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萝卜低温弱光胁迫响应的蛋白组学与基因差异表达研究

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萝卜低温弱光胁迫响应的蛋白组学与基因差异表达研究

作者：相菲南京农业大学

学位级别：硕士

萝卜(Raphanus sativus L.)又名芦菔、莱菔,是起源于我国的一种重要十字花科根菜类蔬菜。由于其栽培面积大、营养价值高,在我国的蔬菜生产供应中居于重要的地位。低温胁迫是决定作物产量和品质的重要限制因子,太阳光是光合作用的能量来... 详细信息

萝卜(Raphanus sativus L.)又名芦菔、莱菔,是起源于我国的一种重要十字花科根菜类蔬菜。由于其栽培面积大、营养价值高,在我国的蔬菜生产供应中居于重要的地位。低温胁迫是决定作物产量和品质的重要限制因子,太阳光是光合作用的能量来源,是植物生存的基础,植物的光合作用依赖光。低温弱光胁迫严重影响着蔬菜作物的生长,已经成为限制蔬菜类产量的重要因素。低温弱光胁迫,作为主要的非生物胁迫,严重影响着植物生长发育、地理分布以及农作物的产量。蛋白质组学在后基因组时代发挥着越来越重要的作用,双向电泳(2-DE)技术作为蛋白质组学的支撑之一,被应用于生物学研究的许多领域。萝卜喜温性作物,特别是在冬春季保护地生产中低温弱光成为限制萝卜产量品质的重要因子,目前有关萝卜响应低温弱光胁迫机理的研究鲜有报道。本研究以萝卜高代自交系’NAU-JLQX’为材料,比较两种叶片蛋白质提取方法,以获得适合萝卜叶片蛋白质提取的方法;利用双向电泳技术,分离低温弱光胁迫前后萝卜叶片差异表达的蛋白,并对其进行质谱鉴定与功能分析,并对相应基因进行RNA水平上的表达特性分析;利用mRNA差异显示技术,进行低温弱光下萝卜叶片差异表达基因的分离鉴定,对部分低温弱光胁迫响应基因进行了克隆与转录水平的表达分析;利用同源克隆技术克隆萝卜低温调控的相关基因,并进行低温胁迫下的基因表达分析,从而为解析植物响应低温弱光胁迫的分子遗传机制提供理论依据。主要研究结果如下：采用Tris-HCl-TCA/丙酮沉淀法和改进的PEG分级沉淀法提取蛋白质,通过双向凝胶电泳比较两种蛋白质提取方法的效果。结果表明,以pH4-7的17cm线性IPG胶条进行IEF,上样量1000μg/350μl,蛋白质可以得到较好的分离,2-DE凝胶图谱质量最佳;改进的PEG分级沉降法提取的叶片总蛋白质,所提取三个组分的2-DE凝胶图谱可清晰识别的蛋白质点数目分别为537、170以及852,而Tris-HCl/TCA-丙酮沉淀法提取的蛋白质2-DE凝胶图谱可识别出640个蛋白质点。采用蛋白质双向电泳技术,进行萝卜叶片响应低温(LT,5℃/2℃弱光(WL,100μmol m-2s-1)胁迫(分别处理0h,24h以及96h)的差异蛋白质组学研究。共鉴定19个蛋白点,发现鉴定的蛋白点主要参与了碳的新陈代谢(OEE2, RuBisCO大亚基,RuBisCO小亚基以及CA),信号转导(NDPK2),蛋白质合成(60S核糖体蛋白),以及植物防御系统(CP)。对其中10个差异表达的蛋白点相应的基因进行半定量RT-PCR分析,结果表明在mRNA水平上与蛋白质水平的表达特性相一致。采用mRNA差异显示(DDRT-PCR)技术,分离萝卜’NAU-JLQX’低温弱光(100μmol m-2s-1)胁迫前后差异表达的基因。总共克隆得到32条差异片段,其中17条与已知功能基因有较高的同源性。有2个是转录因子,2个参与光合作用,4个参与防卫与胁迫响应,1个参与转运过程,5个参与蛋白结合,1个为蛋白激酶以及1个参与表达调控。这些结果都表明低温弱光胁迫是一个复杂的过程,在这一过程中,许多生理生化过程都受到影响。根据不同作物抗冷相关基因保守域设计特异引物,以萝卜’NAU-YH’为材料进行PCR扩增,结果得到了四个冷驯化相关基因DNA及cDNA序列,分别命名为Rs-COR14, Rs-MYB4以及Rs-LOS2.分析其核苷酸序列表明,它们分别与拟南芥COR14, MYB4,以及LOS2具有较高的同源性。半定量RT-PCR结果表明,低温弱光胁迫开始后,在对照中不表达的RsCOR14基因,胁迫1h后开始表达,RsLOS2基因在未处理时表达量较低,开始胁迫处理后表达量增加。RsMYB4基因在对照中表达较弱,处理后表达量有上升的趋势,并在处理6h时表达量最高。

