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IL-24基因重组表达载体的构建、表达及其对肿瘤的抑制作用

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IL-24基因重组表达载体的构建、表达及其对肿瘤的抑制作用

作者：瞿少刚武汉大学

学位级别：硕士

白细胞介素24(IL-24)又称黑色素瘤分化相关基因7(melanoma differentiation associatedgene-7,MDA-7)主要表达于脾、胸腺、外周血白细胞等免疫组织和分化的黑色素细胞,其他组织细胞可被诱导表达。人IL-24是用差减杂交的方法从IFN-β和me... 详细信息

白细胞介素24(IL-24)又称黑色素瘤分化相关基因7(melanoma differentiation associatedgene-7,MDA-7)主要表达于脾、胸腺、外周血白细胞等免疫组织和分化的黑色素细胞,其他组织细胞可被诱导表达。人IL-24是用差减杂交的方法从IFN-β和mezerein诱导的人黑色素瘤细胞cDNA文库中筛选到的。该基因在诱导分化的黑色素瘤细胞中呈高表达,并能促进黑色素瘤细胞分化,因此最初命名为MDA-7。由于MDA-7是一种小分子的糖蛋白,因其结构的相似性、序列的同源性以及具有细胞因子样特征,因而于2002年被命名为IL-24。IL-24因其具有明显抗肿瘤作用,己引起广泛的关注。目前研究报道IL-24能抑制多种肿瘤细胞,但对HIC细胞是否有抑制作用还未见报道。IL-24的糖基化与其功能相互关系还不清楚。针对这些问题,本文主要进行以下几方面研究。我们构建了人白细胞介素-24(hIL-24)基因的表达载体并在大肠杆菌中表达。用PCR从质粒TRAP-IL-24中扩增hlL-24 cDNA片段,并将该片段插入pGEX-KG原核表达载体中,实现插入基因的融合表达。用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定。酶切结果证实,成功地构建了pGEX-KG-IL-24原核表达载体,并在大肠杆菌中获得稳定的表达,表达产物的相对分子质量(Mr)同预期值相一致,为下一步制备IL-24抗体,研究IL-24的功能奠定了基础。我们又进一步构建了IL-24真核表达质粒并研究其体内外表达对肿瘤细胞的生长抑制作用。采用重组DNA技术构建真核表达质粒pEGFP-IL-24。用脂质体法将重组质粒及空载体外转染HIC细胞,再经激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察其表达,用MTF法检测HIC细胞的体外增殖能力,用流式细胞仪检测细胞周期与凋亡。小鼠皮下接种转染IL-24真核表达质粒或空载的B-16细胞观察其体内致瘤性的变化。同时建立小鼠实体瘤模型,研究基因转染对肿瘤的生长抑制作用。结果表明:pEGFP-IL-24转染HIC细胞后,LSCM可观察到其表达。IL-24基因转染的HIC细胞体外增殖能力明显受到抑制,G2-M期细胞比例增高,细胞被阻滞在G-M期。转染IL-24的B-16细胞体内致瘤率降低。与对照组相比IL-24基因治疗组肿瘤生长明显受到抑制(P<0.05)。由此我们得出:IL-24基因转染的肿瘤细胞体外生长受抑。瘤内注射pEGFP-IL-24可抑制肿瘤生长,具有明显的抗肿

关键词：白细胞介素-24 原核表达真核表达基因转染肿瘤基因治疗 N-糖基化点突变

白细胞介素-24基因重组表达载体的构建及原核表达

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细胞与分子免疫学杂志 2005年第3期21卷 273-275,279页

作者：瞿少刚陈明章晓联武汉大学医学院免疫学系湖北武汉430071

目的:构建人白细胞介素-24(hIL-24)基因的表达载体并在大肠杆菌中表达。方法:用PCR从质粒TRAP-IL-24中扩增hIL-24cDNA片段,并将该片段插入pGEX-KG原核表达载体中,实现插入基因的融合表达。用SDS-PAGE和West-ernblot对表达产物进行鉴定... 详细信息

