治的53例I型肝内胆管结石患者的临床资料，分为研究组（28倒）好对照组（25例）。... 详细信息

目的探讨应用胆道镜联合钬激光碎石治疗I型肝内胆管结石的手术方法、疗效在治疗I型肝内胆管结石方面的优势。方法回顾性分析该院2012年8月至2016年6月收治的53例I型肝内胆管结石患者的临床资料，分为研究组（28倒）好对照组（25例）。研究组行胆道镜联合钬激光碎石治疗，对照组行部分肝叶切除治疗。结果研究组患者中Ⅳ级胆管中存在少量细小结石2例，因胆道镜不能进入无法取出细小结石，结石取净率为92．8％，术后肝功能轻度受损（AST〈50IU／L、ALT〈45IU／L），无感染、胆漏、胆道大出血等严重并发症。对照组患者中Ⅲ级或Ⅳ级胆管中存在少量细小结石2例，结石取净率为92．0％，肝功能受损2例（AST〉120IU／L、ALT〉120IU／L），术后感染2例，胆漏2例。研究组患者手术时间、手术失血量、术后平均住院时间、术后并发症发生率均明显优于对照组，差异均有统计学意义（P〈o．05）。两组患者结石取净率比较差异无统计学意义（P〉0．05）。研究组患者术后随访1年B超复查未发现结石复发。结论胆道镜联合钬激光碎石治疗I型肝内胆管结石精准、微创、手术操作方法简单、安全、可靠、疗效确切，适合临床推广应用。

关键词：钬激光肝叶切除 Ⅰ型肝内胆管结石精准医疗

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天麻素对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

中华肝胆外科杂志 2018年第9期24卷 625-629页

作者：袁博瞿思铭吴朴张洪斌黄汉飞曾仲晋力昆明医科大学第一附属医院器官移植中心昆明650032

目的探讨天麻素（Gas）对小鼠肝脏缺血再灌注损伤（HIRI）的作用及机制。方法40只C57BL／6雄性小鼠随机分为：假手术（Sham）组、HIRI组、天麻素低剂量（Gas—L）组、天麻素高剂量（Gas—H）组、钴原卟啉（CoPP）组，每组各8只。术前Gas... 详细信息

目的探讨天麻素（Gas）对小鼠肝脏缺血再灌注损伤（HIRI）的作用及机制。方法40只C57BL／6雄性小鼠随机分为：假手术（Sham）组、HIRI组、天麻素低剂量（Gas—L）组、天麻素高剂量（Gas—H）组、钴原卟啉（CoPP）组，每组各8只。术前Gas—L组、Gas—H组、CoPP组腹腔注射相应剂量药物。除Sham组外，其他组70％肝脏缺血60min再灌注6h。比较各组血清AST、ALT水平；检测肝组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）；实时荧光定量聚合酶链反应检测肝组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和10（IL-10）、血红素氧合酶-1（HO-1）的表达；肝组织苏木精-伊红染色；TUNEL法检测肝细胞凋亡。结果HIRI组、Gas—L组、Gas—H组和CoPP组ALT水平分别为（5057．34±290．80）U／L、（3917．49±198．10）U／L、（3645．63±171．10）U／L和（2977．78±179．00）U／L，AST分另0为（5871．25±819．01）U／L、（4660．88±505．96）U／L、（4182．25±507．51）U／L、（3788．65±462．14）U／L。Gas—L组、Gas—H组和CoPP组血清ALT、AST低于HIRI组，差异有统计学意义（P〈0．05）。Gas—L组、Gas—L组和CoPP组肝细胞凋亡指数分别为（37．89±4．27）％、（32．59±3．78）％、（20．45±2．49）％，低于HIRI组（58．92±3．32）％，差异有统计学意义（P〈0．05）。与HIRI组比较，Gas—L组、Gas-H组和CoPP组TNF—α和IL-6mRNA相对表达明显降低，IL-10和HO-1mRNA表达升高，SOD活性升高，MDA水平降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论天麻素通过抗炎、抗氧化和抗细胞凋亡的作用减轻小鼠HIRI，其机制可能与促进HO-1的表达有关。

关键词：天麻素肝脏缺血再灌注损伤血红素氧合酶-1

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不同血清型肉毒毒素受体结合域研究进展

微生物学报 2024年第7期 2172-2193页

作者：尹凡铭朱晨思李涛王慧牡丹江医学院公共卫生学院军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全全国重点实验室