关键词：萝卜低温弱光胁迫叶片蛋白质组学 mRNA差异显示基因克隆

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重型液力自动变速器油压调控机理的研究

重型液力自动变速器油压调控机理的研究

作者：赵相菲贵州大学

学位级别：硕士

液力自动变速器因具有换挡平滑以及动力传递效率高等优点,在市场上备受汽车生产商和消费者们的青睐。由于液力自动变速器内部结构与工作原理非常复杂,再加上外国对该产品的技术封锁,使得国内对于液力自动变速器的研究还处于十分落后的... 详细信息

液力自动变速器因具有换挡平滑以及动力传递效率高等优点,在市场上备受汽车生产商和消费者们的青睐。由于液力自动变速器内部结构与工作原理非常复杂,再加上外国对该产品的技术封锁,使得国内对于液力自动变速器的研究还处于十分落后的状态。液力自动变速器的液压系统是该产品的核心技术,也是我国理论研究较为缺乏的领域,而液压系统中的油压调控部分,更是统领整个液压系统工作的关键。因此,为了突破液力自动变速器液压系统中的油压调控技术,为液力自动变速器液压系统的设计与优化研究等提供一定的理论研究基础,本文围绕重型液力自动变速器油压调控机理的研究展开如下工作:(1)以具有9个挡位的某重型液力自动变速器为研究对象,分析其各个液压子系统模块的工作原理。根据不同挡位工况下液压元件及液压系统的工作要求,通过数值计算的方式,得到液压系统中各条油路在不同挡位工作时所需的油压与流量参数,为后续对油压调控系统的性能分析、功能验证、优化研究提供参数支持。(2)对各液压子系统中压力调节阀的结构和工作原理进行分析,并针对各个压力调节阀的静态与动态特性进行深入研究,探索了各个压力调节阀的结构参数对其静态与动态调压特性的影响情况,为后续进行油压调控系统的仿真研究提供理论基础。(3)根据液压系统工作原理,对油压调控部分建立了联合仿真模型。通过仿真验证了油压调控系统能够实现换挡动作以及提供各油路工作所需油压,在此基础上,对该系统在不同挡位转换过程中各油路油压的动态响应特性进行了研究分析,并进一步揭示了影响油压调控系统动态响应特性的因素。(4)由于油压调控系统换挡过程中的动态响应特性较差,为了改善其性能,选取了对油压调控系统性能影响较大的一些参数作为设计变量,再以ITAE准则与ISE准则结合的方法设计目标函数,然后采用遗传算法对油压调控系统进行优化设计,通过将优化前后不同换挡过程中的动态响应特性曲线进行对比,结果表明优化后的油压调控系统动态响应特性得到了明显改善。

关键词：重型液力自动变速器油压调控动态响应特性换挡过程优化设计

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芽孢乳杆菌复合益生素对三黄鸡作用的研究

饲料研究 2009年第10期32卷 1-5页

作者：相菲徐春厚广东海洋大学

选用100只1日龄三黄鸡,分为5组,每组设2个重复,各10只雏鸡。对照组饲喂基础日粮;抗生素组在基础日粮中添加0.2%恩诺沙星;试验组在基础日粮中添加芽孢乳杆菌复合益生素A,添加量为0.5%、1%和1.5%;试验期8周。试验结果表明:芽孢乳杆菌复合... 详细信息