目的:构建人白细胞介素-24(hIL-24)基因的表达载体并在大肠杆菌中表达。方法:用PCR从质粒TRAP-IL-24中扩增hIL-24cDNA片段,并将该片段插入pGEX-KG原核表达载体中,实现插入基因的融合表达。用SDS-PAGE和West-ernblot对表达产物进行鉴定。采用MTT法检测GST-IL-24融合蛋白的生物学活性。结果:酶切结果证实,成功地构建了pGEX-KG IL24原核表达载体,并在大肠杆菌中获得稳定的表达,表达产物的相对分子质量(Mr)同预期值相一致。GST-IL24融合蛋白能够抑制THP1细胞的生长。结论:成功地构建了重组表达载体pGEX-KG-IL24,并在***21中表达了具有生物学活性的GST-IL-24融合蛋白,为下一步研究人IL24的功能奠定了基础。

关键词：白细胞介素-24 原核表达 GST-IL-24融合蛋白

新型细胞因子IL-24真核表达载体的构建、表达及其对肿瘤的抑制作用

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中国免疫学杂志 2005年第10期21卷 760-763,767页

作者：瞿少刚章晓联李平飞广东医学院微生物及免疫教研室广州510000 武汉大学医学院过敏及免疫相关疾病湖北省重点实验室武汉430071 武汉大学医学院免疫学系武汉430071

目的:构建IL-24真核表达质粒,并研究其体内外表达对肿瘤细胞的生长抑制作用。方法:采用重组DNA技术构建IL-24真核表达质粒pEGFP-C1-IL-24。用脂质体法将重组质粒及空载体外转染HIC细胞,再经激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察其表达,用MTT... 详细信息

目的:构建IL-24真核表达质粒,并研究其体内外表达对肿瘤细胞的生长抑制作用。方法:采用重组DNA技术构建IL-24真核表达质粒pEGFP-C1-IL-24。用脂质体法将重组质粒及空载体外转染HIC细胞,再经激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察其表达,用MTT法检测HIC细胞的体外增殖能力,用流式细胞仪检测细胞周期与凋亡。小鼠皮下接种转染IL-24真核表达质粒或空载的B16细胞观察其体内致瘤性的变化。小鼠实体瘤模型研究基因转染对肿瘤的生长抑制作用。结果:pEGF-C1-IL-24转染HIC细胞后,LSCM可观察到其表达。IL-24基因转染的HIC细胞体外增殖能力明显受到抑制,G2-M期细胞比例增高,细胞被阻滞在G2-M期。转染IL-24的B16细胞体外致瘤率降低。与对照组相比,IL-24基因治疗组肿瘤生长明显受到抑制(P<0.05)。结论:IL-24基因转染的肿瘤细胞体外生长受抑。瘤内注射pEGFP-C1-IL-24可抑制肿瘤生长,具有明显的抗肿瘤作用。

关键词：白细胞介素24 基因转染肿瘤基因治疗

爆炸荷载作用下不锈钢管混凝土构件工作机理研究

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土木工程学报 2024年第6期57卷 74-91页

作者：谭清华韩林海贾少刚蒋志刚广西大学广西南宁530004 清华大学北京100084 国防科技大学湖南长沙410073

本文进行不锈钢管混凝土构件在爆炸荷载作用下力学性能的试验研究,试验参数包括钢管截面形式(圆形、方形)、比例距离及有无填充混凝土。建立爆炸荷载作用下不锈钢管混凝土构件动态响应的有限元分析模型,模型计算结果得到试验结果的验证... 详细信息

本文进行不锈钢管混凝土构件在爆炸荷载作用下力学性能的试验研究,试验参数包括钢管截面形式(圆形、方形)、比例距离及有无填充混凝土。建立爆炸荷载作用下不锈钢管混凝土构件动态响应的有限元分析模型,模型计算结果得到试验结果的验证。基于验证的有限元计算模型,对比分析不同条件下不锈钢管混凝土和普通钢管混凝土构件的破坏形态、动态响应和耗能规律。试验和有限元分析结果均表明:随着比例距离减小,构件的破坏程度由弹性变形到弯曲破坏或剪切破坏;混凝土的填充能够有效延缓钢管发生局部屈曲和破坏,构件的承载能力、变形能力和耗能能力得到有效提升,进而提高构件的抗爆性能。在近场爆炸范围内,不锈钢管混凝土和普通钢管混凝土构件均出现三种可能的整体破坏形态,即弯曲破坏、弯剪破坏和剪切破坏,另还伴随有较明显的局部破坏形态;在条件相同包括名义屈服强度相同的情况下,不锈钢管混凝土构件的抗爆性能优于相应普通钢管混凝土构件。