肉毒毒素(botulinum neurotoxin, BoNT)是人类已知毒性最强的蛋白质之一，可以引起肌肉松弛麻痹，严重时可导致死亡。肉毒毒素共分为7种血清型(Bo NT/A-Bo NT/G)，根据氨基酸序列差异可进一步分为40多种亚型。肉毒毒素分子结构由3个基... 详细信息

肉毒毒素(botulinum neurotoxin, BoNT)是人类已知毒性最强的蛋白质之一，可以引起肌肉松弛麻痹，严重时可导致死亡。肉毒毒素共分为7种血清型(Bo NT/A-Bo NT/G)，根据氨基酸序列差异可进一步分为40多种亚型。肉毒毒素分子结构由3个基本结构域组成：重链羧基端细胞受体结合域、氨基端的易位域和轻链催化域。在运动神经元表面，受体结合域首先与聚唾液酸神经节苷脂结合，随后与突触囊泡蛋白2或突触囊泡结合蛋白结合形成双受体复合物。每种血清型的受体结合域都必须与其相应受体结合才能发挥作用。肉毒毒素的结构功能及其对宿主的作用一直都是研究热点。近年来，因受体结合域可以促进肉毒毒素与运动神经元膜特异性结合，而成为新的研究方向。本综述将概述不同血清型肉毒毒素与受体结合过程中受体结合域结构变化和结合位点差异。通过分析不同血清型及亚型的序列以及受体结合域结构特征，可以更好地了解细胞受体结合域的序列差异和功能，并为肉毒毒素的治疗策略提供新思路。

关键词：肉毒毒素受体结合域神经节苷脂突触囊泡蛋白2 突触囊泡结合蛋白

新时代档案职业技能竞赛的实施现状及优化策略——基于对我国31个省份的调研

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浙江档案 2024年第5期 17-20+25页

作者：毛章勇冯思铭湘潭大学公共管理学院

档案职业技能竞赛作为实施人才强档工程的重要举措，在推动技术创新、提高业务水平、促进事业发展方面优势显著。通过文献分析和网络调查，就党的十八大以来我国31个省份档案职业技能竞赛的实施现状展开调研，从竞赛体系、考察内容、参... 详细信息

档案职业技能竞赛作为实施人才强档工程的重要举措，在推动技术创新、提高业务水平、促进事业发展方面优势显著。通过文献分析和网络调查，就党的十八大以来我国31个省份档案职业技能竞赛的实施现状展开调研，从竞赛体系、考察内容、参与对象和宣传激励等方面进行深入分析，提出完善结构布局、丰富考察内容、扩大参赛规模、强化宣传激励等优化策略，以期为推进我国档案职业技能竞赛创新发展提供参考。

关键词：档案职业技能竞赛优化策略

过氧化钙/海泡石海藻酸钠缓释凝胶复合材料的制备及其对内源磷的控制性能

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环境科学 2024年第4期45卷 2160-2170页

作者：曲思彤单苏洁王崇铭吴玲予李大鹏黄勇苏州科技大学环境科学与工程学院苏州215009 苏州科技大学环境生物技术研究所苏州215009

以载纳米过氧化钙海泡石为基本骨架,采用海藻酸钠包覆和镧离子交联研制了CPS60@SA/La复合材料,通过批量吸附实验和表征分析考察了其对富营养化水体中磷的去除效果及机制.结果表明,所制材料具有良好的释氧性和除磷能力,纳米过氧化钙和镧... 详细信息

以载纳米过氧化钙海泡石为基本骨架,采用海藻酸钠包覆和镧离子交联研制了CPS60@SA/La复合材料,通过批量吸附实验和表征分析考察了其对富营养化水体中磷的去除效果及机制.结果表明,所制材料具有良好的释氧性和除磷能力,纳米过氧化钙和镧位点是其主要的活性组分.随着缓释凝胶用量增加,磷的去除率也相应增加;CPS60@SA/La对高浓度磷的去除过程符合准二级动力学模型和Langmuir吸附等温模型的描述,最大吸附容量为198.25 mg·g^(-1) (20℃);CPS60@SA/La在p H 3~9范围内均对磷酸盐有良好的去除能力,F^(-)、HCO_(3)^(-)、CO_(3)^(2-)和HA的共存对CPS60@SA/La的除磷效果有轻微抑制作用;在实际河道水体中,该复合材料可缓慢释氧,保持水体溶解氧浓度大约为8.51 mg·L^(-1),为泥水界面处的好氧微生物提供良好条件,对上覆水和间隙水中的磷酸盐均有良好的去除和固定能力,去除效果稳定,其使用有望提升水体自净能力.

关键词：富营养化控制过氧化钙镧(La) 缓释凝胶磷(P) 海藻酸钠(SA)