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MiCV和AMDV双重荧光定量PCR检测试剂盒的初步研制及其流行病学调查研究

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MiCV和AMDV双重荧光定量PCR检测试剂盒的初步研制及其流行病学调...

作者：盛陈艳吉林农业大学

学位级别：硕士

水貂圆环病毒(Mink circovirus,MiCV)是近些年我国新发现的病毒,水貂阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,AMDV)是水貂阿留申病的病原体,这两种病毒给水貂养殖业带来了严重的经济损失,目前均没有有效的疫苗和特效药物用于其所引起... 详细信息

水貂圆环病毒(Mink circovirus,MiCV)是近些年我国新发现的病毒,水貂阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,AMDV)是水貂阿留申病的病原体,这两种病毒给水貂养殖业带来了严重的经济损失,目前均没有有效的疫苗和特效药物用于其所引起疾病的防控。因此,建立快速、准确且方便应用的检测方法对于降低其所造成的经济损失显得尤为重要。为建立MiCV和AMDV荧光定量PCR检测方法,本研究根据MiCV Cap基因和AMDV VP2基因的保守序列,分别设计特异性引物和探针,通过反应体系和条件的优化建立了MiCV、AMDV两种单重荧光定量PCR检测方法及MiCV和AMDV双重荧光定量PCR检测方法。建立的方法分别只能检测到MiCV和AMDV,最低检测限均为1×10copies/μL,批间和批内变异系数均小于2%,表明建立的荧光定量PCR检测方法具有较好的特异性、敏感性和重复性。为研制MiCV和AMDV双重荧光定量PCR检测试剂盒,在建立的MiCV和AMDV双重荧光定量PCR检测方法的基础上,通过试剂盒原材料和体系的优选试验,确定了试剂盒各组成成分,组装了MiCV和AMDV双重荧光定量PCR检测试剂盒。试剂盒的特异性、敏感性和重复性验证结果表明,该试剂盒只能检测到MiCV和AMDV,最低检测限为1×10 copies/μL,批间和批内变异系数均小于2%。且应用该试剂盒对156份临床样品进行检测,结果MiCV、AMDV和二者混合感染的检出率分别为42.95%、62.18%和40.38%,而普通PCR的检出率分别为37.18%、55.13%和33.97%。为分析我国毛皮动物主要养殖地区MiCV和AMDV的流行情况,应用研制的双重荧光定量PCR检测试剂盒对采自吉林、黑龙江和山东省的996份水貂、狐狸和貉的血液样品以及293份环境样品进行MiCV和AMDV检测。结果MiCV、AMDV以及二者混合感染的检出率分别为49.40%、57.83%和41.97%。水貂的MiCV和AMDV检出率皆高于狐狸和貉;分窝期的MiCV和AMDV检出率低于配种期和打皮期;“≥1岁”组的检出率高于“<1岁”组;公兽的检出率低于母兽。环境样本MiCV和AMDV的检出率均较高。为分析我国毛皮动物主要养殖地区MiCV和AMDV的遗传变异情况,对临床检测为MiCV和AMDV混合感染且Ct值较小的水貂、狐狸和貉的18份阳性样品进行MiCV Cap基因和AMDV VP2基因的扩增、测序、同源性和遗传进化分析。同源性分析结果显示,水貂、狐狸和貉MiCV Cap基因核苷酸同源性为97.8%-100.0%,推导氨基酸同源性为96.1%-100.0%。水貂、狐狸和貉AMDV VP2基因核苷酸同源性为92.6%-97.8%,推导氨基酸同源性为93.7%-98.0%。遗传进化分析结果表明,MiCV Cap基因系统进化树可分为3个亚群,水貂、狐狸和貉MiCV Cap基因在3个亚群中均有分布,山东来源的毒株位于3亚群,吉林和黑龙江来源的毒株位于1亚群和2亚群。AMDV VP2基因系统进化树可分为4个亚群,水貂、狐狸和貉AMDV VP2基因分布在各个亚群,吉林来源的毒株皆位于4亚群,山东来源的毒株在四个亚群中皆有分布,黑龙江来源的毒株主要位于1亚群。综上所述,本研究不仅建立了MiCV和AMDV快速有效的检测方法并组装了检测试剂盒,同时为我国MiCV和AMDV的流行病学研究提供新的数据,为MiCV和AMDV的防控提供技术支撑。

关键词：水貂圆环病毒水貂阿留申病毒荧光定量PCR 试剂盒流行病学调查

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关于钱钟书——严家炎的未刊手稿

新文学史料 2024年第3期 78-86页

作者：陈艳中国现代文学馆

在中国现代文学馆“严家炎文库”,有一份关于钱钟书的未刊手稿,包括《关于钱钟书小说及其所代表的文学流派的一些感想》《阅读笔记》《钱钟书生平简况》。

关键词：严家炎中国现代文学馆文学流派钱钟书围城阅读笔记手稿

严家炎与新时期“文学的现代化”——以严家炎和夏志清的对话为中心

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扬子江文学评论 2024年第4期 81-88页

作者：陈艳中国现代文学馆

新时期中国现代文学学科的重建伴随着对海外汉学的发现和引介,1980年代也是国内学者与海外学术交流的活跃时期。正是这种“世界的”眼光,促进了现代文学研究的范式转型。作为“第二代学人”的领军人物,严家炎于新时期进入学术创造力的... 详细信息