关键词：不锈钢管混凝土爆炸荷载超压动态响应耗能

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高亲和力谷氨酸转运体与神经系统变性疾病关系的研究进展

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中华神经医学杂志 2014年第2期13卷 208-210页

作者：张云龙瞿少刚南方医科大学基础医学院免疫学教研室广州510515

谷氨酸是中枢神经系统主要的兴奋性神经递质，释放到突触间隙的谷氨酸若不被及时清除，会过度兴奋谷氨酸受体．介导“兴奋性毒性效应”对神经系统产生损伤。细胞外没有分解谷氨酸的酶，因此谷氨酸主要由高亲和力谷氨酸转运体（excitator... 详细信息

谷氨酸是中枢神经系统主要的兴奋性神经递质，释放到突触间隙的谷氨酸若不被及时清除，会过度兴奋谷氨酸受体．介导“兴奋性毒性效应”对神经系统产生损伤。细胞外没有分解谷氨酸的酶，因此谷氨酸主要由高亲和力谷氨酸转运体（excitatoryaminoacidtransporters，EAATs）所摄取。

关键词：高亲和力谷氨酸转运体神经系统变性疾病

pEGFP-IL-24对B16F0细胞抑制效应的实验研究

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陕西医学杂志 2006年第7期35卷 801-803页

作者：张秀萍瞿少刚广东医学院临床技能培训中心湛江524023 广东医学院微生物与免疫学教研室

目的:构建IL-24真核表达质粒,研究其体内外表达对肿瘤细胞生长的抑制作用。方法:用重组DNA技术构建IL-24真核表达质粒pEGFP-IL-24。用脂质体法将重组质粒及空载体体外转染B16F0细胞后,经激光扫描共聚焦显微镜观察其表达,用MTT法检测B16F... 详细信息

目的:构建IL-24真核表达质粒,研究其体内外表达对肿瘤细胞生长的抑制作用。方法:用重组DNA技术构建IL-24真核表达质粒pEGFP-IL-24。用脂质体法将重组质粒及空载体体外转染B16F0细胞后,经激光扫描共聚焦显微镜观察其表达,用MTT法检测B16F0细胞的体外增殖能力。用小鼠实体瘤模型研究基因转染对肿瘤生长的抑制。结果:pEGFP-IL-24转染B16F0细胞后,LSM可观察到其表达。IL-24基因转染的B16F0细胞体外增殖能力明显受到抑制。转染IL-24的B16F0细胞体内致瘤率降低。结论:IL-24基因转染的肿瘤细胞体外生长受抑。IL-24基因转染的肿瘤细胞体内生长能力显著降低。

关键词：肿瘤/治疗白细胞介素24/免疫学黑色素瘤实验性小鼠

谷氨酸转运体GLT-1的TM8区段在底物转运过程中的功能分析

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实用医学杂志 2011年第16期27卷 2910-2913页

作者：瞿少刚张秀萍南方医科大学免疫学教研室广东医学院中美肿瘤研究所

目的:探讨TM8区段在谷氨酸转运体GLT-1转运底物过程中所负功能。方法:将GLT-1的TM8区段的氨基酸残基(Thr460-Val483)分别突变为半胱氨酸,然后应用生物化学的方法检测突变体转运活性,巯基试剂MTSET对突变体转运活性的影响以及底物、抑制... 详细信息

目的:探讨TM8区段在谷氨酸转运体GLT-1转运底物过程中所负功能。方法:将GLT-1的TM8区段的氨基酸残基(Thr460-Val483)分别突变为半胱氨酸,然后应用生物化学的方法检测突变体转运活性,巯基试剂MTSET对突变体转运活性的影响以及底物、抑制剂对MTSET抑制效应的影响。结果:I463C、V467C及A468C对MTSET非常敏感;L465C、L466、V469C及W471C对MTSET敏感性稍弱。底物L-glu及KCl对MTSET作用于V467C、A468C的抑制效应具有保护作用,而抑制剂TBOA则增强了MTSET的抑制效应;L-glu及KCl对MTSET作用于V469C、W471C的抑制效应具有保护作用,但TBOA对MTSET的抑制效应没有影响。结论:在GLT-1转运底物的过程中,TM8参与了底物转运通道的组成,TM8对底物的结合与转运发挥着重要的作用。