选用100只1日龄三黄鸡,分为5组,每组设2个重复,各10只雏鸡。对照组饲喂基础日粮;抗生素组在基础日粮中添加0.2%恩诺沙星;试验组在基础日粮中添加芽孢乳杆菌复合益生素A,添加量为0.5%、1%和1.5%;试验期8周。试验结果表明:芽孢乳杆菌复合益生素A有提高三黄鸡平均日增质量和降低料重比的趋势;提高了三黄鸡生长前期血清溶菌酶和IgG的含量(P<0.05);提高新城疫血清HI抗体效价并延长抗体维持时间;提高三黄鸡外周血T淋巴细胞转化率。结果表明:芽孢乳杆菌复合益生素A能替代恩诺沙星,在饲粮中适宜的添加量为1%。

关键词：三黄鸡芽孢乳杆菌复合益生素A 营养免疫

益生素YSK对三黄鸡生长性能和免疫功能的研究

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饲料研究 2009年第12期32卷 1-5页

作者：徐春厚相菲谢伟天广东海洋大学动物医学系

选用100只1日龄三黄鸡,分为5组,每组设2个重复,每重复10只雏鸡。对照组饲喂基础日粮;抗生素组在基础日粮中添加0.2%恩诺沙星;3个试验组在基础日粮中添加益生素YSK,添加量分别为0.5%、1%和1.5%;试验期为8周。试验结果表明:益生素YSK对三... 详细信息

选用100只1日龄三黄鸡,分为5组,每组设2个重复,每重复10只雏鸡。对照组饲喂基础日粮;抗生素组在基础日粮中添加0.2%恩诺沙星;3个试验组在基础日粮中添加益生素YSK,添加量分别为0.5%、1%和1.5%;试验期为8周。试验结果表明:益生素YSK对三黄鸡有促生长作用,并可显著降低料重比;益生素YSK能不同程度地提高三黄鸡血清中钙、磷、总蛋白、白蛋白、球蛋白、溶菌酶、IgG和IgA的含量,并有降低血清总胆固醇及盲肠大肠杆菌菌群数量的作用;益生素YSK能显著提高脾和法氏囊指数及盲肠乳酸菌菌群数量,对新城疫HI抗体效价及淋巴细胞转化率亦有提高作用;在日粮中的适宜添加量为1%。

关键词：益生素YSK 三黄鸡生长性能免疫功能

互联网环境下大学生意识形态和思想政治教育研究

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产业与科技论坛 2021年第10期20卷 109-110页

作者：相菲川北幼儿师范高等专科学校

高校是国家意识形态工作的前沿阵地,在互联网环境下,高校意识形态工作正面临着诸多的问题和挑战,加强高校意识形态阵地建设势在必行。本文分析在校大学生意识形态存在的主要问题和形成的原因,从而制定高校的人才培养和学生管理方案。加... 详细信息

高校是国家意识形态工作的前沿阵地,在互联网环境下,高校意识形态工作正面临着诸多的问题和挑战,加强高校意识形态阵地建设势在必行。本文分析在校大学生意识形态存在的主要问题和形成的原因,从而制定高校的人才培养和学生管理方案。加强高校对大学生意识形态引领应从课程思政网络教学建设、开展校园“网络文化”教育活动和创新新媒体平台传播主流价值观的途径,促进在校大学生健康成长、提高他们的意识形态安全。

关键词：互联网意识形态大学生思想政治教育

3株乳酸芽孢杆菌的筛选、初步鉴定及应用试验

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华南农业大学学报 2010年第2期31卷 117-120页

作者：徐春厚潘俊福相菲韩伟谢为天广东海洋大学动物医学系广东湛江524088

通过对41株产酸芽孢杆菌Bacillus培养物的HPLC分析及抑菌活性和芽孢形成检测,筛选出3株能产生乳酸、有抑菌活性、易形成芽孢的乳酸芽孢杆菌.通过形态染色特性观察、Biolog系统鉴定及16S rDNA碱基序列分析,初步鉴定3株菌为芽孢杆菌SCBaci... 详细信息