新时期中国现代文学学科的重建伴随着对海外汉学的发现和引介,1980年代也是国内学者与海外学术交流的活跃时期。正是这种“世界的”眼光,促进了现代文学研究的范式转型。作为“第二代学人”的领军人物,严家炎于新时期进入学术创造力的爆发期,但他与海外汉学的对话,却很少受到关注。

关键词：现代文学研究严家炎夏志清海外汉学范式转型中国现代文学学科学术交流国内学者

公民需求视域下的档案政务服务转型路径探究——以政务网留言数据为例

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档案学研究 2024年第2期 72-81页

作者：陈艳中南财经政法大学档案馆武汉430073

为探究档案政务服务标准化、规范化和便利化路径,使档案创造出更大的经济和社会价值,本文基于公共服务理论和公共选择理论,从公民需求的角度探究档案政务服务路径,利用主题挖掘和情感分析方法对中国政府网和22个省级人民政府网站的公民... 详细信息

为探究档案政务服务标准化、规范化和便利化路径,使档案创造出更大的经济和社会价值,本文基于公共服务理论和公共选择理论,从公民需求的角度探究档案政务服务路径,利用主题挖掘和情感分析方法对中国政府网和22个省级人民政府网站的公民档案政务留言数据进行分析。研究发现,鉴于政府干预的局限性,现有的档案政务服务的“粗放型”供给模式未能达到高效服务和高满意度的效果,档案政务服务路径需要从“自上而下”的供给主导模式向“自下而上”的需求导向模式转型。

关键词：档案政务服务公共服务档案用户公民留言 LDA 情感分析

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可逆交联聚丁二烯网络的技术进展

高分子材料科学与工程 2024年第6期40卷 152-162页

作者：郝鹏陈艳君国家知识产权局专利局专利审查协作北京中心北京100160 宁波职业技术学院宁波市高性能石油树脂制备工程与技术重点实验室浙江宁波315800 宁波职业技术学院化学工程学院浙江宁波315800

简介了聚丁二烯的种类、优异性能及重要性,简述了聚丁二烯使用过程中硫化交联制备的含有不可逆交联网络带来的难以回收和资源浪费的问题,设计合成基于可逆交联键的聚丁二烯网络对于发展高弹性、高强度、可回收和其它功能的先进材料具有... 详细信息

简介了聚丁二烯的种类、优异性能及重要性,简述了聚丁二烯使用过程中硫化交联制备的含有不可逆交联网络带来的难以回收和资源浪费的问题,设计合成基于可逆交联键的聚丁二烯网络对于发展高弹性、高强度、可回收和其它功能的先进材料具有重要意义。构筑可逆交联聚丁二烯的关键是在聚丁二烯分子链上引入官能基团,再通过官能基团之间的反应或相互作用构筑可逆交联聚丁二烯网络。根据官能基团在聚丁二烯分子链的位置不同,介绍了基于链端官能化聚丁二烯的可逆交联网络、基于链中官能化聚丁二烯的可逆交联网络和基于链端和链中双重官能化聚丁二烯的可逆交联网络这3种聚丁二烯网络的制备方法和性能。最后提出,引入更多的可逆交联键以及功能基团,拓宽其应用领域是未来的重点研发方向。

关键词：聚丁二烯官能化可逆交联回收

计及循环寿命和电能量-调频市场出清的储能自调度策略

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电力系统自动化 2024年第14期48卷 28-41页

作者：陈泽宇陈艳波新能源电力系统全国重点实验室(华北电力大学) 北京市102206

探究储能参与电力市场的运行策略、引导储能积极参与电能量交易,能够有效缓解新型电力系统的电量平衡和调频需求矛盾。为此,提出了考虑循环寿命和电能量-调频市场出清的储能自调度策略。首先,针对储能循环寿命计算过程中出现的“零交互... 详细信息

探究储能参与电力市场的运行策略、引导储能积极参与电能量交易,能够有效缓解新型电力系统的电量平衡和调频需求矛盾。为此,提出了考虑循环寿命和电能量-调频市场出清的储能自调度策略。首先,针对储能循环寿命计算过程中出现的“零交互状态”问题,设计了改进的等效循环寿命模型(MECL),能够更准确地描述储能的运行损耗。其次,根据改进的MECL和电能量-调频市场联合出清规则,构建双层Stackelberg博弈模型来描述储能自调度运行策略。再次,根据所提模型的特点,结合强对偶定理(SDT)、KKT(Karush-Kuhn-Tucker)条件和Benders分解将所提模型分解为主、子问题进行迭代求解。最后,通过多种情景对比分析,验证了考虑改进MECL的自调度运行策略能够提升储能联盟参与电能量-调频市场的运行收益。