关键词：谷氨酸 TM8区段底物转运结构变构

东北半干旱脱贫地区乡村多维发展格局与类型化振兴战略研究——以吉林通榆县为例

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地理科学进展 2024年第3期43卷 504-516页

作者：李少琦房艳刚邹存铭东北师范大学地理科学学院长春130024 东北师范大学长白山地理过程与生态安全教育部重点实验室长春130024 东北师范大学学术期刊社长春130117

为揭示东北半干旱脱贫地区乡村类型的特殊性并服务于增强其发展动力和乡村振兴,论文以原国家级贫困县吉林通榆县为例,运用熵值法、Getis-Ord Gi*指数、地理探测器分析村域尺度乡村多维发展水平的空间分异特征,通过对乡村主要优势条件和... 详细信息

为揭示东北半干旱脱贫地区乡村类型的特殊性并服务于增强其发展动力和乡村振兴,论文以原国家级贫困县吉林通榆县为例,运用熵值法、Getis-Ord Gi*指数、地理探测器分析村域尺度乡村多维发展水平的空间分异特征,通过对乡村主要优势条件和短板的分析,以乡村现有发展特点和未来主导战略命名乡村类型,并提出主次结合、多维协同的类型化乡村振兴战略。结果表明:(1)通榆县乡村不同维度发展指数呈现出明显的空间分异和集聚特征。西南、西北和东北部地区村落环境条件明显优于其他地区;靠近县域经济中心或靠近乡镇政府与交通干线的村庄区位交通和经济基础较好,易形成热点区,边缘或偏远地区的村庄形成冷点区,呈现出以县域经济中心为圆心的圈层式结构;县域中部靠近镇政府驻地且有交通线经过的村庄,社会活力指数较高。(2)通榆县乡村综合发展受村落环境条件影响较大,交通、经济、社会维度对乡村发展具有交互增强作用。(3)综合发展型乡村要“聚合力”、勇争先;内外联动型、特色发展型、农牧结合型乡村要“扬优势”、显特色;交通虹吸型、巩固搬迁型乡村应“补短板”、强弱项;弱质型、防范返贫型乡村应“育新机”、辟新径。

关键词：乡村类型脱贫地区乡村多维发展乡村振兴战略通榆县东北地区

知识产权本质属性之再思考--以知识产权作为“国家发展战略性资源”为视角

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中国高校社会科学 2024年第1期 105-120,M0006页

作者：戚建刚张少乎中南财经政法大学知识产权研究中心中南财经政法大学法学院武汉430073

知识产权作为国家发展战略性资源,意指它是一种对国家经济、政治文明、改革开放、社会文明、生态文明、民生福祉和治理效能等进步起到全局性作用的资源。知识产权功能决定了它能够成为国家发展战略性资源。有效市场、有为政府和有用社... 详细信息

知识产权作为国家发展战略性资源,意指它是一种对国家经济、政治文明、改革开放、社会文明、生态文明、民生福祉和治理效能等进步起到全局性作用的资源。知识产权功能决定了它能够成为国家发展战略性资源。有效市场、有为政府和有用社会建设是知识产权成为国家发展战略性资源的基本条件、根本保证和重要支撑。这一新概念的提出并证成对知识产权法学研究具有重要价值:有助于摆脱知识产权法学人之间关于知识产权本质属性之争论,在更加抽象和宏观的视角上来看待知识产权;有助于更加全面认识知识产权法的本质、调整对象等基本问题,推进中国特色自主知识产权法学研究。它对知识产权法治建设也提出新要求:需要从积极意义上来合理定位政府职能,增加知识产权领域行政法供给;需要制定更多表达国家和社会公共利益的知识产权法;需要制定公法意义上的知识产权基础性法律。

关键词：知识产权国家发展战略性资源知识产权法学知识产权法制本质属性