通过对41株产酸芽孢杆菌Bacillus培养物的HPLC分析及抑菌活性和芽孢形成检测,筛选出3株能产生乳酸、有抑菌活性、易形成芽孢的乳酸芽孢杆菌.通过形态染色特性观察、Biolog系统鉴定及16S rDNA碱基序列分析,初步鉴定3株菌为芽孢杆菌SCBacillus ***、芽孢杆菌***和蜡状芽孢杆菌SL1 *** SL1.动物饲养试验显示,乳酸芽孢杆菌益生素能提高三黄鸡血清钙、磷、总蛋白、球蛋白、溶菌酶、IgG、IgA含量及脾脏、胸腺和法氏囊指数;饲料中添加5 g/kg的乳酸芽孢杆菌益生素,可使56日龄三黄鸡的平均日增质量提高13.61%,料质量比降低18.37%.

关键词：乳酸芽孢杆菌筛选鉴定应用试验三黄鸡

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饲料的加工处理对其营养价值的影响

湖南饲料 2009年第2期 42-44页

作者：相菲广东省湛江市湖光岩东广东海洋大学主校区139号信箱广东湛江524088

饲料加工对动物营养的影响一直是饲料加工工艺学家和动物营养学家关心的问题，如何通过恰当的加工方法才能获得更好的经济效益呢？笔者认为，将加工工艺学和动物营养学有机结合起来，才能够更大提高动物生产性能。

关键词：饲料加工加工处理营养价值动物营养学动物生产性能营养学家经济效益加工方法

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舒适护理对癌症患者止痛效果及睡眠质量的影响

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现代医药卫生 2014年第21期30卷 3314-3316页

作者：相菲西安交通大学第一附属医院肿瘤内科1病区陕西西安710000

目的分析并评价舒适护理对癌症患者止痛效果及睡眠质量的影响。方法选择2013年1月至2014年10月收治的癌症患者116例作为观察对象,住院期间给予舒适护理,应用疼痛评估量表及匹兹堡睡眠质量指数量表(PSQI)评估护理前后患者的疼痛评分及睡... 详细信息

目的分析并评价舒适护理对癌症患者止痛效果及睡眠质量的影响。方法选择2013年1月至2014年10月收治的癌症患者116例作为观察对象,住院期间给予舒适护理,应用疼痛评估量表及匹兹堡睡眠质量指数量表(PSQI)评估护理前后患者的疼痛评分及睡眠质量得分情况。结果护理后患者疼痛评分、暴发痛次数均显著低于护理前,差异有统计学意义(P<0.01);护理后患者PSQI总分及入睡时间、睡眠质量、睡眠障碍、日间功能、服用安眠药各因子得分均明显低于护理前,差异有统计学意义(P<0.01)。结论将舒适护理应用于癌症患者能使其以愉悦的身心状态配合临床治疗与护理,可有效减轻患者的疼痛感,提高睡眠质量。

关键词：肿瘤疼痛镇痛睡眠护理工作

PICC导管在肿瘤大剂量化疗中的应用及护理策略分析

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临床医药文献电子杂志 2016年第45期3卷 8992-8993页

作者：相菲西安交通大学医学院第一附属医院肿瘤内科

目的探究PICC导管在肿瘤大剂量化疗中的应用以及护理策略情况,以供临床参考以及研究。方法选取我院2014年11月;016年6月收治的肿瘤患者98例作为本次研究对象,患者98例均采用PICC导管进行大剂量化疗治疗,之后通过动态化随机分组的方法将... 详细信息

目的探究PICC导管在肿瘤大剂量化疗中的应用以及护理策略情况,以供临床参考以及研究。方法选取我院2014年11月;016年6月收治的肿瘤患者98例作为本次研究对象,患者98例均采用PICC导管进行大剂量化疗治疗,之后通过动态化随机分组的方法将其分为两组,对照组采用常规护理干预,观察组采用优质护理干预,探究其护理效果的差异性。结果通过本文研究结果中可以看出,观察组患者的护理效果明显优于对照组患者的护理效果,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论肿瘤患者在PICC导管下采用大剂量化疗治疗,并实施优质护理干预,其能够有效稳定患者病情,提高护理效果,可应用以及推广。

关键词： PICC导管肿瘤大剂量化疗护理分析