关键词：储能电能量市场调频市场循环寿命自调度策略 Stackelberg博弈

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严家炎与施蛰存“新感觉派”争议考论

中国当代文学研究 2024年第4期 27-37页

作者：陈艳中国现代文学馆

作为新时期“新感觉派”研究的拓荒之作,严家炎《论三十年代的新感觉派小说》一文影响深远,但也引发了关于施蛰存与“新感觉派”关系的争议。本文以中国现代文学馆藏1983、1986年严家炎与施蛰存的三封佚简为材料,重返1980年代的文学史现... 详细信息

作为新时期“新感觉派”研究的拓荒之作,严家炎《论三十年代的新感觉派小说》一文影响深远,但也引发了关于施蛰存与“新感觉派”关系的争议。本文以中国现代文学馆藏1983、1986年严家炎与施蛰存的三封佚简为材料,重返1980年代的文学史现场,讨论新时期严家炎对“新感觉派”的命名和论述与“现代派”讨论的关系,以及1980年代学者与作家遇合的特殊风景。

关键词：严家炎施蛰存新感觉派新时期 “现代派”讨论

BVDV 1型和2型TaqMan双重实时荧光定量PCR检测方法的建立

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中国畜牧兽医 2022年第6期49卷 2326-2335页

作者：麻宝艺盛陈艳刘宏莹马青霞汪婷婷李健明时坤杜锐冷雪吉林农业大学中药材学院长春130118 吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 动物生产及产品质量安全教育部重点实验室长春130118 吉林省梅花鹿高效养殖和产品开发技术工程研究中心长春130118

【目的】建立一种快速检测牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV1)和2型(BVDV2)的TaqMan双重实时荧光定量PCR方法。【方法】根据GenBank上收录的95株BVDV1和BVDV25′-非编码区设计特异性引物,构建含有BVDV1和BVDV2目的片段的阳性质粒,优化反应条件... 详细信息

【目的】建立一种快速检测牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV1)和2型(BVDV2)的TaqMan双重实时荧光定量PCR方法。【方法】根据GenBank上收录的95株BVDV1和BVDV25′-非编码区设计特异性引物,构建含有BVDV1和BVDV2目的片段的阳性质粒,优化反应条件,构建标准曲线,进行双重实时荧光定量PCR方法的特异性、敏感性和重复性检测,并利用建立的实时荧光定量PCR检测方法对采自吉林省的临床样品进行检测。【结果】建立的双重实时荧光定量PCR方法最适退火温度为57.0℃,最适引物浓度为0.5μmol/L,最适探针浓度为0.3μmol/L,BVDV1和BVDV2型的标准曲线分别为:Y=-3.54X+37.36(R^(2)=0.990)和Y=-3.18X+35.95(R^(2)=0.997)。对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)和牛副流感病毒3型(BPIV3)均无特异性扩增,批内和批间变异系数均<3%,检测下限为10拷贝/μL。临床样品检测结果显示,总体阳性率为23.1%(36/156),其中BVDV1阳性率为17.9%(28/156),BVDV2阳性率为5.1%(8/156)。【结论】本研究建立了可同时快速、准确鉴别BVDV1和BVDV2的TaqMan双重实时荧光定量PCR方法,为BVDV的防控与净化提供技术支撑。

关键词：牛病毒性腹泻病毒(BVDV) TaqMan实时荧光定量PCR方法探针

PCV3吉林野毒株全基因组序列分析及其Cap蛋白的亚细胞定位

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中国兽医杂志 2023年第4期59卷 27-32页

作者：刘东旭刘宏莹苏诺葛桂阳麻宝艺盛陈艳李东丽刘艺吉林农业科技学院吉林吉林132101 吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118

为了研究吉林省猪圆环病毒3型(PCV3)野毒株遗传变异情况及其衣壳蛋白(Cap)的亚细胞定位特征,本试验对收集到的10株PCV3吉林野毒株进行全基因组序列测定和分析,并构建真核表达载体pcDNA3.1V5/HisA-Cap转染猪肺巨噬细胞(PAM);继而用本实... 详细信息

为了研究吉林省猪圆环病毒3型(PCV3)野毒株遗传变异情况及其衣壳蛋白(Cap)的亚细胞定位特征,本试验对收集到的10株PCV3吉林野毒株进行全基因组序列测定和分析,并构建真核表达载体pcDNA3.1V5/HisA-Cap转染猪肺巨噬细胞(PAM);继而用本实验室已构建的兔源PCV3-Cap多克隆抗体,通过激光共聚焦检测Cap蛋白在PAM中的定位。序列分析结果显示,10株PCV3吉林野毒株与国内外参考株之间的全基因组核苷酸序列同源性为95.8%~99.5%,处于PCV3a和PCV3b两个亚群;基因重组分析结果显示,仅中国参考株MF589102(2016年)、MH445396(2019年)和分离株JL-2在80~303 nt、840~1196 nt和1885~2001 nt处发生3处重组。激光共聚焦检测结果显示,Cap蛋白大部分定位于细胞核,少部分定位于细胞质。结果表明,目前吉林省PCV3比较保守,没有出现较大变异,Cap蛋白在PAM的细胞核和细胞质中均有分布。

关键词：野毒株猪圆环病毒3型 Cap蛋白亚细胞定位